Терминатор комплекс: БМПТ "Терминатор" и комплекс "Бук-М3" впервые задействуют в параде Победы в Екатеринбурге

Содержание

МНОГОФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ ПОСЕВНОЙ КОМПЛЕКС «ТЕРМИНАТОР» Hatzenbichler

ДЛЯ ЗЕРНОВЫХ И ПРОПАШНЫХ КУЛЬТУР 6, 9, 12 И 18м

«Терминатор»- фаворит на рынке посевной техники, многофункциональный комплекс, предназначенный для выполнения максимального количества агротехнических работ. В первую очередь он необходим для осуществления построчного высева зерновых и мелкосеменных культур. В том числе применяется для точного высева пропашных культур c одновременной, предварительной подготовкой почвы к посеву с внесением удобрений. Посевной комплекс «Терминатор» в зависимости от комплектации предназначен для хозяйств с разными системами земледелия.

Индивидуальность «Терминатора» заключается в том, что посевной комплекс состоит из основной рамы и дополнительных крыльев по 3 метра каждое, которые соединены с главной рамой при помощи системы плавающих гидроцилиндров. Это гарантирует независимое движение крыльев относительно друг друга при шероховатости обрабатываемой поверхности, что сохраняет глубину обработки почвы и посева.

На сегодняшний день посевной комплекс «Терминатор» не имеет аналогов в профиле своей многофункциональности. Конструкцию посевного комплекса «Терминатор» отличает возможность монтировки на основной раме сменных секций предпосевного культиватора с S-образной стойкой, стрельчатой либо долотообразной лапой, подрезающие сорняки, разрыхляющие и выравнивающие почву. Или же секции дискатора, которые обрабатывают почву глубиной до 15 см. Секции могут выступить и в роли отдельных орудий ширина захвата 3 метра, с трехточечной навеской. Не исключена возможность крепления к основной раме комплекса, как и использование отдельно, в виде самостоятельного орудия с малыми тракторами МТЗ-82.

Данный вид техники это реальная возможность не приобретать такие агрегаты, как широкозахватный культиватор, дискатор ввиду их соединения в «Терминаторе».

Если Вы снимите высевающие секции, то получите широкозахватное орудие, которое будет полезно от ранней весны до глубокой осени. Сменные секции дополнены резиновым прикатывающим катком Farmflex, исключая налипание почвы, разбивая комья и прикатывая почву, подготавливая ее к севу, идеально выравнивая поверхность.

По желанию клиента, возможна установка ребристо-планчатого катка. Установка глубины обработки осуществляется четырьмя разбивочными болтами на параллелограмме на одной 3-метровой секции. То есть в зависимости от комплектации, комплекс может использоваться как при традиционной схеме по парам (культиватор), так и по минимальной технологии (дискатор).

УралВагонЗавод

Масса, т	48+2%
Экипаж, чел	5 (командир, наводчик, два оператора курсовых АГ, механик-водитель)
Удельная мощность, кВт/т (л.с./т), не менее	15,03 (20,42)
Среднее удельное давление на грунт, кПа(кгс/см²), не более	96 (0,98)
ОСНОВНЫЕ РАЗМЕРЫ
Длина корпуса по грязевым щиткам и решётчатым экранам, м	7,2
Ширина по бортовым экранам, м	3,8
Ширина по гусеницам, м	3,37
Высота по крыше башни, м	1,94
Высота по панорамному прицелу командира, м	3,44
Клиренс, мм	406
ЭКСПЛУТАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
Максимальная скорость по шоссе, не менее, км/ч	60
Запас хода с кормовыми топливными бочками, не менее, км	550
Преодолеваемые препятствия:
Максимальный угол подъема, град	30
— максимальный угол крена, град.	25
— ширина рва, м	2,6…2,8
— высота стенки, м	0,85
Глубина преодолеваемой водной преграды:
— брода (без подготовки), м	1,2
— брода (с подготовкой в течение 5 мин), м	1,8
— с установкой ОПВТ, м	5,0
КОМПЛЕКС ВООРУЖЕНИЯ
ОСНОВНОЕ ВООРУЖЕНИЕ
Место размещения	вынесено в надстройку на башне, стабилизировано по горизонтали и вертикали
Автоматическая пушка, количество × калибр,	2 спаренные × 30-мм,
Техническая скорострельност, выст./мин	до 600
Тип питания АП	одноленточное из магазинов в БО
Углы наведения, град. :
— в горизонтальной плоскости	360 (с башней)
— в вертикальной плоскости	-5…+45
Комплекс управляемого вооружения, марка	“Атака-Т”
Углы наведения ПУ, град.:
— в горизонтальной плоскости	360 (с башней)
— в вертикальной плоскости	— 5…+25
ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ВООРУЖЕНИЕ
Место размещения	вынесено в отсеки на правой и левой надгусеничных полках, стабилизировано по вертикали
Автоматический гранатомёт
Количество × калибр, марка	2 × 30, АГ-17Д
Углы наведения, град.:
— в горизонтальной плоскости	от 5 (влево) до 27 (вправо) для правого АГ, от 27 (влево) до 5 (вправо) для левого АГ
— в вертикальной плоскости	-5,5…+20
ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ВООРУЖЕНИЕ
Место размещения	спаренное в блоке АП
Пулемёт
Количество × калибр, марка	1 × 7,62-мм, 6П7 или 6П7К (ПКТМ)

Посевной комплекс Terminator TH(от 6 до18м

Посевной комплекс «Терминатор» позволяет отказаться от приобретения таких агрегатов, как широкозахватный предпосевной культиватор, стерневой культиватор, дискатор поскольку он объединяет это все в себе одном. Отсоеденяяя высевающие секции мы получаем широкозахватное орудие, позволяющее использовать этот агрегат с ранней весны до поздней осени, а не только в период посевной кампании.

Посевной комплекс «Terminator» обладает высокой маневренностью за счет свободно ориентированных на 360 градусов стоек опорных колес. Это позволяет разворачиваться ему по минимальному радиусу вокруг одной крайней стойки и дает возможность работать на ограниченных площадях.

В зависимости от комплектации, комплекс может использоваться как при традиционной схеме по парам (предпосевной или стерневой культиватор), так и по минимальной технологии (дискатор, стерневой культиватор).

Все секции рабочих органов, как и высевающие, взаимозаменяемы и легко отсоединяются от основной рамы, что позволяет оперативно изменять конфигурацию орудия и выполнять широкий комплекс полевых работ в сжатые сроки. То есть, Вы можете выполнять посев зерновых культур или пропашных (точный высев), обработку почвы культиватором, дискатором или стерневым культиватором, в зависимости от комплектации посевного комплекса.

Рабочая ширина захвата: от 6, 9,12 и 18 метров.

Приемущества:

Посевной комплекс Терминатор осуществляет 5 операций за один проход: предпосевную подготовку,

— внесение удобрений с заделкой их в почву,

— выравнивание поверхности почвы и дробление комков,

— высев семян,

— прикатка семян по каждой строчке.

Благодаря сменным секциям с различными рабочими органами, посевной комплекс работает одинаково хорошо как по обработанной почве, так и по стерне.

В посевном комплексе «Terminator» работают две независимые системы: внесение удобрений и высев семян.

Посев осуществляется через независимые высевающие диски-сошники на параллелограммах за сменными секциями с рабочими органами и катками.

ПК «Terminator» можно оперативно трансформировать в широкозахватный предпосевной или стерневой культиватор либо дискатор, как с одновренной внесением удобрений, так и без внесения удобрений. Очень прочная основная рама.

Рабочая ширина одной секции с рабочими органами — 3м. Благодаря этому давление на почву распределяется равномерно по всей ширине захвата вне зависимости от перепадов рельефа. Каждая из секций имеет 3-х точечную навеску и может работать отдельно от комплекса, например с МТЗ 82. Секции взаимозаменяемы.

Равномерное внесение удобрений по всей ширине захвата.

Система двойных дисков на параллелограммах обеспечивает равномерную глубину посева независимо от рельефа местности по всей ширине захвата и исключает забивание.

Простая регулировка уровня глубины механическим способом.

Благодаря двум колёсам спереди и двум колёсам сзади обеспечивается (так называемое) тандемное ведение. Это позволяет развивать рабочую скорость до 12 км/ч.

Посевной комплекс «Терминатор» многофункционален, что позволяет выполнять широкий комплекс полевых работ в сжатые сроки и использовать его с ранней весны до поздней осени как по традиционной технологии, так и по минимальной технологии.

Наименование параметров Модель

ТН-6 ТН-9 ТН-12 ТH-18

Ширина захвата 6м 9м 12м 18м

Основная рама 6 3 6 6

Кол-во секций — 2 2 4

Кол-во секций с раб орудиями по 3м 2 3 4 6

Кол-во опорных колес:

— передних 4 6 6 8

— задних 4 6 6 8

Количество рядов рабочих органов

— культиватор 3

— груббер 2

— дискатор 2

Количество рабочих органов:

— культиватор 42 63 84 126

— груббер/рыхлительные звёздочки 16/16 24/24 32/32 48/48

— дискатор 44 66 88 132

Глубина заделки рабочих органов:

— культиватор 10 см

— груббер 25 см

— дискатор 15 см

Прикатывающие катки Резиновый Farmflax (390мм), ребристо-планчатый (420 мм)

Регулировка глубины раб. органов параллелограмм

Высеивающий механизм:

для зерновых культур Двухдисковый сошник с прикат. катком 350мм

для пропашных культур Двухдисковый сошник или анкер с 2-мя или одним широким прикат. колесом

Механизм регулировки глубины высева Механический с шагом 5 кг и 20 кг.

Ширина междурядья (базовое):

— для зерновых 15 см (по заказу 12,5см)

— для пропашных 75 см (по заказу 45см)

Кол-во сошников 40 60 80 120

Кол-во рядков (пропашные, 75см) 8 12 16 24

Ход подвески сошника 25 см

Бункер металл. пластиковый

Объем бункера 8000 8000 8000/14000 14000

Кол-во секций бункера 2 2 2 или 3 3

Подача удобрений и семян Вентилятор от гидромотора

Регулировка нормы высева:

— для зерновых От 3,5 кг до 400 кг

— для пропашных От 35 кг до 300 кг

Загрузка бункера Шнек с верх. и ниж. уровнем управления

Время загрузки 15 мин 15 мин 15 или 20 мин 20 мин.

Опорных колес бункера 2

Ширина в трансп. положении 6,2 4,5 6,2 6,2

Высота в трансп. положении 4,7

Рабочая скорость: Зерновые 10-12 км/час, пропашные 8 км/час

— при культивации 12 км/час

— при дисковании 14-15 км/час

Производительность, га/сут 80-100 130-160 180-220 150-300

Мощность трактора 180 лс 280 лс 380 лс 450 лс

Опции Электронный контроль высева на каждый сошник

Многофункциональный посевной комплекс Терминатор

Описание


		Уникальность данного орудия в том, что посевной комплекс имеет основную раму и дополнительные крылья по 3 метра каждый, соединенные с основной рамой через систему плавающих гидроцилиндров. Это обеспечивает независимое перемещение крыльев друг относительно друга при неровностях обрабатываемой поверхности, что способствует выдерживанию глубины обработки почвы, и глубины посева.


Посевной комплекс «Терминатор» на сегодняшний день не имеет аналогов в плане его многофункциональности.


		Конструктивная особенность посевного комплекса «Терминатор» в том, что на основной раме комплекса может монтироваться, в зависимости от необходимости, сменные секции предпосевного культиватора с S-образной стойкой, стрельчатой либо долотообразной лапой, которые подрезают сорняки, рыхлят и выравнивают почву, либо секции дискатора, обрабатывающего почву на глубину до 15 см. Данные секции представляют собой также отдельные орудие шириной захвата 3 метра, с трехточечной навеской и могут монтироваться как на основной раме комплекса, так и использоваться отдельно, как самостоятельное орудие с малыми тракторами МТЗ-82.


Посевной комплекс «Терминатор» позволяет отказаться от приобретения таких агрегатов, как широкозахватный культиватор, дискатор поскольку он объединяет это все в себе одном.


		Снимая высевающие секции мы получаем широкозахватное орудие, позволяющее использовать этот агрегат с ранней весны до поздней осени, а не только в период посевной кампании.



		Все сменные секции оснащены резиновым прикатывающим катком Farmflex, который не позволяя налипать почве, хорошо разбивает комья и прикатывает почву, готовя ее к севу, при этом идеально выравнивая поверхность. По желанию, может быть установлен ребристо-планчатый каток. Установка глубины обработки осуществляется четырьмя разбивочными болтами на параллелограмме на одной 3-метровой секции. То есть в зависимости от комплектации, комплекс может использоваться как при традиционной схеме по парам (культиватор), так и по минимальной технологии (дискатор).



		Сменные 3-метровые секции предпосевного культиватора имеют трех балочную конструкцию, снаряженную пружинными S-образными стойками со стрельчатыми лапами шириной 150 мм со сплошным перекрытием в количестве 21 шт. Для проведения мероприятий по задержанию влаги на S-образных стойках могут ставиться долота для нарезания бороздок.


		Образцы рабочих органов: S-образная стойка, стрельчатая лапа, долото.


		Дискатор предназначен как для традиционной, так минимальной основной и предпосевной обработки почвы без предварительной вспашки (вместо вспашки) под зерновые, технические и кормовые культуры, а также для омолаживания задерневелых лугов и лущения стерни. Орудие позволяет сократить количество обработок почвы в 3-5 раз за счет совмещения их в одной операции. Дисковые секции двух балочные. На каждой секции дискатора устанавливается 22 диска диаметром 540 мм каждый на своей опоре, через систему резиновых демпферов. Оптимально подобранное соотношение размера дисков к углу установки и углу наклона к расстоянию между дисками позволяет улучшить качество обработки (крошения, выравнивания поверхности-, измельчения растительных остатков и их заделка) и обеспечивает меньшую зависимость от погодных условий.



		Перед рабочими орудиями (культиватором, дискатором), через систему распылителей путем сплошного высева вносятся удобрения, которые полностью заделываются в почву. Применение системы сплошного внесения удобрений позволяет добиться равномерности их распределения по поверхности, обеспечивая оптимальные питательные условия для развития растения. Равномерное внесение удобрений позволяет избежать чрезмерной концентрации удобрений в ложе высева и способствует равномерности всходов, тем самым уменьшая вероятность повреждения семян.



		Высевающие секции представляют собой отдельно подрессоренные параллелограммы с высевающими дисками-сошниками, которые позволяют идеально регулировать глубину высева, посредством чего достигается равномерность высева, всходов, экономия посевного материала и повышения урожайности на 5-10%.



		На подресоренном параллелограмме установлен дисковый сошники из двух износостойких дисков, смещенных друг относительно друга, что облегчает заглубление сошника путем врезание переднего диска и обеспечивается не забивание сошника . Для правильного формирования посевного ложа диски сошника имеют оптимально подобранные угол крена и угол атаки. За каждым сошником идет прикатывающий каток. Каждый высевающий сошник имеет свою независимую подвеску, имеющую ход до 30 см, за счет чего достигается великолепное копирование рельефа, и как следствие постоянная глубина высева, что способствует равномерности всходов.



		Важным фактором повышения урожайности сельскохозяйственных культур является равномерность заделки семян на заданную глубину и равномерного их распределения по площади питания. А чем они равномернее размещены, тем лучше условия питания и освещения растений, меньше конкуренция и , следовательно выше урожай. Оптимальное распределение семян по сошникам осуществляется через систему распределительных грибков. Более равномерное распределение семян обеспечивает более благоприятные условия для получения семенами влаги, то есть перенасыщение семян в посевном ложе может привести к нехватке влаги и следовательно, неравномерности всходов.



		Именно использование построчного высева позволяет обеспечить более равномерное распределение семян по высевающей площади, избежав перенасыщение семенами посевного ложа, что гарантирует повышенную всхожесть и лучшее развитие растения. Раздельное внесение семян и удобрений исключает плохое прорастание из-за чрезмерного воздействия удобрений. Установка заглубления механическая, на каждом сошнике с шагом по 5 кг, а на основной раме с шагом 25 кг и активная система гидродавления на высевающий аппарат.



		Посевной комплекс «Терминатор» оснащается американским бункером фирмы Flexi Coil 8000 литров (2 отсека 60%, 40%), либо бункером 14000 литров (3 отсека 60%, 20%, 20%). Для ускорения загрузки и выгрузки материала прицепной бункер комплектуется шнековым транспортером. Транспортер прост в эксплуатации, для работы на нем достаточно одного человека. Загрузка бункера 14000 литров происходит через шнек за 17 минут. Управление шнека гидравлическое, которое для удобства может осуществляться как снизу, так и сверху бункера. Бункеры с автоматизированной регулировкой нормы внесения удобрений и семян (от 2,5 до 400 кг). Бункер идет впереди основного орудия, не допуская уплотнения почвы. Увеличенные по ширине колеса позволяют значительно уменьшить нагрузку бункера на почву. На бункерах имеются лестницы и площадки обслуживания, которые обеспечивают удобный доступ к люкам бункеров.

Посевной комплекс Terminator TH

	ТН-6	ТН-9	ТН-12	ТH-18
Ширина захвата	6м	9м	12м	18м
Основная рама	6	3	6	6
Кол-во секций	—	2	2	4
Кол-во секций с раб орудиями по 3м	2	3	4	6
Кол-во опорных колес:
— передних	4	6	6	8
— задних	4	6	6	8
Количество рядов рабочих органов
— культиватор	3
— груббер	2
— дискатор	2
Количество рабочих органов:
— культиватор	42	63	84	126
— груббер/рыхлительные звёздочки	16/16	24/24	32/32	48/48
— дискатор	44	66	88	132
Глубина заделки рабочих органов:
— культиватор	10 см
— груббер	25 см
— дискатор	15 см
Прикатывающие катки	Резиновый Farmflax (390мм), ребристо-планчатый (420 мм)
Регулировка глубины раб. органов	параллелограмм
Высеивающий механизм:
для зерновых культур	Двухдисковый сошник с прикат.катком 350мм
для пропашных культур	Двухдисковый сошник или анкер с 2-мя или одним широким прикат. колесом
Механизм регулировки глубины высева	Механический с шагом 5 кг и 20 кг.
Ширина междурядья (базовое):
— для зерновых	15 см (по заказу 12,5см)
— для пропашных	75 см (по заказу 45см)
Кол-во сошников	40	60	80	120
Кол-во рядков (пропашные, 75см)	8	12	16	24
Ход подвески сошника	25 см
Бункер	металл.	пластиковый
Объем бункера	8000	8000	8000/14000	14000
Кол-во секций бункера	2	2	2 или 3	3
Подача удобрений и семян	Вентилятор от гидромотора
Регулировка нормы высева:
— для зерновых	От 3,5 кг до 400 кг
— для пропашных	От 35 кг до 300 кг
Загрузка бункера	Шнек с верх. и ниж. уровнем управления
Время загрузки	15 мин	15 мин	15 или 20 мин	20 мин.
Опорных колес бункера	2
Ширина в трансп. положении	6.2	4.5	6.2	6.2
Высота в трансп. положении	4.7
Рабочая скорость:	Зерновые 10-12 км/час, пропашные 8 км/час
— при культивации	12 км/час
— при дисковании	14-15 км/час
Производительность, га/сут	80-100	130-160	180-220	150-300
Мощность трактора	180 лс	280 лс	380 лс	450 лс
Опции	Электронный контроль высева на каждый сошник

16209 Посевной комплекс Hatzenbichler Terminator TH 9, 2013 ЧП Техника

               Одним из главных требований к качественному проведению посева является качественная подготовка почвы за один проход. Высокое качество обработки означает формирование ровной поверхности поля, равномерную глубину обработки, формирование заданной структуры почвы в обработанном слое, полное уничтожение сорняков и равномерную заделку удобрений. Всем данным требованиям удовлетворяет посевной комплекс «Terminator».
               Многофункциональный посевной комплекс «Terminator»- комплексно-модульное орудие, предназначенное для выполнения большого числа агротехнических работ. Прежде всего он предназначен для проведения построчного высева зерновых и мелкосемянных культур, а также для точного высева пропашных культур c одновременной, предварительной подготовкой почвы под посев с внесением удобрений. В зависимости от комплектации посевной комплекс «Terminator» подходит для хозяйств со смешанной системой земледелия, которые применяют как предпосевную культиваторную подготовку почвы с заделыванием органических и минеральных удобрений сплошного внесения, так и посев различных культур по минимальной технологии. Посевной комлекс «Terminator», может комплектоваться высевающими секциями для высева как зерновых так и пропашных культур.
               Уникальность данного орудия в том, что посевной комплекс имеет основную раму и дополнительные крылья по 3 метра каждый, соединенные с основной рамой через систему плавающих гидроцилиндров. Это обеспечивает независимое перемещение крыльев друг относительно друга при неровностях обрабатываемой поверхности, что способствует выдерживанию глубины обработки почвы, и глубины посева.

Конструктивная особенность посевного комплекса «Терминатор» в том, что на основной раме комплекса могут монтироваться, в зависимости от необходимости:

Секции трёхрядного предпосевного культиватора с S-образной стойкой, стрельчатой лапой 150 мм.
Секции двухрядного дискатора с диаметром дисков 510 мм.,
Секции двухрядного стерневого культиватора с одним рядом смесительных звездочек и прикатывающим катком.

Внесение удобрений на посевном комплексе «Terminator» происходит перед рабочими орудиями (культиватором, дискатором), через систему распылителей путем сплошного высева вносятся удобрения, которые полностью заделываются в почву. Применение системы сплошного внесения удобрений позволяет добиться равномерности их распределения по поверхности, обеспечивая оптимальные питательные условия для развития растения. Равномерное внесение удобрений позволяет избежать чрезмерной концентрации удобрений в ложе высева и способствует равномерности всходов, тем самым уменьшая вероятность повреждения семян. На секциях со стерневым культиватором может устанавливаться система внесение удобрений под лапу.

Зенитный ракетно-пушечный комплекс PASARS-16 Terminator (Сербия)

Сухопутные войска Сербии не могут похвастать большим количеством новой материальной части. Большинство остающихся на вооружении образцов оружия и техники было произведено еще несколько десятилетий назад, что соответствующим образом сокращает потенциал армии.

Подобная ситуация характерна для всех родов войск, в том числе и для войсковой противовоздушной обороны. Тем не менее, сербская промышленность регулярно предпринимает попытки исправления имеющихся недостатков и предлагает новые варианты военной техники. В прошлом году широкой публике впервые был представлен зенитный ракетно-пушечный комплекс PASARS-16 Terminator.
Перспективный образец военной техники, представляющий определенный интерес для армейской ПВО, впервые был показан 22 октября 2016 года. В этот день в г. Нови-Сад состоялись праздничные мероприятия, посвященные годовщине освобождения города от немецко-фашистских захватчиков. В рамках праздника оборонные предприятия страны, в том числе работающие в городе, организовали показательные мероприятия с демонстрацией своих новейших разработок. Были показаны самолеты, катера и сухопутная бронетехника отечественной разработки. Одним из участников парада стал опытный образец перспективного ЗРПК PASARS-16.
Общий вид ЗРПК PASARS-16 Terminator

Как сообщается, головным разработчиком нового проекта является белградский Военно-технический институт, известный множеством своих проектов в самых разных областях. Кроме того, к работам привлекались некоторые сторонние организации. Так, требуемое шасси с защищенной кабиной было предоставлено заводом Zastava kamioni. На правах поставщиков отдельных комплектующих к работам привлекались другие компании, в том числе зарубежные. Некоторое особенности перспективной машины позволяют предполагать, что часть компонентов зенитного комплекса была снята с хранения. Окончательная сборка прототипа осуществлялась в Белграде на заводе Srboauto.

Перспективный ракетно-пушечный комплекс был разработан с учетом необходимости переоснащения армии современными системами противовоздушной обороны. Предлагаемый облик боевой машины позволяет решать задачи ПВО на марше или при защите стационарных объектов, таких как войска в местах сосредоточения. «Терминатор» должен отличаться высокой подвижностью на существующих дорогах или на пересеченной местности. Для поражения различных целей предлагается применять как ракетное, так и артиллерийское вооружение. При этом, как следует из опубликованных данных, проект позволяет обойтись только уже известными серийными системами и не требует выпускать значительное число совершенно новых агрегатов.

ЗРПК PASARS-16 базируется на трехосном полноприводном колесном шасси типа FAP-2026BS/AV, переработанном компанией «Застава». Эта машина была создана на основе уже существующей техники, но имеет некоторые важные отличия. Главное нововведение касается применения оригинального броневого корпуса, способного защитить экипаж, двигатель и другие внутренние агрегаты от атаки с применением стрелкового оружия. При этом доработанное шасси имеет достаточно высокие характеристики и обеспечивает необходимую мобильность.

Шасси FAP-2026BS/AV переделывалось из существующей машины с учетом требований нынешнего времени. В первую очередь, это сказалось на конструкции броневого корпуса, который, по всей видимости, получил не только баллистическую, но и противоминную защиту. Шасси комплекса PASARS-16 строится на основе продольной рамы, к которой крепятся все необходимые агрегаты. С целью повышения уровня защиты экипажа была изменена компоновка передней части шасси. Дизельный двигатель и сопряженные с ним элементы трансмиссии остались на своем месте, тогда как рабочее место водителя сдвинулось назад. В результате этого грузовое шасси, в отличие от своих предшественников, теперь имеет капотную компоновку.

Левый борт

На передней части рамы крепится броневой корпус, защищающий экипаж и силовую установку. Корпус имеет характерную граненую форму и состоит из некоторого числа прямых броневых листов разных размеров. Лобовая проекция корпуса прикрыта металлическим бампером, над которым находится решетка радиатора. Предусматривается использование расходящихся бортов и наклоненной вперед крыши моторного отсека. Непосредственно за двигателем помещается кабина экипажа. Она имеет крупное лобовое бронестекло, а также комплектуется изогнутыми бортами, в которых располагаются проемы для дверей. Над водительским местом в крыше кабины помещается люк. Для повышения уровня защиты от взрывных устройств днище кабины имеет V-образный профиль. Кроме того, кабина поднята над рамой и находится на достаточно большом расстоянии от земли.

Как и базовая техника семейства FAP-2026BS/AV, новое шасси для зенитного комплекса имеет трехосное шасси с колесной формулой 6х6. Используется дизельный двигатель Mercedes Benz OM 906 LA мощностью 280 л.с. или ему подобный. При помощи механической трансмиссии крутящий момент распределяется на все колеса, являющиеся ведущими. Предусматривается использование колес с шинами большого размера, оснащенных автоматической системой подкачки и изменения давления.

Задняя часть рамы базового шасси была усилена и оснащена некоторым оборудованием, необходимым для установки боевого модуля. Кроме того, перед второй парой колес и позади третьей смонтированы две пары гидравлических аутригеров. Интересным образом была решена проблема размещения и привода опор. Сами аутригеры выполнены телескопическими и могут раздвигаться. Перемещение опор в вертикальной плоскости осуществляется при помощи четырех отдельных гидроцилиндров, закрепленных выше узлов их подвески. Для максимального увеличения опорной поверхности все аутригеры размещаются под значительными углами к продольной оси машины.

Непосредственно над двумя задними осями на раме помещается опорная платформа с узлом монтажа поворотного боевого модуля. Она представляет собой многоугольную в плане конструкцию небольшой высоты с необходимыми устройствами. Удлиненный задний элемент рамы служит опорой для кожуха вспомогательной силовой установки, осуществляющей энергоснабжение основных систем при выключенном основном двигателе.

Правый борт

На опорной платформе шасси предлагается установка поворотной башни со всем необходимым вооружением, вспомогательными системами и кабиной оператора. Конструкторами Военно-технического института предлагается использование башни сложной формы, имеющей собственное бронирование. Башня отличается достаточно сложными и несимметричными обводами, что связано с необходимостью установки самых разных агрегатов.

Левая часть башни, отличающаяся увеличенной высотой, отдана под размещение одноместной операторской кабины. Оператор должен попадать на свое место при помощи бортовой двери. Для визуального наблюдения за обстановкой в его распоряжении имеются два небольших окна в лобовом и бортовом листе. Специфической особенностью ЗРПК PASARS-16 является не слишком большая ширина кабины, что может затруднять работу оператора.

Справа от кабины помещается качающаяся установка с оптико-электронным оборудованием. В ее составе имеется несколько приборов разных размеров и различного назначения. Подробные сведения на этот счет отсутствуют, но есть основания полагать, что комплекс получил набор из видеокамеры, тепловизора и лазерного дальномера. Радиолокационные средства обнаружения отсутствуют. Наводить оружие предлагается только при помощи оптики.

В центре башни поместили качающуюся артиллерийскую установку с орудием Bofors L70 калибра 40 мм. Эта пушка, имеющая автоматику на основе отдачи ствола, способна использовать выстрелы нескольких типов и разгонять снаряды до скоростей более 1000-1100 м/с. Скорострельность составляет 240 выстрелов в минуту. Эффективная дальность стрельбы – 3 км. Подача боеприпасов осуществляется сверху из секторного магазина. На опубликованных разработчиком фотографиях видно, как на новой башне размещается магазин емкостью несколько десятков снарядов. Автоматическая пушка предназначается для атаки целей, находящихся на минимальном расстоянии от комплекса.

Боевой модуль и его оснащение: ракеты RLN-IC, пушка Bofors L70, оптико-электронные устройства и кабина оператора

Правый борт башни отдан под размещение пусковой установки управляемых ракет. В крупном вырезе башни монтируется рама достаточно простой конструкции, на которой располагаются две пусковые направляющие для ракет. Размещенная ближе к центру башни ракета располагается немного выше. Пусковая установка для ракет имеет возможность наведения в вертикальной плоскости.

Зенитный комплекс PASARS-16 должен использовать управляемые ракеты «земля-воздух» типа RLN-IC. Это изделие представляет собой вариант глубокой модернизации советского изделия Р-13М, относившегося к классу «воздух-воздух». Путем использования нового двигателя и иной инфракрасной головки самонаведения сербским конструкторам удалось довести дальность стрельбы до 12 км и досягаемость по высоте до 8 км. Ракета имеет цилиндрический корпус с увеличенным диаметром хвостовой части. В носовой и хвостовой частях корпуса помещается два набора Х-образных плоскостей. После модернизации изделие сохранило стержневую боевую часть массой более 11 кг.

Для поиска целей и наведения вооружения оператор должен использовать имеющееся оптико-электронное оборудование. Кроме того, возможно получение целеуказания от радиолокационной станции Žirafa. Для взаимодействия с другой техникой самоходная машина оснащается современными средствами связи. Также на борту имеются системы спутниковой навигации.

Перед открытием огня оператор имеет возможность навести вооружение на цель. Наводка осуществляется при помощи дистанционно управляемых электрических приводов. Для упрощения конструкции боевого модуля и сокращения времени реакции оптико-электронный блок, пушка и пусковая установка ракет имеют общие приводы и качаются синхронно. Горизонтальная наводка так же осуществляется одновременно, за счет поворота всей башни.

Зенитные ракеты крупным планом

Экипаж боевой машины должен состоять из трех человек. Водитель и командир находятся в кабине шасси, тогда как оператор зенитных систем находится в соответствующем отсеке башни. Как следует из данных, опубликованных производителем и зарубежной прессой, используется максимальное число автоматизированных систем. В частности, развертывание на позиции производится без покидания пределов защищенных объемов. На выполнение всех операций и начало боевой работы уходит не более 1 минуты.

Параметры подвижности зенитного комплекса не уточнялись. Вероятно, шасси армейского грузового автомобиля позволяет развивать достаточно высокую скорость на шоссе, а также перемещаться по бездорожью с некоторым сокращением характеристик. При этом ЗРПК PASARS-16 Terminator получает возможность сопровождать и защищать автоколонны на маршах и стоянках. Кроме того, имеющаяся унификация боевой и транспортной техники позволяет в определенной мере упростить их совместную эксплуатацию.

Первый показ перспективного сербского зенитного комплекса пока остается единственным. До настоящего времени опытная машина больше не демонстрировалась публично. Вероятно, сейчас она проходит необходимые испытания и доводку, по результатам которых может быть предложена военному ведомству Сербии. Площадкой для нового показа интересного образца может стать любая военно-техническая выставка в Сербии или в зарубежных странах.

Дальнейшая судьба зенитного ракетно-пушечного комплекса PASARS-16 пока остается под вопросом. Представленная в прошлом году боевая машина представляет определенный интерес с технической точки зрения, а также показывает возможности сербской промышленности в деле создания новых образцов военной техники. В то же время, в существующем виде «Терминатор» имеет ряд характерных черт, которые могут считаться явными недостатками и резко сокращать потенциал машины.

Один из пультов управления

Явным плюсом предложенной боевой машины является наличие ракетного и артиллерийского вооружения. Безотносительно типа примененного оружия комбинирование систем разных классов позволяет силами одного комплекса создать некое подобие эшелонированной ПВО. Всего одна машина в теории способна атаковать воздушные цели на разных расстояниях при помощи наиболее эффективного в конкретном случае оружия. Также важной особенностью системы PASARS-16 является использование доработанного серийного шасси, обеспечивающего приемлемую подвижность и упрощающего эксплуатацию.

Тем не менее, имеющиеся недостатки могут помешать реализации всех существующих положительных черт. Так, серьезной проблемой комплекса Terminator можно признать наличие только оптико-электронных систем обнаружения. В отличие от радиолокационных станций, такое оборудование может одновременно следить только за одним сектором, а кроме того, оно невыгодно отличается меньшей дальностью обнаружения. Как следствие, в определенных условиях дальность обнаружения цели может быть заметно меньше дальности полета ракеты.

При всех специфических ограничениях и проблемах, зенитные ракеты RLN-IC все еще могут использоваться для решения поставленных перед ними задач. Тем не менее, на новой башне удалось разместить только две направляющие для ракет. Более того, боеприпасы перевозятся открыто и не имеют никакой защиты. Боевой потенциал и живучесть комплекса PASARS-16 могут быть заметно повышены при помощи защитных кожухов и большего числа направляющих. Иным способом исправления этих недостатков может стать интеграция ракет другого типа, транспортируемых в защищенных контейнерах.

Проблема недостаточного боекомплекта относится не только к ракетам RLN-IC, но и к 40-мм автоматической пушке. На имеющейся башне удалось разместить секторный магазин ограниченной емкости, а его замена в боевой обстановке не представляется возможной. Более выгодным с точки зрения наращивания боекомплекта выглядит ленточное боепитание, но для его использования комплекс нуждается в замене орудия. При сохранении пушки «Бофорс» останется и проблема малого боекомплекта.

Зенитный комплекс в боевой конфигурации. Виден крупный магазин пушки

В контексте модернизации или замены орудия весьма полезным нововведением может стать использование боеприпасов с программируемым взрывателем. Тем не менее, для этого требуются иная пушка с соответствующими возможностями, а также улучшенная система управления огнем, способная формировать команды для взрывателей. В существующем виде, однако, «Терминатор» комплектуется орудием, способным использовать только стандартные фугасные и бронебойные снаряды.

В представленной конфигурации ЗРПК PASARS-16 Terminator может представлять интерес только с технической точки зрения. Кроме того, сам факт появления такой боевой машины показывает желание Сербии развивать свои вооруженные силы всеми доступными способами. Тем не менее, интерес к новой зенитной системе вряд ли может быть практическим. При всех своих положительных особенностях, комплекс имеет массу недостатков. Из-за них по своим техническим и боевым характеристикам «Терминатор», как минимум, не превосходит существующие системы аналогичного назначения и не имеет заметных преимуществ перед ними.

Насколько известно, вооруженные силы Сербии пока не проявили интереса к новой разработке Военно-технического института и смежных предприятий. Сведения о появлении потенциальных зарубежных заказчиков тоже отсутствуют. В то же время сербская армия нуждается в современных комплексах противовоздушной обороны, и поэтому PASARS-16 может иметь некоторые шансы попасть в войска. При этом военные могут выступить с требованиями о переработке проекта с целью получения более высоких характеристик. Модернизированный вариант «Терминатора» получит определенные шансы поступить на вооружение.

Имеющиеся сведения о проекте ЗРПК PASARS-16 Treminator позволяют утверждать, что на данный момент эта боевая машина отвечает далеко не всем современным требованиям к технике подобного класса. Поэтому новая разработка сербской промышленности вряд ли сможет реализовать все преимущества, характерные для предложенного облика, и благодаря этому поступить на вооружение. Проект пока выглядит «сырым» и нуждается в солидной доработке. Будут ли разработчики совершенствовать свой комплекс, в чем будет заключаться обновление и к каким результатам оно приведет – покажет время.

По материалам сайтов:
https://tangosix.rs/
http://zonwar.ru/
http://ffbkomerc.co.rs/
https://mycity-military.com/
http://strangernn.livejournal.com/

Терминатор проксимальной части промотора рДНК усиливает инициацию, предотвращая разрушение стабильного транскрипционного комплекса, вызванное считыванием полимеразы

Мы исследовали механизм, с помощью которого инициация транскрипции на промоторе рДНК мыши усиливается терминаторным элементом РНК-полимеразы I, который находится прямо перед ним. Используя матрицы, в которых терминаторные элементы вместо этого расположены на противоположной стороне плазмиды, а не проксимальнее промотора, или условия, при которых транскрипция терминируется в другом месте плазмиды в результате УФ-индуцированных поражений, мы показываем, что стимулирующий эффект терминатора не зависит от положения. .Таким образом, мышиные терминаторные элементы не стимулируют с помощью ранее постулируемой модели «сквозного усиления», в которой терминированные полимеразы передаются соседнему промотору в согласованной реакции. Независимость от положения и зависимость терминатора от ориентации также делает маловероятным, что терминатор функционирует как промоторный элемент или как энхансер. Вместо этого терминаторы служат для увеличения инициации, предотвращая чтение полимеразами полностью вокруг плазмиды и через промотор выше по течению, событие, которое, как мы показываем, мешает последующим раундам инициации.Примечательно, что это вмешательство в транскрипцию возникает из-за того, что прохождение полимеразы через промотор разрушает в остальном стабильный транскрипционный комплекс, специфически высвобождая связанный фактор транскрипции D. Эти высвобожденные молекулы D могут затем связываться с другими матрицами и активировать их экспрессию. Интерференция транскрипции рДНК не возникает из-за стерических препятствий для связывания новых молекул полимеразы и аналогичным образом не высвобождает компетентную к инициации полимеразу (фактор С). Эти исследования также убедительно продемонстрировали, что множественные циклы транскрипции получаются из матричных молекул рДНК in vitro.

Мутации элемента-терминатора влияют как на эффективность, так и на положение терминации РНК-полимеразы I у Schizosaccharomyces pombe | Исследование нуклеиновых кислот

Аннотация

транскриптов РНК-полимеразы I, очищенных из клеток Schizosaccharomyces pombe , терминируются в трех сайтах, которые предшествуют последовательностям «Sal box»-подобных терминирующих элементов (TE). Существенные признаки этих элементов были исследованы с помощью экспрессии целевых мутаций in vivo . Анализы РНК подтвердили функциональное значение двух элементов (боксы 1 и 3), но показали, что третья, менее родственная последовательность (бокс 2) не функционирует как сигнал терминации. Результаты также показали, что наиболее консервативные остатки в двух активных ТЕ, а также в соседних областях также являются наиболее важными для функционирования. Кроме того, некоторые мутации в этих элементах или непосредственно фланкирующих последовательностях влияют не только на эффективность терминации, но также изменяют положение терминации на целых 35 н.Поскольку этот элемент способен влиять на сайт терминации на удивительно длинном участке последовательности ДНК, эти наблюдения предполагают, что ТЕ не действует просто как элемент паузы, фиксируя фактор терминации.

Введение

У эукариот терминация транскриптов пре-рРНК РНК-полимеразы I (pol I) опосредуется связыванием белкового фактора терминации транскрипции (TTF) с элементом терминации (TE), расположенным на 12–20 п. н. ниже фактического сайта терминации. (рассмотрено в 1–5).Основываясь главным образом на исследованиях in vitro , был предложен двухэтапный механизм терминации, в котором терминаторный белок действует, чтобы приостановить элонгирующийся комплекс, позволяя восходящему высвобождающему элементу (URE) опосредовать высвобождение транскрипта в месте терминации (6). ). В то время как URE не был обнаружен в каждом организме (7) и потребность в этом элементе подвергалась сомнению экспериментально (8), TE и его взаимодействие с TTF были четко задокументированы в нескольких клеточных моделях, включая мыши, лягушки и почкующиеся и делящиеся дрожжи (обзор в 1–5).Недавно также был клонирован мышиный фактор высвобождения. Этот белок, по-видимому, специфически связывается с остатками уридилата, кодируемыми последовательностью URE (9). Сам терминирующий элемент был впервые задокументирован у мышей как мотив повторяющейся последовательности длиной 18 п.н., названный «боксом Sal», поскольку он содержал последовательность узнавания рестриктазой Sal I (10). Хотя гомология последовательностей между TE довольно ограничена у различных организмов, было обнаружено, что функционально эквивалентные повторяющиеся элементы связаны со всеми сайтами терминации, и в ходе исследований был идентифицирован родственный связывающий белок.Неожиданно оказалось, что у Saccharomyces cerevisiae этим белком является Reblp, белок, также связанный с контролем экспрессии генов (обзор в 11).

В транскриптах рРНК Schizosaccharomyces pombe три сайта терминации были идентифицированы путем картирования концов с помощью расщепления нуклеазой S ₁ (12). С этими сайтами также были связаны три «Sal box»-подобные последовательности TE (12), а также был клонирован белковый фактор с аффинностью к двум из этих элементов, который оказался связанным с S.cerevisiae белок Reblp (13). Однако в тех же двух последовательностях TE S.pombe гомология последовательностей не ограничивается сайтом связывания сердцевинного белка. Скорее, он, по-видимому, простирается почти непрерывно от сайта терминации и даже от нескольких остатков вниз по течению от функционального ядра TE, которое было идентифицировано у S.cerevisiae . Чтобы оценить значение этих расширенных сходств, в этом исследовании были введены целевые мутации по всей области гомологии последовательностей, а мутированные рДНК были экспрессированы in vivo для анализа транскриптов.

Материалы и методы

Используемые штаммы

Escherichia Coli C490 (от C600, RCA ^—, RKR ^—, MK ^—, THR ^—, LEU ^—, MER ^—) (14) использовался в качестве хозяина для Матрица плазмиды pTZ19R, содержащая только 3′-ETS-последовательность рДНК (12). Schizosaccharomyces pombe (h ^—, leu 1-32, ura 4-D18) (15) использовали в качестве хозяина для различных производных дрожжевого челночного вектора pFL20, содержащих «меченые» повторы рДНК и мутированные терминаторные элементы. .

Конструирование и экспрессия мутантных межгенных последовательностей рРНК

Сайт-специфические замены пар оснований были введены в межгенную область рДНК S.pombe методом «мегапраймеров» (16) с увеличенным временем отжига (17). Матрица для мутагенеза (рис. 2А) представляла собой фрагмент рДНК S.pombe длиной 2,4 т.п.н., охватывающий 3′-конец 25S рДНК и 800 п.н. нижележащего 3′-ETS и межгенные последовательности, которые были субклонированы в вектор pTZ19R ( 12).Фрагмент содержал два маркера: уникальную последовательность узнавания ферментом рестрикции Not I в пределах последнего вариабельного домена 25S рДНК и делецию длиной 22 п.н. в протяженной структуре шпильки в 3′-ETS. Мутации были введены во фрагмент с помощью двухэтапной процедуры, основанной на ПЦР (17). Мутации были идентифицированы дифференциальной гибридизацией (18) и подтверждены дидезокси-секвенированием (19). Фрагменты, содержащие соответствующие изменения, отщепляли от промежуточного соединения и использовали для замены нормальных последовательностей в челночном векторе, содержащем меченый S. транскрипционная единица рДНК pombe (рис. 2В), ранее описанная Мелеховцом и соавторами (12).

S

₁ нуклеазное картирование концов транскриптов в предшественниках рРНК

Концы транскриптов зрелых и предшественников рРНК, полученных из плазмид, обнаруживали и количественно определяли с помощью нуклеазного картирования S ₁, как описано Aldea et al. (20) с использованием ПЦР-генерированных плазмид-специфических зондов для нормальной или мутантной рДНК, которые охватывают 3′-ETS и межгенные последовательности.Очищенные зонды расщепляли эндонуклеазой рестрикции Not I (рис. 2) и радиоактивно метили, заполняя утопленный 3′-конец [α-³² P]dCTP и ферментом Кленова (20). Соответствующие зонды (∼100 000 имп/мин) инкубировали с экстрактами общей клеточной РНК (20 мкг) в 20 мкл гибридизационного буфера (3 М NaTCA, 5 мМ Na ₂ ЭДТА, 50 мМ PIPES pH 7,0) при 30°C в течение 12 ч. . Затем гибриды расщепляли в течение 30 мин при 37°С нуклеазой S ₁ (50–200 ЕД) в 15 мМ ZnCl ₂ , 250 мМ NaCl, 40 мМ NaAcO, pH 5.5 (общий объем 200 мкл). Расщепления обрывают с помощью SDS/EDTA, экстрагируют фенолом/хлороформом/изоамиловым спиртом (25:24:1), осаждают этанолом и анализируют на 6% полиакриламидных гелях для секвенирования вместе со стандартными продуктами реакции последовательности обрыва цепи, нанесенными на аналитические гели в качестве маркеров длины фрагмента. .

Сканирующая денситометрия

Количественный анализ фракционированных полос, соответствующих концам рРНК, выполняли с использованием сканирующего денситометра Umax Astra 600P (Umax Technologies, CA) и программного обеспечения для ПК Molecular Analyst® v.1.0 (BioRad Laboratories, Калифорния). Сигналы нуклеазной защиты от дублирующих электрофоретических фракционирований двух независимых трансформантов данной конструкции анализировали и выражали в процентах от общей радиоактивности во всех транскриптах.

Результаты

Хотя прошлые исследования показывают, что терминация и высвобождение пре-рРНК в S.cerevisiae зависит от двух коротких элементов последовательности, сайта связывания Reblp и элемента высвобождения выше по течению (рис.1), сравнение последовательностей в S.pombe указывает на два поразительных различия. Как также показано на фиг. 1, сравнение трех известных сайтов терминации показывает более расширенную гомологию последовательности между сайтами 1 и 3 (заключенные остатки) и существенно сниженный уровень гомологии в третьем, сайте 2 (заштрихованные остатки). Для дальнейшей оценки значимости этих сходств и различий сайт-специфические мутации с использованием стратегии мутаций на основе ПЦР (17) вводили в области с наибольшей гомологией, и терминацию мутантных транскриптов исследовали in vivo с использованием эффективного выраженная система меченых челночных векторов (22).Как показано на рис. 2 и полностью задокументировано в предыдущих исследованиях (8, 12), в этом случае единица транскрипции рДНК S.pombe содержала метки в последовательностях 5,8S и 25S рДНК, а также делецию в высококонсервативной 3′-конце. -Ствол ETS, который, как было показано, ингибирует процессинг пре-рРНК (12). Как показано на рис. 3 (дорожка а), такая делеция позволяет легко визуализировать и количественно определить сайты терминации. С нормальными последовательностями терминации гена ~90% транскриптов заканчиваются в сайте 1, а большинство оставшихся молекул заканчиваются в сайте 2.

Рисунок 1

Влияние замен последовательности TE на эффективность терминации pol I в S.pombe . ( A ) Последовательности, влияющие на терминацию S.cerevisiae , предложенные Reeder и Lang (4). Элементы последовательности, необходимые для связывания Reb1p (сайт связывания Reb1p) или высвобождения pol I (элемент выше по течению), выделены жирным шрифтом, а 3′-конец высвобожденного транскрипта показан ниже. ( B ) Эквивалентные области на первом участке терминации (Участок 1) в S.pombe рДНК. Заштрихованные остатки указывают на идентичные нуклеотиды во всех трех сайтах терминации S.pombe , в то время как закрытые остатки идентичны только в сайтах 1 и 3. Сайт связывания первичного белка (Box1) ранее был определен с помощью геномного следа (12). Последовательности, выделенные жирным шрифтом, указывают на предполагаемую основную последовательность ТЕ, а также на мутации в последовательности ТЕ в сайте 1; эффективность терминации каждой мутантной последовательностью указана в скобках. На степень транскрипции указывает пре-рРНК 37S.

Рисунок 1

Рисунок 2

ПЦР-опосредованные мутации в терминирующих последовательностях рДНК для S.pombe . (A) A Bgl II (B)- Hind III (H) фрагмент рДНК S.pombe , расщепленный эндонуклеазой, содержащий 3′-конец последовательности зрелой 25S рРНК (заштрихованная рамка) и 3′-спейсер область (толстая сплошная линия) с тремя терминаторными элементами, подобными «Sal box», и 22-нуклеотидной делецией (12) в консервативной удлиненной шпильке 3′-ETS (тупая шпилька) была субклонирована в pTZ19R (тонкая сплошная линия). Соответствующие мутагенные праймеры (закрашенная звездочка, закрытая стрелка), перекрывающиеся элементы целевой последовательности, использовали для ПЦР-амплификации промежуточного мутагенного праймера (толстая пунктирная линия), который снова использовали со вторым плазмид-специфическим праймером (незаштрихованная стрелка) для ПЦР-амплификации полной мутантной последовательности. . ( B ) Мутантную ДНК расщепляли эндонуклеазами рестрикции Not I (N) и Pvu II (P) и субклонировали в дрожжевой челночный вектор pFL20 (тонкая линия), содержащий S.pombe единица транскрипции рДНК (pFL20/Sp25Not), которая также содержит сайт рестрикции Not I (12) и метку (открытая звездочка) в последовательности 5.8S рРНК. Рекомбинанты, которые содержали мутированные последовательности терминации, отбирали дифференциальной гибридизацией (18) с использованием мутагенных олигонуклеотидных праймеров.

Рисунок 2

Опосредованные ПЦР мутации в терминирующих последовательностях рДНК для S. pombe . (A) A Bgl II (B)- Hind III (H) Фрагмент расщепления эндонуклеазой S.рДНК pombe , содержащая 3′-конец последовательности зрелой 25S рРНК (заштрихованная рамка) и 3′-конец спейсерной области (толстая сплошная линия) с тремя терминаторными элементами, подобными боксу Sal, и делецией 22 нуклеотида (12) в консервативная удлиненная шпилька 3′-ETS (тупая шпилька) была субклонирована в pTZ19R (тонкая сплошная линия). Соответствующие мутагенные праймеры (закрашенная звездочка, закрытая стрелка), перекрывающиеся элементы целевой последовательности, использовали для ПЦР-амплификации промежуточного мутагенного праймера (толстая пунктирная линия), который снова использовали со вторым плазмид-специфическим праймером (незаштрихованная стрелка) для ПЦР-амплификации полной мутантной последовательности. .( B ) Мутантную ДНК расщепляли эндонуклеазами рестрикции Not I (N) и Pvu II (P) и субклонировали в дрожжевой челночный вектор pFL20 (тонкая линия), содержащий единицу транскрипции рДНК S. pombe . (pFL20/Sp25Not), который также содержал сайт рестрикции Not I (12) и метку (открытая звездочка) в последовательности 5.8S рРНК. Рекомбинанты, которые содержали мутированные последовательности терминации, отбирали дифференциальной гибридизацией (18) с использованием мутагенных олигонуклеотидных праймеров.

Рисунок 3

Концы транскриптов Pol I в формирующихся РНК из рДНК S.pombe , содержащие замены последовательности TE. Четыре замены оснований вводили в первый терминаторный элемент, как описано на фиг. 2, и мутантные рДНК использовали для трансформации клеток S.pombe . РНК получали экстракцией SDS/фенолом из клеток, трансформированных нормальными последовательностями TE (а) и последовательностями ATGT/TACA (b), CGGC/GCCG (c), CTCT/GAGA (d), ATCC/TAGG (e), GACCAGTACTCCG/ GCTGGTCATGAGGC (m) или GAGAAGGGCTTCAC/CTCTTCCCGAAAGTG (s), как показано на рисунке 1.Фрагменты расщепления ДНК Not I- Hind III, перекрывающие концевые участки (рис. 2) в каждой из плазмид, были помечены на 3′-конце кодирующей цепи [α-³² P]. dCTP и фрагмент Кленова для плазмид-специфических зондов. Меченые фрагменты инкубировали при 90°С в течение 5 мин для разделения цепей, а затем гибридизовали с аликвотой РНК (20 мкг) при 30°С в течение 12 ч. Полученные гибриды расщепляли 100 ЕД нуклеазы S ₁ при 37°C в течение 30 мин и после экстракции фенолом/хлороформом фрагменты фракционировали на 6% полиакриламидном геле для секвенирования.Нерасщепленный зонд (Ctl) и гидролизат с РНК из клеток E.coli (Ec) также фракционировали вместе со стандартными продуктами реакции секвенирования дидезокси (G, A, T и C) в качестве маркеров остатков. Положения основных концов нормальной РНК S.pombe указаны справа.

Рисунок 3

Концы транскриптов Pol I в зарождающихся РНК из рДНК S.pombe , содержащие замены последовательности TE. В первый терминаторный элемент были введены четыре замены оснований, как описано на рисунке 2, и мутантные рДНК были использованы для трансформации S. помбе кл. РНК получали экстракцией SDS/фенолом из клеток, трансформированных нормальными последовательностями TE (а) и последовательностями ATGT/TACA (b), CGGC/GCCG (c), CTCT/GAGA (d), ATCC/TAGG (e), GACCAGTACTCCG/ GCTGGTCATGAGGC (m) или GAGAAGGGCTTCAC/ CTCTTCCCGAAAGTG (s), как показано на рисунке 1. Фрагменты расщепления ДНК Not I- Hind III ДНК, перекрывающие концевые участки (рис. 2) в каждой из плазмид, были помечены на 3′-конец кодирующей цепи с [α-³² P]dCTP и фрагментом Кленова для плазмид-специфических зондов.Меченые фрагменты инкубировали при 90°С в течение 5 мин для разделения цепей, а затем гибридизовали с аликвотой РНК (20 мкг) при 30°С в течение 12 ч. Полученные гибриды расщепляли 100 ЕД нуклеазы S ₁ при 37°C в течение 30 мин и после экстракции фенолом/хлороформом фрагменты фракционировали на 6% полиакриламидном геле для секвенирования. Нерасщепленный зонд (Ctl) и гидролизат с РНК из клеток E.coli (Ec) также фракционировали вместе со стандартными продуктами реакции секвенирования дидезокси (G, A, T и C) в качестве маркеров остатков. Положения основных концов нормальной РНК S.pombe указаны справа.

Первая серия изменений была направлена на ‘Sal box’-подобный элемент, ранее показанный как необходимый для терминации путем полной делеции (12) и предположительно функционально эквивалентный последовательности сайта связывания Reblp в S.cerevisiae (рис. 1). Как показано в примерах анализов на фиг. 3 и суммировано на фиг. 1, большие изменения последовательности снова привели к практически полному ингибированию терминации.Это было верно даже тогда, когда последовательности были известными или предполагаемыми элементами терминирующей последовательности у мыши и S.cerevisiae (дорожки m и s).

В отличие от этого, эффекты небольших замен блока из 4 п.н. были относительно скромными; в большинстве случаев снижение эффективности терминации обычно составляло ~25%. Наиболее поразительные изменения произошли при замене более консервативных остатков. Например, последовательность AGG/TCC присутствует во всех трех ТЕ и соответствует левой границе сайта связывания Reblp на S. cerevisiae . При изменении этого кластера эффективность терминации упала почти на 50%. Кластер из трех пар G/C-боксов также появляется во всех трех TE и даже в сайте связывания Reblp S.cerevisiae . Когда этот кластер был разрушен, общая эффективность для первого элемента упала только на ∼25%, но, как показано на рисунке 3 (дорожка d), фактическое место терминации было изменено для большинства транскриптов с ∼75% терминацией на ∼18 нуклеотидов за границей. обычный сайт 1 и только ∼25% концов, заканчивающихся на сайте 1.

Поскольку гомология последовательностей по меньшей мере для двух TE (боксы 1 и 3) распространяется дальше вверх и вниз по течению, изменения также были внесены в эти фланкирующие области. Как показано на рисунке 4, простая инверсия последовательности (дорожки a и b) не оказала никакого влияния, но более масштабные изменения, как выше, так и ниже по течению от TE, имели удивительно сильные эффекты. Когда область между сайтом терминации и сайтом связывания белка была изменена с заменой GGATCC на высококонсервативную область TTGAAGAGATAA, было очевидно очень сильное снижение эффективности терминации (рис. 4, дорожки e и f). Когда нижняя область была изменена, общая эффективность терминации существенно не изменилась, но только около 50% молекул остановились в нормальном месте. Остальные 40% транскриптов терминировались на 7 нуклеотидов ниже по течению, а 10% терминировались на 35 нуклеотидов после нормального сайта.

Рисунок 4

Эффект замены последовательности в нуклеотидах, окружающих сайт связывания фактора терминации в S.pombe . ( A ) Первый сайт терминации в S.pombe рДНК. Заштрихованные остатки указывают на идентичные нуклеотиды во всех трех сайтах терминации, в то время как закрытые остатки идентичны в сайтах 1 и 3. Последовательности, выделенные жирным шрифтом, указывают изменения, которые были сделаны вместе с эффективностью терминации в сайте 1 по сравнению с нормальной последовательностью (в скобках). ( B ) Концы транскриптов Pol I в формирующихся РНК из клеток S.pombe , экспрессирующих мутантные рДНК. РНК получали из клеток, трансформированных нормальными последовательностями ТЕ (Ctl) и заменами TTTT/AAAA (а), AAAA/TTTT (б), GGATCC/CCTAGG (в и г) и GCAGCCCGGG/CGTCGGGCCC (д и е).Концы были обнаружены после расщепления нуклеазой S ₁, и относительные концентрации были определены после фракционирования, как описано на рисунке 3. Положения трех известных сайтов терминации указаны справа.

Рисунок 4

Эффект замены последовательности в нуклеотидах, окружающих сайт связывания фактора терминации в S.pombe . ( A ) Первый сайт терминации в рДНК S.pombe . Заштрихованные остатки указывают на идентичные нуклеотиды во всех трех сайтах терминации, в то время как закрытые остатки идентичны в сайтах 1 и 3.Последовательности, выделенные жирным шрифтом, указывают изменения, которые были сделаны вместе с эффективностью терминации в сайте 1 по сравнению с нормальной последовательностью (в скобках). ( B ) Концы транскриптов Pol I в формирующихся РНК из клеток S. pombe , экспрессирующих мутантные рДНК. РНК получали из клеток, трансформированных нормальными последовательностями ТЕ (Ctl) и заменами TTTT/AAAA (а), AAAA/TTTT (б), GGATCC/CCTAGG (в и г) и GCAGCCCGGG/CGTCGGGCCC (д и е). Концы были обнаружены после расщепления нуклеазой S ₁, а относительные концентрации были определены после фракционирования, как описано на рисунке 3.Положения трех известных мест терминации указаны справа.

Различия в последовательностях, связанные со вторым картированным сайтом терминации, также вызывают вопросы о критических элементах последовательности в S.pombe . Когда последовательность Box 1 полностью удалена, ~90% терминаций происходит в сайте 2 (8), наблюдение, которое предполагает, что последовательность Box 2 в равной степени эффективна для терминации. Тем не менее, альтернативное объяснение, которое выдвигалось в прошлом (8), заключается в том, что картирование концов с помощью расщепления нуклеазой S ₁ вводит в заблуждение из-за неспецифического расщепления в расширенном кластере остатков тимидиловой кислоты, который следует за Сайт 2. Чтобы дополнительно проверить эту возможность, консервативное центральное ядро второго ТЕ было сильно изменено, как показано на фиг. 5. Как также показано на фиг. 5, когда этот мутантный ген экспрессировался in vivo , структура концов была полностью нормальной, и не было поднятия терминов, оканчивающихся в Сайте 3, как можно было бы ожидать, если бы второй предполагаемый ТЕ действительно функционировал, чтобы терминировать транскрипты в Сайте 2.

Рисунок 5

Эффект замен последовательности TE во втором сайте терминации в S.pombe рДНК. ( A ) Сравнение последовательностей между известными сайтами терминации pol I в рРНК S.pombe , как описано Мелеховец и соавт. (12). Заштрихованные области указывают на идентичные нуклеотиды в сайтах 1 и 3; слегка заштрихованные области указывают на нуклеотиды, которые также идентичны в сайте 2. Маленькие стрелки указывают на фактические сайты терминации, а большая стрелка указывает на изменения, которые были нацелены на сайт 2. ( B ) Концы транскриптов Pol I в зарождающихся РНК из С.pombe , экспрессирующие рДНК с нормальной или мутированной последовательностью ТЕ в сайте 2. РНК получали из клеток, экспрессирующих нормальную рДНК (дорожка с), или двух разных трансформантов, экспрессирующих мутантную рДНК (дорожки а и b), и концы обнаруживали после S _{. 1} расщепление нуклеазой и фракционирование на 6% полиакриламидном геле. Нерасщепленный зонд (Ctl) также фракционировали вместе со стандартными продуктами реакции секвенирования дидезокси (G, A, T и C) в качестве маркеров остатков. Три известных конца с обычным S.pombe РНК указаны справа.

Рисунок 5

Эффект замен последовательности TE во втором сайте терминации в рДНК S.pombe . ( A ) Сравнение последовательностей между известными сайтами терминации pol I в рРНК S.pombe , как описано Мелеховец и соавт. (12). Заштрихованные области указывают на идентичные нуклеотиды в сайтах 1 и 3; слегка заштрихованные области указывают на нуклеотиды, которые также идентичны в сайте 2. Маленькие стрелки указывают на фактические сайты терминации, а большая стрелка указывает на изменения, которые были нацелены на сайт 2.( B ) Концы транскриптов Pol I в формирующихся РНК из клеток S.pombe , экспрессирующих рДНК с нормальной или мутированной последовательностью ТЕ в сайте 2. РНК получали из клеток, экспрессирующих нормальную рДНК (дорожка с), или двух разных трансформантов, экспрессирующих мутантную рДНК (дорожки а и б) и концы обнаруживали после расщепления нуклеазой S ₁ и фракционирования на 6% полиакриламидном геле. Нерасщепленный зонд (Ctl) также фракционировали вместе со стандартными продуктами реакции секвенирования дидезокси (G, A, T и C) в качестве маркеров остатков.Три известных конца с нормальной РНК S.pombe указаны справа.

Обсуждение

Настоящие исследования, хотя и подтверждают наличие TE в двух известных сайтах терминации в рРНК S. pombe , поднимают ряд новых вопросов, касающихся функционально важных особенностей у этих дрожжей и, возможно, у других организмов. Наиболее консервативный признак во всех трех сайтах терминации у S.pombe и даже S.cerevisiae представляет собой кластер из трех пар оснований G/C в центре или вблизи центра TE (рис. 1). Как также показано на рисунках 1 и 3, замена четырех оснований в этой области резко изменила положение терминации примерно в 75% транскриптов. Изменения во второй консервативной области (AGG/TCC) не влияли на положение терминации, но снижали эффективность примерно на 50%. Другие столь же большие изменения в менее консервативных областях имели скромные эффекты (уменьшение примерно на 25%), и только изменения во многих положениях в TE уменьшали терминацию до очень низкого или неопределяемого уровня.Взятые вместе, эти изменения указывают на то, что стабильность связывания белков зависит от взаимодействий во всем элементе последовательности. Однако консервативные остатки у этих дрожжей, по-видимому, имеют большее функциональное значение и могут влиять как на эффективность, так и на положение терминации.

Изменения ниже сайта связывания фактора терминации и в самом сайте связывания, которые приводят к появлению альтернативных сайтов терминации, представляют особый интерес. Как показано на рисунках 3 (дорожка d) и 4 (дорожки c и d), такие изменения приводят к транскриптам, которые заканчиваются до 35 нуклеотидов за пределами сайта связывания фактора.Причина этих удлиненных концов не очевидна, но они повышают вероятность того, что фактор терминации может действовать не просто для приостановки полимеразного комплекса, но на самом деле может активно взаимодействовать с комплексом транскрипции, вызывая терминацию либо быстро вверх по течению от места связывания, либо ниже по течению от него, когда он действует менее эффективно. У мышей Grummt и соавт. (23) обнаружили, что связывание TTFI индуцирует связывание ДНК. Такое конформационное изменение может лежать в основе изменений, которые мы наблюдаем в положении терминации.Хотя могут быть предложены и другие возможности, эти настоящие наблюдения явно трудно согласовать с преобладающей моделью завершения, включающей простой механизм паузы (6).

Настоящее исследование также продемонстрировало, что функциональная роль консервативных 5′-фланкирующих последовательностей определяется отменой терминации с изменениями последовательности между сайтом терминации 1 и TE (Fig. 4, дорожки e и f). В то время как более отдаленные восходящие элементы были целью прошлых экспериментов (9,24,25), в общем, значение непосредственно фланкирующих последовательностей для процесса терминации pol I еще менее ясно.Настоящее исследование показывает, что последовательность TE, по крайней мере, в S.pombe , может быть более протяженной, чем предполагалось ранее в S.cerevisiae (рис. 1). Исследования in vitro , проведенные на мышиной клеточной модели, также показали, что нижележащие последовательности вносят вклад в эффективность терминации и что на положение 3′-конца пре-рРНК влияют делеции в 5′-фланкирующих последовательностях. (26). Следовательно, взятые вместе, анализы in vivo и in vitro согласуются с более продолжительным TE, который также, по-видимому, делает больше, чем просто приостанавливает транскрипционный комплекс.

Как отмечалось ранее, предыдущие сравнения последовательностей показали возможность того, что в S.pombe второй по величине транскрипт на самом деле не представляет истинное событие терминации, а является просто артефактом расщепления нуклеазой S ₁ из-за предпочтительного расщепления расширенный кластер A/T, который следует за этим предполагаемым местом терминации. Как показано на фиг. 3 (дорожки m и s), когда первая последовательность ТЕ была значительно изменена, второй транскрипт стал доминирующим.Напротив, как показано на рисунке 5, когда в консервативные остатки, которые составляют второй предполагаемый сайт связывания фактора, были внесены большие изменения, не было никакого эффекта на транскрипты, терминированные в сайте 2, и не было повышения количества транскриптов, терминированных в сайте 3. Эти наблюдения убедительно подтверждают возможность того, что окончания, оканчивающиеся в Сайте 2, представляют собой предпочтительные расщепления в транскриптах, оканчивающиеся в Сайте 3 или далее. Мы пришли к выводу, что терминация в рДНК S.pombe фактически происходит только в двух высококонсервативных сайтах терминации, при этом 90% транскриптов высвобождаются в сайте 1, а остальные — в сайте 3.

Благодарности

Авторы благодарят д-ра Юрия Ф. Мелеховца за советы и полезные обсуждения. Это исследование было поддержано Национальным советом по науке и технике Канады.

Ссылки

1. ,

Gene Expr.

1993

, том.

(стр.

—

)2. ,

Крит. Преподобный Биохим. Мол. биол.

1993

, том.

(стр.

—

)3, .,

мол. микробиол.

1994

, том.

(стр.

—

)4, . ,

Trends Biochem. науч.

1997

, том.

(стр.

473

—

477

)5, , , . . ,

транскрипция генов рибосомных РНК путем эукариотической РНК-полимеразы I

1998

Austin, TX

Springer-Verlag и R. g.landes

(стр.

179

—

194

) 6,,,,. ,

Ячейка

1994

, том.

(стр.

527

—

534

)7. ,

Рез. нуклеиновых кислот.

1995

, том.

(стр.

2252

—

2258

)8, , . ,

Рез. нуклеиновых кислот.

1997

, том.

(стр.

5103

—

5109

)9, , , . ,

EMBO J.

1998

, vol.

(стр.

2855

—

2864

)10, , , , . ,

Сотовый

1985

, том.

(стр.

801

—

810

)11, , . ,

Биохим. Клеточная биол.

1995

, том.

(стр.

825

—

834

)12, , , . ,

Дж. Мол. биол.

1994

, том.

239

(стр.

170

—

180

)13, , , . ,

Рез. нуклеиновых кислот.

1997

, том.

(стр.

904

—

910

)14. ,

Дж. Мол. Биол

1983

, том.

166

(стр.

557

—

580

)15, , . ,

мол. Клетка. биол.

1986

, том.

(стр.

—

)16, . ,

BioTechniques

1990

, том.

(стр.

404

—

407

)17, . ,

Рез. нуклеиновых кислот.

1992

, том.

(стр.

4394

—

4395

)18, . ,

ДНК

1984

, том.

(стр.

479

—

488

)19, , .,

Proc. Натл. акад. науч. США

1977

, том.

(стр.

5463

—

5467

)20, , , . ,

Джин

1988

, том.

(стр.

101

—

110

)21, . ,

Джин

1980

, том.

(стр.

307

—

319

)22, , , . ,

Рез. нуклеиновых кислот.

1994

, том.

(стр.

686

—

693

)23, , . ,

Дж.Мол. Биол

1992

, том.

227

(стр.

635

—

647

)24, .

Proc. Натл. акад. науч. США

1995

, том.

(стр.

9781

—

9785

)25, , . ,

EMBO J.

1997

, vol.

(стр.

163

—

172

)26, , , . ,

EMBO J.

1988

, vol.

(стр.

1497

—

1502

)

Комплекс CST человека является терминатором теломеразной активности

Jain, D.& Купер, Дж. П. Теломерные стратегии: средства для достижения цели. год. Преподобный Жене. 44 , 243–269 (2010)

КАС Статья Google Scholar

de Lange, T. Как теломеры решают проблему защиты концов. Наука 326 , 948–952 (2009)

АДС КАС Статья Google Scholar

Bodnar, A.G. et al.Увеличение продолжительности жизни путем введения теломеразы в нормальные клетки человека. Наука 279 , 349–352 (1998)

АДС КАС Статья Google Scholar

Abreu, E. et al. Связанный с TIN2 TPP1 рекрутирует теломеразу человека на теломеры in vivo . Мол. Клетка. биол. 30 , 2971–2982 (2010)

КАС Статья Google Scholar

Синь Х.и другие. TPP1 является гомологом инфузории TEBP-β и взаимодействует с POT1, рекрутируя теломеразу. Природа 445 , 559–562 (2007)

АДС КАС Статья Google Scholar

Zhao, Y. et al. Процессивное и дистрибутивное удлинение теломер человека теломеразой в гомеостатических и неравновесных условиях. Мол. Сотовый 42 , 297–307 (2011)

CAS Статья Google Scholar

Мияке Ю.и другие. RPA-подобный комплекс Ctc1-Stn1-Ten1 млекопитающих связывается с одноцепочечной ДНК и защищает теломеры независимо от пути Pot1. Мол. Сотовый 36 , 193–206 (2009)

CAS Статья Google Scholar

Casteel, D. E. et al. Кофактор ДНК-полимераза-α·примаза, гомологичный репликационному белку А-32, регулирует репликацию ДНК в клетках млекопитающих. J. Biol. хим. 284 , 5807–5818 (2009)

КАС Статья Google Scholar

Суровцева Ю.В. и др. Консервативный компонент поддержания теломер 1 взаимодействует с STN1 и поддерживает концы хромосом у высших эукариот. Мол. Сотовый 36 , 207–218 (2009)

CAS Статья Google Scholar

Nakaoka, H., Nishiyama, A., Saito, M. & Ishikawa, F. Xenopus laevis Белковый комплекс Ctc1-Stn1-Ten1 (xCST) участвует в праймировании синтеза ДНК на одноцепочечной ДНК-матрице в экстракте яиц Xenopus . J. Biol. хим. 287 , 619–627 (2012)

КАС Статья Google Scholar

Гу, П. и др. Делеция CTC1 приводит к нарушению репликации теломер, что приводит к катастрофической потере теломер и истощению стволовых клеток. EMBO J. 31 , 2309–2321 (2012)

CAS Статья Google Scholar

Wang, F. et al.Теломерный комплекс POT1-TPP1 является фактором процессивности теломеразы. Природа 445 , 506–510 (2007)

АДС КАС Статья Google Scholar

Latrick, C.M. & Cech, T.R. POT1-TPP1 повышает процессивность теломеразы, замедляя диссоциацию праймеров и способствуя транслокации. EMBO J. 29 , 924–933 (2010)

CAS Статья Google Scholar

Гао, Х., Сервантес, Р. Б., Манделл, Е. К., Отеро, Дж. Х. и Лундблад, В. RPA-подобные белки опосредуют функцию теломер дрожжей. Природная структура. Мол. биол. 14 , 208–214 (2007)

КАС Статья Google Scholar

Pennock, E. , Buckley, K. & Lundblad, V. Cdc13 доставляет отдельные комплексы к теломерам для защиты концов и репликации. Cell 104 , 387–396 (2001)

CAS Статья Google Scholar

Ци, Х.& Zakian, VA. Теломер-связывающий белок Saccharomyces Cdc13p взаимодействует как с каталитической субъединицей ДНК-полимеразы α, так и с теломеразно-ассоциированным белком Est1. Гены Дев. 14 , 1777–1788 (2000)

КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

17
Grossi, S., Puglisi, A., Dmitriev, P. V., Lopes, M. & Shore, D. Pol12, субъединица B ДНК-полимеразы α, функционирует как в укрытии теломер, так и в регуляции длины. Гены Дев. 18 , 992–1006 (2004)
КАС Статья Google Scholar

18
Мартин В., Ду Л.Л., Розенжак С. и Рассел П. Защита теломер консервативным комплексом Stn1-Ten1. Проц. Натл акад. науч. США 104 , 14038–14043 (2007)
ОБЪЯВЛЕНИЯ КАС Статья Google Scholar

19
Дамм, К.и другие. Высокоселективный ингибитор теломеразы, ограничивающий пролиферацию раковых клеток человека. EMBO J. 20 , 6958–6968 (2001)
CAS Статья Google Scholar

20
Cristofari, G. & Lingner, J. Гомеостаз длины теломер требует, чтобы уровни теломеразы были лимитирующими. EMBO J. 25 , 565–574 (2006)
CAS Статья Google Scholar

21
Чжао Ю.и другие. Удлинение теломер происходит на большинстве концов хромосом и не связано с заполнением в раковых клетках человека. Cell 138 , 463–475 (2009)
CAS Статья Google Scholar

22
Кристофари Г. и др. Анализ модуляторов теломеразы с низкой и высокой пропускной способностью с помощью Telospot. Природные методы 4 , 851–853 (2007)
CAS Статья Google Scholar

Встречайте «Терминатора»: исследования под руководством UMBC по-новому связывают солнечный цикл с предсказаниями климата

Солнечный цикл включает в себя периодические изменения активности на поверхности Солнца, и новый взгляд на него выявляет связь между солнечной активностью и погодными условиями на Земле.Новое исследование в Earth & Space Science под руководством Роберта Лимона , научного сотрудника Института планетарной гелиофизики Годдарда, партнерства UMBC с НАСА, описывает открытие явления солнечного цикла, которое авторы назвали «терминатором».

Исследователи обнаружили, что погодный режим Ла-Нинья в Тихом океане быстро следует за терминатором. Модели Ла-Нинья и Эль-Ниньо влияют на все: от вероятности сильных ураганов до успеха вегетационного периода. Это означает, что способность предсказывать эти модели в масштабе примерно десятилетия может помочь сообществам и правительствам подготовиться к стихийным бедствиям, изменению предложения урожая и цен и многому другому. Такие организации, как NOAA, в настоящее время предлагают прогнозы погоды примерно на год вперед, но доступ к прогнозам в масштабе десятилетия был бы огромным шагом вперед.

Роберт Лимон. Фото предоставлено Робертом Лимоном.
Терминатор
Лимон и его соавторы Скотт Макинтош и Дэниел Марш из Национального центра атмосферных исследований определяют терминатор как точную точку, где любые остатки активности предыдущего цикла исчезают с поверхности Солнца.После «завершения» происходит резкое увеличение солнечной активности в новом цикле. Активность, связанная с двумя последовательными циклами, обычно перекрывается в течение нескольких лет, но солнечные пятна двух циклов можно отличить друг от друга в зависимости от их магнитной полярности (север против юга). Полярность Солнца меняет направление каждый цикл.
Ранее ученые определяли переход от одного солнечного цикла к другому как «солнечный минимум», когда общая солнечная активность находится на самом низком уровне.Однако это определение неточно. Терминатор дает исследователям новый способ думать об окончании солнечного цикла и более точный способ предсказывать время последующих погодных условий.
Новое исследование, основанное на постоянно собираемых данных о космических лучах обсерватории в Финляндии, показывает, что событие терминатора постоянно происходило примерно через год после традиционного «солнечного минимума» в течение каждого солнечного цикла в течение последних 60 лет. Фактически, данные в статье, над которой работали с 2017 года, точно предсказали следующее Ла-Нинья в 2020 году.
По словам Леамона, название феномена было выбрано легко. «Мы называем это терминатором в течение нескольких лет, потому что это указывает на смерть солнечного цикла», — говорит он. «И, поскольку это предсказуемо, оно, как всегда, «вернется».
Циклическое решение
Не все солнечные циклы имеют одинаковую длину. Они могут варьироваться от девяти до 14 лет, в среднем около 11 лет. Итак, Леамон использовал творческую технику, вдохновленную легкой атлетикой, чтобы сравнить время последовательности событий в каждом цикле.Просматривая свою статистику по 100-мильному велопробегу в 2017 году, он заметил, что каждый 25-мильный круг становился немного медленнее, но всегда были одинаковые ускорения и замедления вокруг определенных элементов трассы, таких как холмы. Итак, если бы он построил круги по расстоянию, а не по времени, все холмы выстроились бы в линию. Почему бы не сделать то же самое для солнечного цикла?
Использование GPS-часов для отслеживания велогонки на 100 миль вдохновило Роберта Лимона на метод, который он использовал в своем новом исследовании. Здесь он участвует в триатлоне Ironman.Фото предоставлено Робертом Лимоном.
Хотя технически солнечный цикл не имеет измерения «расстояния», можно разделить длину каждого солнечного цикла на 100 равных частей, а затем нанести циклы друг на друга, чтобы сравнить их характеристики.
«Это одна из тех вещей… У тебя просто есть момент вдохновения и ты думаешь, почему бы мне не попробовать это?» — говорит Лимон. «Вот как появилось это исследование. Вместо того, чтобы строить циклы по времени, делайте это как расстояние». И когда вы делаете это, говорит он, «все виды вещей начинают складываться.
Скрытые сигналы
Этот метод показал, что переход от солнечного минимума довольно резкий, а не плавные кривые, изображенные на многих пояснительных диаграммах солнечного цикла. «Это не плавный переход. На самом деле происходит резкий скачок солнечной активности и резкое падение космических лучей как раз тогда, когда солнечная активность набирает обороты», — объясняет Лимон.
Относительное количество космических лучей, попадающих в атмосферу Земли, является одним из способов измерения солнечной активности учеными. Когда солнечная активность ограничена, магнитные поля, связанные с Землей и Солнцем, просты и в значительной степени выровнены. Это создает непрерывный путь для большего количества космических лучей, достигающих Земли. Однако при высокой солнечной активности магнитные поля имеют сложный характер. «Швейцарский сыр, пожалуй, хорошая аналогия», — говорит Лимон. «Есть еще вещи, от которых можно рассеивать поступающие частицы. Таким образом, в период солнечного максимума на Землю падает меньшее количество космических лучей».
Другие исследователи, возможно, считали неравномерное увеличение и уменьшение солнечной активности просто шумом в данных, но картирование циклов по «расстоянию» позволило Лимону увидеть, что это постоянное явление.«Шум одного человека — это сигнал для другого», — говорит он с улыбкой. «Поэтому не переусердствуйте», — говорит он, иначе вы рискуете упустить важную информацию.
Диаграммы общих тенденций погоды во время явлений Ла-Нинья и Эль-Ниньо. Предоставлено Австралийским бюро метеорологии. (Прокрутите влево и вправо, чтобы увидеть полное изображение для каждого режима погоды.)
Думайте не только о небе
Лимон признает опасения, что некоторые люди попытаются использовать его исследование как доказательство того, что изменение климата вызвано Солнцем, а не людьми.Этот аргумент уже давно выдвигают отрицатели антропогенного изменения климата. Но Лимону ясно, что он неверно истолковывает его выводы.
Когда мы говорим о глобальном потеплении, говорит он, «мы говорим только о тропосфере — нескольких нижних милях атмосферы, где мы живем. Но одним из последствий потепления тропосферы является более холодная стратосфера», которая простирается примерно на 32 мили над поверхностью Земли. Удерживая больше тепла ближе к поверхности, это тепло не уходит и не нагревает стратосферу, а более холодная стратосфера усиливает изменения солнечного цикла за счет увеличения электропроводности в верхних слоях атмосферы.
На самом деле, «с 1950-х годов наблюдается заметное охлаждение стратосферы, сопровождающееся потеплением тропосферы», — говорит Лимон. Это коррелирует с началом сейсмических сдвигов в уровне жизни в США, использовании энергии и других факторах, которые способствовали антропогенному изменению климата. Таким образом, справедливо сказать, что Солнце является фактором климата, но его роль усилилась из-за деятельности человека, объясняет Лимон.
Наука для людей
Леамон проводит дополнительное исследование, которое предлагает дополнительную информацию о событиях во время солнечного цикла.Его предстоящая работа также использует преимущества нового взгляда на данные, вдохновленные его поездкой на велосипеде. В сочетании с текущими результатами цель состоит в том, чтобы генерировать знания, которые одновременно удовлетворяют наше врожденное любопытство к работе Солнечной системы и помогают людям и сообществам ориентироваться в меняющемся мире.
«Если дальнейшие исследования смогут установить, что изменения на Солнце действительно вызывают изменчивость в океанах, тогда мы сможем улучшить нашу способность прогнозировать явления Эль-Ниньо и Ла-Нинья», — говорит Лимон. «Это могло бы помочь нам понять, как земная система меняется в масштабе от сезона до десятилетия, и насколько предсказуемы эти изменения, что дает нам более четкое представление о сложном мосту между погодой и климатом».
Изображение баннера: изображение терминатора на Солнце в 2011 году. Три разных цвета (добавленные исследователями) представляют три температуры. Фото предоставлено Обсерваторией солнечной динамики НАСА.
Нетропсин специфически усиливает терминацию РНК-полимеразы II в терминаторных участках in vitro на JSTOR
Абстрактный
Мы описываем систему in vitro, которая имитирует специфическую и эффективную терминацию транскрипции, связанную с терминатором гена гастрина человека in vivo.Система включает ДНК-матрицу с dC-хвостом, содержащую терминаторную последовательность гена гастрина, очищенную РНК-полимеразу II и очищенный фактор элонгации TFIIS. В этой системе базовый уровень терминации РНК-полимеразой II на терминаторе гена гастрина специфически усиливается нетропсином, богатым (А + Т) пептидом, связывающимся с малой бороздкой. Это расширенное завершение поддерживается даже с TFIIS, который обычно подавляет завершение на этом сайте. Терминация in vitro зависит от последовательности терминатора.Мутантные последовательности, которые снижают или устраняют терминацию in vivo, обнаруживают соответствующее снижение активности в системе in vitro. Эта имитация активности in vivo терминаторов дикого типа и мутантных терминаторов in vitro убедительно свидетельствует о том, что нетропсин и предполагаемый фактор терминации могут иметь некоторые общие аспекты их биохимических механизмов. Общая применимость этой системы к изучению элонгации и терминации РНК-полимеразы II подтверждается усилением терминации, наблюдаемым как у гастрина, так и у человеческого гистона h4.3 гена терминатора.
Информация о журнале
PNAS — самый цитируемый в мире междисциплинарный научный сериал. Он публикует высокоэффективные исследовательские отчеты, комментарии, перспективы, обзоры, документы коллоквиума и действия Академии. В соответствии с руководством принципы, установленные Джорджем Эллери Хейлом в 1914 году, публикует PNAS краткие первые объявления членов Академии и иностранных партнеров подробнее важный вклад в исследования и работы, которые, по мнению члена, иметь особое значение.
Информация об издателе
Национальная академия наук (НАН) — частная некоммерческая организация ведущих исследователей страны. NAS признает и продвигает выдающуюся науку путем избрания в члены; публикация в своем журнале PNAS; и его награды, программы и специальные мероприятия. Через Национальные академии наук, инженерии и медицины NAS предоставляет объективные, научно обоснованные рекомендации по важнейшим вопросам, затрагивающим нацию.
Анализ преждевременных терминаторов проливает свет на скрытый мир ослабления бактериальной транскрипции | Биология генома
5′-терминаторы менее стабильны, чем 3′-терминаторы, и неравномерно распределены среди видов
Мы объединили два метода Rho-независимого предсказания терминаторов, используя либо матрицы весов позиций [32], либо дескрипторы [33] для обнаружения потенциальных терминаторов в 5′- и 3′-НТО в 302 бактериальных геномах (подробнее см. Материалы и методы).Как уже было задокументировано [34], общее использование Rho-независимых терминаторов колеблется среди видов, с максимумом у Firmicutes (приблизительно 2689 предсказаний в Bacillus cereus ) и минимумом у Actinobacteria (30 предсказаний в Nocardioides sp.) или у некоторых атипичных видов, таких как протеобактерии Ehrlichia ruminantium (8 прогнозов), облигатный внутриклеточный патогенный организм. Контроль, выполненный с использованием рандомизированных последовательностей UTR, показывает низкий уровень ложноположительных результатов как в 5′-, так и в 3′-UTR (2.3% и 2,5% соответственно; см. Материалы и методы). Основываясь на экспериментально проверенных оперонах B. subtilis , мы оцениваем, что наш протокол будет извлекать около 88% 3′-терминаторов [35].
Чтобы идентифицировать предполагаемые аттенюаторы, мы применили дополнительные фильтры к набору 5′-терминаторов на основе ориентации и расстояния относительно фланкирующих генов. В нашем наборе из 302 бактериальных геномов это привело к идентификации 15 930 предполагаемых аттенюаторов, 1004 из них перекрывают последовательности, ранее аннотированные как ORF, кодирующие короткие гипотетические белки.В B. subtilis этот протокол обнаружил 32 из 57 (56%) известных систем ослабления (рибопереключатели, Т-боксы и другие элементы).
Терминаторы, обнаруженные в областях 5′-UTR, термодинамически менее стабильны, чем 3′-терминаторы (средняя свободная энергия сворачивания -16,5 ккал против -20,2 ккал/моль, P < 2e-16), а их средняя длина стебля немного короче ( 7,0 против 7,6 п.н., P < 2e-16). Как видно выше, это различие не может быть приписано более высокой частоте ложных открытий в 5' UTR, хотя оно согласуется с ожидаемыми свойствами структур, которые должны складываться альтернативно; все известные 5'-регуляторные терминаторы допускают альтернативное считывание, чего нельзя сказать о 3'-терминаторах.Интересно, что 5'-терминаторы не кажутся эволюционно более консервативными в последовательности, чем 3'-терминаторы. Анализируя данные недавнего скрининга некодирующих консервативных элементов у бактерий [36], мы обнаружили, что 58% 5′-терминаторов по сравнению с 66% 3′-терминаторов перекрывают консервативную область. Это говорит о том, что 5′-терминаторы не связаны с консервативными последовательностями чаще, чем канонические терминаторы.
Анализ синтении выявил более 50 семейств генов, подверженных частому контролю аттенуации
Мы классифицировали 5′-терминаторы на основе отношений гомологии между нисходящими генами, операция, которая сводится к поиску пар синтетический аттенюатор/ген.Этот метод родственен методу Merino и Yanofsky [17], которые искали перепредставленные семейства ортологичных генов, фланкирующих предполагаемые аттенюаторы. Эти авторы определили аттенюаторы на основе взаимоисключающих стеблей, в то время как мы ищем одиночные терминаторные мотивы. В принципе, наш подход должен быть более чувствительным к аттенюаторам транскрипции, поскольку некоторые из них достигают своего альтернативного состояния посредством контактов с внешними факторами и не требуют стабильного альтернативного спаривания оснований. С другой стороны, Мерино и Янофски смогли обнаружить поступательные аттенюаторы, которых мы здесь не обнаруживаем.
Для идентификации белковых семейств, проявляющих большую склонность к регуляции посредством аттенуации транскрипции, мы использовали базу данных семейств генов Hogenom [37] и ранжировали семейства на основе количества 5′-терминаторов. В первой процедуре мы оценили семейства генов в соответствии с абсолютным числом предсказанных аттенюаторов для всех видов без учета размера семейства генов, что благоприятствовало большим семействам паралогов (таблица S0 в дополнительном файле 1). Чтобы избежать смещения в сторону больших семейств паралогов, мы использовали вторую процедуру оценки, в которой семейства генов ранжировались в соответствии с их частотой и распределением видов (рис. 1).Значимость обогащения аттенюатором была подтверждена независимо для каждой семьи. Баллы, значения P и информация о семействе показаны в таблице S1 в дополнительном файле 1. Наша оценка на основе синтении устраняет более 90% ложноположительных результатов, соответствующих терминаторам независимых генов малых РНК. В то время как 2,2% (343 элемента) от общего числа 15 930 предсказанных 5′-терминаторов сопоставляются с аннотированными малыми РНК, эта доля уменьшается до 0,16% (3 из 1845) при рассмотрении только кандидатов-аттенюаторов из 65 высокоранговых семейств.Следовательно, хотя некоторые терминаторы независимых генов РНК включены в наш первоначальный скрининг, большинство из них отбрасывается, когда мы рассматриваем семейства генов с высокими показателями. Наконец, мы проанализировали сохранение последовательности, чтобы обнаружить возможные функциональные элементы, связанные с аттенюаторами. С этой целью мы провели попарное сравнение последовательностей терминаторных областей с последующей иерархической кластеризацией. Элементы-аттенюаторы, содержащие последовательность, консервативную как минимум у двух видов, перечислены в таблице S2 в дополнительном файле 1 для первых 30 семейств аттенюаторов.
Рисунок 1
Шестьдесят пять семейств генов, наиболее часто контролируемых аттенуацией . Для каждого семейства генов, описанного слева, на гистограмме показана доля кандидатов, уже описанных в базе данных Rfam или в литературе. Зеленая кривая соответствует кумулятивной части семей, в которых есть хотя бы один описанный кандидат, от первой семьи до 65-й. Красная кривая показывает абсолютное количество кандидатов в каждой семье.
Мы оценили предшествующие знания о регуляции аттенюатора в каждом семействе генов посредством систематического обзора литературы и сравнения с базой данных семейства РНК Rfam [38] и с базой данных RegulonDB E.coli транскрипционных сетей [39]. Высокая частота известных терминаторных систем среди высокоранговых семейств на рисунке 1 подчеркивает специфичность нашего метода обнаружения. Сорок два из 65 высокоранговых семейств (65%) уже были описаны как регулируемые аттенюаторами по крайней мере у одного вида, охватывая практически все известные классы аттенюаторных систем (рис. 1). Эта доля достигает 100% для первых 20 семей. Однако в известных семействах аттенюаторов большая часть элементов не была описана ранее: 67% элементов не имеют аннотаций в 30 лучших семействах. Кроме того, несколько основных семейств аттенюаторов практически не охарактеризованы: 27 из 65 полностью не охарактеризованы или охарактеризованы менее чем на 1%. В следующих разделах мы опишем пять ранее не охарактеризованных семейств аттенюаторов, выбранных либо потому, что они особенно широко распространены или интересны с функциональной точки зрения, либо потому, что они демонстрируют интригующие филогенетические паттерны.
rimP -лидер: самый распространенный аттенюатор транскрипции
Ген rimP занимает первое место в нашем списке генов, наиболее часто регулируемых аттенуацией (рис. 1). rimP , ранее известный как yhbC в E. coli и ylxS в B. subtilis , кодирует белок, который, как недавно показано, участвует в созревании 30S рибосомной субъединицы [40]. Это первый ген оперона, охватывающего генов nusA и infB , которые присутствуют почти у всех бактерий. В то время как infB кодирует фактор инициации трансляции IF-2, белок NusA характеризуется как фактор паузы транскрипции, считывания, терминации и антитерминации, и показано, что он участвует в Rho-зависимом комплексе антитерминации [41].

Анализ предсказанных аттенюаторов в оперонах rimP — nusA — infB (рис. 2b) выявил наличие короткого и высококонсервативного мотива, соответствующего терминатору, лидеру rimP-, но не дал свидетельство наличия более крупных консервативных элементов, характерных для рибопереключателей, Т-боксов или зависимых от рибосомных белков аттенюаторов. Стебель терминатора содержит необычный высококонсервативный мотив GGGc(…)gCCC. Нам не удалось обнаружить такой консервативный мотив ни в каком другом 5′- или 3′-терминаторе, что позволяет предположить, что эта сигнатура последовательности специфична для лидера rimP-.Однако мы смогли найти тот же мотив вместе с нисходящим U-участком во многих 5′-UTR оперонов rimP — nusA — infB , где структура терминатора не была обнаружена (дополнительные данные 1 в дополнительном файле 1). Эти дополнительные мотивы были пропущены, потому что потенциальная шпилька была слишком короткой для обнаружения с помощью наших программ, что согласуется с нашим предыдущим наблюдением, что регуляторные терминаторы менее стабильны, чем обычные терминаторы. Расстояние, отделяющее терминатор от начала гена, варьируется от 4 до 130 нуклеотидов и, следовательно, может охватывать сайт связывания рибосомы (RBS).У нескольких гаммапротеобактерий (перечисленных в дополнительных данных 1 в дополнительном файле 1) rimP -лидер кажется более сложным, со вторым терминатором, обнаруженным в тандеме и выше первого (рис. 2а), и представляет собой явный потенциальный антитерминатор. структура. Интересно, что этот терминатор представляет собой мотив CCCg(…)cGGG, обратный расположенному ниже мотиву.

Рисунок 2
обод -лидер . Выделенные прямоугольники указывают предполагаемые сайты связывания рибосом. (a) rimP -лидер, идентифицированный у нескольких Gammaproteobacteria (перечислены в дополнительных данных 1 в дополнительном файле 1), состоящий из предполагаемой терминирующей/антитерминационной структуры (показаны жирными стрелками под последовательностью), за которой следует общий rimP -лидерский мотив, описанный в тексте. (б) rimP -лидер, обнаруженный у большинства видов, включая Firmicutes и Gammaproteobacteria. Эта лидерная последовательность состоит из шпильки, богатой G на 5′-плече и богатой C на 3′-плече, за которой следует T-растяжение, характеризующее Rho-независимые терминаторы.Черная стрелка указывает сайт начала транскрипции, недавно обнаруженный с помощью глубокого секвенирования [46]. Логотипы последовательности были созданы с помощью Weblogo [81].
Высокая консервативность последовательности в rimP -лидерном терминаторном стебле и отсутствие какой-либо видимой антитерминаторной структуры свидетельствует в пользу регуляции, включающей терминирующий или антитерминирующий белок, который может специфически распознавать мотив нуклеиновой кислоты [12, 13]. Если предположить, что контроль обратной связи с помощью RimP, который, как известно, взаимодействует с рРНК [40], можно предположить, то лучшим кандидатом на это прямое взаимодействие, вероятно, является белок NusA, экспрессия которого, как было показано 25 лет назад, подавляет экспрессию оперона [42]. , 43].NusA содержит амино-концевой домен, взаимодействующий с РНК-полимеразой, домен S1, часто встречающийся в РНК-ассоциированных белках, и два РНК-связывающих домена K-гомологии (KH) [44]. Уже было показано, что он участвует в аттенуации оперонов Trp, His и S10 [45] путем взаимодействия с верхним плечом терминаторной шпильки, но описываемый нами РНК-мотив в этих случаях не наблюдался.
Пока эта рукопись находилась на рассмотрении, глубокое секвенирование 5′-регуляторов в B.subtilis [46] наблюдали, что транскрипты, кодирующие определенные коровые субъединицы элонгации транскрипции, включая ylxS (то есть rimP ), по-видимому, содержат длинную 5′-лидерную область. Авторы предположили, что эти области могут содержать элементы, регулирующие ассоциированные гены. 180-нуклеотидный лидер, который они наблюдали с помощью глубокого секвенирования в транскриптах B. subtilis rimP , действительно покрывает аттенюатор, который мы предсказываем для этого гена (рис. 2).
rpsL -лидер: полиформный рибосомный белок-лидер
Ген rpsL также находится в верхней части списка генов, часто регулируемых аттенуацией транскрипции (рис. 1).Как и rimP , он принадлежит к оперону в значительной степени консервативных генов, rpsL и rpsG , кодирующих рибосомные белки S12 и S7 соответственно, и fusA и tufA , кодирующих факторы EF-G и EF. -Вт соответственно. Кластеризация на основе последовательностей позволила нам идентифицировать варианты среди различных «лидеров rpsL-» (таблица S2 в дополнительном файле 1). Мы получили консенсусные структуры для нескольких из этих элементов и смогли найти потенциальные альтернативные антитерминаторные структуры в каждом случае (рис. 3).
Рисунок 3
rpsL -лидер . Репрезентативные структуры показаны для эталонных видов, каждая из которых соответствует согласованной терминальной структуре элементов, обнаруженных у близкородственных видов. Прямоугольники обозначают терминаторные Т-образные растяжения. Черные стрелки указывают на предполагаемые антитерминаторные структуры. (a) Элементы, обнаруженные перед геном rpsL в родах Listeria , Xanthomonas , Pseudomonas и Rickettsia . (б) rpsL -лидер, обнаруженный выше гена fusA у стрептококков.
Уже было показано, что трансляция rpsL и rpsG контролируется S7, продуктом rpsG , в E. coli [47], а Merino и Yanofsky [17] предсказали предполагаемые аттенюаторы транскрипции выше по течению. из rpsL в 24 видах. Однако их результаты мало совпадают с нашими собственными предсказаниями: у нас есть только четыре общих кандидата, в то время как мы просмотрели 22 из их 24 видов.Случаи, которые мы пропустили с помощью нашего протокола, включали неканонические терминаторы (с длинной шпилькой с плохим GC и/или выпуклостью) или терминаторы, которые находились слишком далеко от ATG, чтобы соответствовать нашему фильтру расстояния (8 из 18 случаев).
Сохранение элемента аттенюатора перед rpsL у сильно различающихся видов свидетельствует об общем происхождении. Однако мы не обнаружили глобально консервативного признака ни по последовательности, ни по структуре, связанного с этим аттенюатором. Это, вероятно, объясняет, почему ранее не было предложено общей структуры для лидера rpsL-.В роде Streptococcus мы не обнаружили аттенюатора выше rpsL , в отличие от анализа Мерино, который его нашел (этот терминатор находится слишком далеко от кодона ATG (189 нуклеотидов), чтобы удовлетворить нашему фильтру расстояния). Однако мы обнаружили кандидата ниже по течению между rpsG и fusA в стрептококках (рис. 3b). Возможно, в этом опероне присутствуют два сходных элемента, поскольку Meyer et al. [48] обнаружили две сходные структуры РНК выше rpsL и fusA у Proteobacteria Candidatus Pelagibacter ubique .Это согласуется с совместной регуляцией двух генов. Однако элемент, идентифицированный в [48], не соответствует нашим критериям терминатора и не имеет какой-либо общей последовательности ни с одним из предсказанных нами аттенюаторов.
Совместимо ли разнообразие структур и последовательностей rpsL -лидеров с взаимодействием с одним и тем же партнером по белку S7 у всех видов? Очень гибкая РНК-связывающая часть S7 [49] может допускать некоторые изменения в РНК-мишенях или, альтернативно, лидер может связываться с разными белками-партнерами.С современной точки зрения на лидеров рибосомных белков каждое семейство лидеров демонстрирует характерный мотив, который имитирует соответствующие сайты связывания в рибосомной РНК. Эта точка зрения может быть слишком ограничительной, и пример rpsL предполагает, что модальности взаимодействия могут различаться между отдаленными типами.
ABC-лидеры: придание специфичности регуляторным элементам
Транспортеры АТФ-связывающих кассет (ABC) составляют одно из крупнейших и древнейших семейств белков, с сотнями паралогов, транспортирующих самые разнообразные субстраты через плазматическую мембрану, включая ионы, аминокислоты, липиды и лекарства [50, 51]. У бактерий эти мультипротеиновые комплексы кодируются оперонами, включающими гены АТФазы, пермеазы и периплазматических компонентов. Было показано, что некоторые из них регулируются транскрипционными факторами [52], тогда как известно, что очень немногие из них подвержены транскрипционной аттенуации [53]. Транспортеры ABC не показаны на рисунке 1, где баллы взвешены по размеру семьи; однако это семейство представляет наибольшее абсолютное количество генов, регулируемых аттенуацией (таблица S0 в дополнительном файле 1), всего 205 кандидатов в нашем исследовании и значение обогащения P , равное 8.8е-05. Дальнейшее изучение этих кандидатов важно из-за большого разнообразия транспортеров и потенциальной изменчивости регуляторных элементов, контролирующих их. Мы обнаружили различные мотивы последовательности, связанные с этими «лидерами ABC» (перечислены в таблице S3 в дополнительном файле 1).
На рис. 4 показаны пять ABC-лидеров, связанных с транспортерами либо известных (рис. 4a-d), либо неизвестных (рис. 4e) субстратов. Каждый из них способен образовывать антитерминаторную структуру, и консервативный мотив последовательности/структуры (см. выравнивание в дополнительных данных 2 в дополнительном файле 1) предполагает, что он реагирует на уникальный субстрат.Кандидат, показанный на рисунке 4c, является вероятным T-box, но другие кандидаты не похожи ни на один известный -цис--регулятор. Таким образом, их регуляторные механизмы еще предстоит определить. Размер консервативной структуры достаточен для образования аптамера, который мог бы непосредственно обнаруживать субстрат, тем самым определяя новые классы рибопереключателей; однако мы не можем исключить косвенную регуляцию с участием белкового фактора. Действительно, ряд РНК-связывающих белков нацелен на палиндромную РНК [12, 13], которая также может действовать как шпилька терминатора.
Рисунок 4
ABC-лидеры . (a) ABC-лидер обнаружен выше оперона potABCD , кодирующего систему импорта спермидина/путресцина, у Gammaproteobacteria Haemophilus somnus и Pasteurella multocida . (b) ABC-лидер, обнаруженный в лактобациллах Lactobacillus gasseri и Lactobacillus johnsonii , выше оперона системы экспорта многих лекарств. (c) Т-бокс, обнаруженный у Firmicutes Enterococcus faecalis и Lactobacillus sakei , перед генами переносчиков ионов металлов и метионина, соответственно. (d) ABC-лидер обнаружен у бацилл перед опероном транспортера алкансульфонатов. (e) ABC-лидер обнаружен в бациллах на 15 нуклеотидов выше транспортера неизвестной специфичности. Кандидаты представлены с использованием тех же условных обозначений, что и на рисунке 3.
Анализ такого семейства множественных паралогов поднимает интересные эволюционные вопросы о происхождении ассоциированных аттенюаторов, то есть все ли они произошли от древнего аттенюатора, который регулировал наследственный ABC транспортер, или если определенные гены этого семейства имеют тенденцию «привлекать» аттенюаторы для своей регуляции.Относительно низкая доля аттенуированных генов-транспортеров ABC и способность аттенюаторов «прыгать» с одного гена на другой (см. ниже) свидетельствуют в пользу второй гипотезы.
Регуляторы
генов hisS : переключение между сенсорными системами
Синтеновые аттенюаторные системы не обязательно используют одну и ту же сенсорную систему. Хорошо известны примеры переключения с Т-бокса или рибопереключателя у одних видов (например, Firmicutes) на лидерный пептид у других (например, Proteobacteria) [9, 10].Наш протокол, который не требует консервативной последовательности или структуры РНК, хорошо подходит для обнаружения таких обменов, и по крайней мере пять из них присутствуют в нашем списке часто аттенуированных генов (рис. 1).
Особенно поразительный случай переключения между системами восприятия представлен геном hisS (рис. 5). Давно известно, что в роде Bacillus hisS , кодирующий гистидил-тРНК-синтетазу, регулируется Т-боксом, как и многие другие тРНК-синтетазы [9].Этот ген, однако, претерпел две последовательные дупликации: недавнюю, которая, по-видимому, специфична для бацилл, и более предковую, которая произошла до расхождения протеобактерий и фирмикутов. Интересно, что все три паралога, обнаруженные в настоящее время у бацилл, по прогнозам регулируются аттенюатором другого типа, как показано на рис. 5. В дополнение к известному hisS T-box мы обнаружили новые аттенюаторы выше hisS* ( паралог Bacillus hisS ) и hisZ , кодирующих регуляторную субъединицу АТФ-фосфорибозилтрансферазы.
Рисунок 5
Регуляторы семейства генов hisS . Дендрограмма справа представляет собой иерархическую кластеризацию последовательностей-кандидатов-аттенюаторов. Кластеры консервативных последовательностей, определяемые пороговым значением Е, равным 10 ^-4, обрамлены. Синими рамками выделены три группы паралогов, обнаруженных у бацилл. Пунктирные рамки указывают на кандидатов, ранее аннотированных как короткие гипотетические белки («sORF»). (a) Т-бокс, обнаруженный перед hisS в лактобациллах. (b) Гистидиновый лидерный пептид, идентифицированный в бациллах перед двумя паралогами hisS . (c) Т-бокс, обнаруженный выше hisS у бацилл и других видов, включая изолированные гаммапротеобактерии и хлоробии.
Мы выполнили кластеризацию на основе последовательностей областей 5′-UTR в семействе hisS , чтобы идентифицировать наборы родственных мотивов (рис. 5). 5′-UTR hisZ и hisS* имеют очень сходные последовательности, которые включают короткие ORF, охватывающие участок гистидиновых кодонов.Это веские доводы в пользу присутствия гистидинового лидерного пептида, регулирующего оба гена. Насколько нам известно, не было показано, что какая-либо система лидерных пептидов существует за пределами Proteobacteria [22] и Actinobacteria [54], если мы исключим атипичный лидер ermC [55], который контролирует трансляцию и не имеет аминокислотной специфичности, но ощущает глобальную замедление в переводе. Таким образом, этот результат усиливает эволюционную значимость лидерных пептидных систем и расширяет диапазон основанной на РНК регуляции у грамположительных бактерий.
Лидерные пептиды могли попасть в Firmicutes путем горизонтального переноса. Однако мы можем также предположить, что короткие рамки считывания могли неоднократно возникать из случайных последовательностей, особенно в благоприятной клеточной среде таких видов, как представители типа Firmicutes. В поддержку конвергентной эволюции не наблюдается сходства в последовательности некодирующего или лидерного пептида между Firmicutes и Proteobacteria. То, что две дупликации гена hisS наблюдаются только у некоторых видов Firmicutes, свидетельствует о недавнем событии: ген, возникший в результате первой дупликации, мог развиться или захватить систему аттенуации (например, у грамотрицательных бактерий), прежде чем подвергнуться второй дублирование.
Анализ последовательности аттенюаторов hisS также выявил элемент T-box в Lactobacillales (рис. 5а). Кроме того, мы наблюдали один возможный горизонтальный перенос элементов аттенюатора от Firmicutes к Gammaproteobacteria: неизвестный протеобактериальный аттенюатор, который соответствует последовательности, охватывающей предполагаемую короткую ORF, явно напоминает T-блоки Firmicute (рис. 5c, красная рамка). Это иллюстрирует поразительную лабильность элементов-аттенюаторов, которые могут быть получены от других видов и впоследствии эволюционировать, чтобы соответствовать предпочтительным регуляторным механизмам их нового хозяина.
Родственные
greA — и rnk -лидеры

Генное семейство greA / rnk занимает седьмое место в нашем списке генов, часто регулируемых аттенуацией. Хотя склонность генов greA / РНК к аттенуации транскрипции была обнаружена ранее [17], экспериментальные доказательства наличия аттенюатора E. coli greA получены недавно [4]. Семейство генов включает два основных паралога: greA , который кодирует фактор элонгации транскрипции, и РНК , который кодирует регулятор нуклеозиддифосфаткиназы.Мы обнаружили аттенюаторы выше этих генов у различных видов от протеобактерий до бацилл и клостридий. У нескольких видов мы идентифицировали аттенюаторы в обоих генах. На рис. 6 показан результат кластеризации на основе последовательностей аттенюаторов greA / rnk и моделей вторичной структуры для различных кластеров последовательностей. В каждом случае мы смогли обнаружить четкую антитерминаторную структуру; однако между greA — и rnk -лидерами не удалось обнаружить никаких общих черт.Рис. (a) Лидер РНК , идентифицированный выше по течению от РНК в Pseudomonas . (b,c) Лидер РНК и greA -лидер, идентифицированные в Enterobacteria, выше РНК и greA соответственно. (d) Лидер greA -лидер, идентифицированный выше greA в бациллах. (e) рнк -лидер, идентифицированный выше по течению от рнк в иерсинии . Кандидаты представлены с использованием тех же условных обозначений, что и на рис. 3.

Очень интересно, что ограниченные экспериментальные данные, доступные для этих двух предполагаемых цис некодирующих РНК, указывают на наличие второго механизма в транс . Потрикус и др. [4] показали, что сверхэкспрессия короткой формы транскрипта greA , высвобождаемой после произошедшей аттенуации, приводит к репрессии ряда генов.Кроме того, при систематическом скрининге [56] была обнаружена межгенная область, соответствующая РНК -лидеру, ко-иммунопреципитации с Hfq, консервативным бактериальным белком, который, как известно, облегчает взаимодействие между малыми РНК и их мРНК-мишенью. Хотя удвоение лидеров в виде транс -действующих РНК является недавней и пока редкой находкой [57], мы, возможно, обнаружили здесь два таких случая с greA — и РНК -лидерными семействами.

Идентификация аттенюаторных «регулонов»

Термин «регулон» или «модулон» [58] был придуман для описания набора генов, подчиненных общему регуляторному элементу.Мы проанализировали аттенюаторные регулоны, включающие членов одного или нескольких семейств генов. С этой целью мы сравнили последовательности, окружающие предсказанные 5′-терминаторы во всех генах, без учета ортологии в наборе родственных видов. Затем мы сгруппировали похожие 5′-последовательности на основе попарных расстояний в так называемые «кластеры терминаторов». Мы описываем здесь результаты, полученные в подсемействах Enterobacteria (13 видов) и Bacillus (8 видов). Обследованные виды перечислены в таблице S6 в дополнительном файле 1.Мы идентифицировали в общей сложности 192 и 270 терминаторных кластеров у энтеробактерий и бацилл соответственно. Мы различали кластеры на основе природы нижестоящих генов. Кластеры, включающие только ортологичные гены, перекрывают предыдущий анализ и приведены в таблицах S4 и S5 в дополнительном файле 1. Ниже мы сосредоточимся на кластерах, включающих несколько неортологичных генов или групп генов, присутствующих у одного или нескольких родственных видов.

«Мобильные аттенюаторы», связанные с подвижными элементами

Сорок шесть терминаторных кластеров у энтеробактерий и 96 кластеров у бацилл связаны с подвижными элементами.Мы описываем их как «мобильные аттенюаторы». Последовательности терминаторов в этих кластерах демонстрируют высокий уровень консервативности, что согласуется с происхождением от мобильных элементов недавнего распространения. Они делятся на два класса. Первый класс (рис. 7а) соответствует терминаторам, расположенным выше транспозаз или других генов, связанных с вставочной последовательностью (IS), и в основном видоспецифичен. Следует отметить, что гены, связанные с транспозазой или ИС, также занимают высокие места в списке часто аттенуированных семейств генов, если не применяется нормализация размера семейства (таблица S0 в дополнительном файле 1).Эти гены принадлежат к транспозонам семейств, таких как ISBMA2 (в основном присутствуют в бетапротебактериях Burkholderia Mallei , в Bacillus Thuringiensis и в Closttridia Symbiobiobacterium ThermoPhilum , Thermoanaerobacter Tengcongensississist и Clostridium Novyi ), IS3 / IS2 / IS600 /IS1329/IS407A (встречается спорадически во всех типах) и ISL3 (в основном присутствует у разных видов Firmicutes). Второй класс мобильных аттенюаторов (рис. 7b) представляет собой семейства родственных переносимых транспозонами последовательностей, расположенных непосредственно выше различных, неродственных клеточных генов.

Рисунок 7

Мобильные элементы и появление новых шумоглушителей . (a) 5′-терминаторы, обнаруженные выше генов, связанных с транспозазой или последовательностью вставки (IS), соответствуют внутренним 5′-элементам IS, которые предотвращают экспрессию IS, когда он встраивается в транскрибируемую область. (b) ИС также содержат внутренние 3′-терминаторы, которые терминируют транскрипцию большинства 3′-генов ИС. Когда родственные IS гены подвергаются псевдогенизации, некоторые 3′-терминаторы могут оставаться активными в качестве аттенюаторов нижестоящих клеточных генов (экзаптация).Поскольку вставка IS может происходить в почти случайных геномных сайтах, сходные кандидаты в аттенюаторы могут быть обнаружены выше полностью неродственных генов.

Появление мобильных аттенюаторов можно объяснить структурой ИС, содержащей как 3′-, так и 5′-терминаторы транскрипции [59, 60] (рис. 7). Терминаторы первого класса соответствуют 5′-терминаторам ИС, функция которых заключается в ограничении пролиферации транспозонов при встраивании в кодирующую область под контролем активного промотора. Такие события транспозиции были бы вредны для хозяина и, следовательно, для собственного выживания элемента.Кластеры консервативных аттенюаторов, расположенных перед неродственными генами (рис. 7б), могут соответствовать 3′-терминаторам ИС. Значительная доля (от 25 до 35%) консервативных терминаторных кластеров, возникающих в результате транспозиции IS, предполагает, что они оказывают значительное влияние на эволюцию генома, особенно с точки зрения регуляции. Возможная псевдогенизация транспонированных генов может позволить экзаптацию их 5′- и/или 3′-терминаторов и дать начало новым регуляторным элементам (Рис. 7b). Следует отметить, что такая экзаптация мобильных элементов для регуляторных функций, вероятно, является универсальным механизмом, так как несколько случаев уже описаны в геномах эукариот [61, 62].

Регулоны, не связанные с вставочной последовательностью

Десять кластеров терминаторов у энтеробактерий и 23 у бацилл обнаружены у разных видов, ассоциированных с одним и тем же набором негомологичных генов. Следовательно, они могут представлять собой регулоны аттенюаторов (таблицы S4 и S5 в дополнительном файле 1). Несколько известных рибопереключателей попадают в этот класс (15 из 23 кластеров в бациллах), что согласуется со способностью рибопереключателей возникать перед неродственными генами отдаленных видов. Таким образом, анализ этих кластеров кажется многообещающим для идентификации новых регулонов, хотя этот класс также содержит последовательности из повторяющихся элементов.Например, самый большой кластер, обнаруженный у энтеробактерий (рис. 8), включает элементы, консервативные выше по течению от gatY , rbfA , cvpA и, в некоторых случаях, mscS , dppB и 6sB 60629 6y929 генов. Несколько членов этого кластера имеют значительное сходство с транскриптом rtT, идентифицированным Bösl и Kersten [63], побочным продуктом оперона tyrT , который может играть роль в строгом ответе, подтверждая биологическую значимость этих кандидатов-аттенюаторов. Интересно, что мы обнаружили, что эти высококонсервативные элементы принадлежат к бактериальным вкрапленным мозаичным элементам (BIME) [64]. Несмотря на то, что это повторяющийся элемент, он, вероятно, также представляет собой добросовестный аттенюатор . В самом деле, было показано, что BIME действуют как двунаправленные терминаторы транскрипции [65] и индуцируют аттенуацию транскрипции при размещении выше репортерного гена тРНК [66]. Высокая консервативность этих повторов как по последовательности, так и по физическому расположению среди энтеробактерий поддерживает сценарий экзаптации, возможно, в качестве системы аттенюаторов.Второй большой кластер аттенюаторов, включающий гены artJ , ygdL , yhfZ и yijO , также соответствует BIME (таблица S4 в дополнительном файле 1).

Рисунок 8

Возможный аттенюатор на основе мозаичных элементов с вкраплениями бактерий (BIME) . Консервативный элемент, обнаруженный перед генами gatY , rbfA и cvpA у энтеробактерий, соответствующий BIME. Синие рамки обозначают терминаторы, черные рамки — возможные антитерминаторы.Сохранение этих повторов в последовательности и положении свидетельствует в пользу их использования в качестве элементов аттенюатора.

Кластеры аттенюаторов, расположенных перед разными генами, предполагают коэкспрессию и, следовательно, функциональные отношения между этими генами. У бацилл такой интересный элемент, который мы назвали « vanR -лидер», был обнаружен выше гена, кодирующего флавиноксидоредуктазу, и гена vanR , кодирующего транскрипционный фактор TCS, участвующий в катаболизме ванилитов (рис. 9). ; выравнивание в дополнительных данных 3 в дополнительном файле 1), что предполагает согласованную регуляцию этих двух генов.Другой общий элемент находится выше оперона переносчика сульфоната ABC и выше неизвестного гена. Следовательно, можно предположить его участие в метаболизме сульфонатов (выравнивание в дополнительных данных 3 в дополнительном файле 1). Наконец, кластер родственных аттенюаторов, который мы назвали « fabH -лидеры», включает элементы, расположенные выше гена fabH , участвующие в метаболизме жирных кислот, и выше генов, кодирующих ДНК-связывающий белок, для которого ассоциация с было бы интересно проверить тот же путь (выравнивание в дополнительных данных 3 в дополнительном файле 1).

Рисунок 9

фургон -лидер . Этот элемент консервативен в бациллах, выше генов, кодирующих флавиноксидоредуктазу и связывающий ДНК элемент TCS (VanR). Кандидаты представлены с использованием тех же условных обозначений, что и на рис. 3.

НАТО, Зимний шторм, Олимпийские игры в Пекине: брифинг в среду вечером

(Хотите получать этот информационный бюллетень на свой почтовый ящик? Вот , подписка .)

Добрый вечер. Вот последние новости в конце среды.

1. Президент Байден одобрил размещение американских войск в Восточной Европе , чтобы успокоить союзников по НАТО, обеспокоенных напряженностью вокруг Украины.

3000 военнослужащих, в том числе 1000 уже находящихся в Германии, направляются в Польшу и Румынию, сообщил Пентагон. США заявили, что не будут вводить войска в Украину в случае конфликта там. «Мы ясно даем понять, что будем готовы защищать наших союзников по НАТО, если до этого дойдет», — заявил представитель Пентагона.

2. Вакцина против Covid, которая нам нужна сейчас, может быть не прививкой.

Имеющиеся в настоящее время вакцины против коронавируса обеспечивают мощный и длительный иммунитет против тяжелых заболеваний. Но их защита от инфекции может дать сбой по мере появления новых вариантов вируса. Разрабатываемые назальные вакцины могут стать лучшими бустерами, останавливая вирус в дыхательных путях. Они также могут быть более быстрыми в применении и более приемлемыми для многих.

3. Огромный зимний шторм бушует по США.S.

Погодная система заблокировала автомагистрали, закрыла школы и отменила рейсы, в некоторых частях Среднего Запада выпало почти фут снега. В Центральном Иллинойсе, где жители привыкли к снегу, официальные лица назвали его сильнейшим штормом за последние годы. В Индианаполисе, где до снега оставалось еще несколько часов, непрекращающийся дождь сделал невозможной обработку дорог солью. В Канзасе и Миссури колледжи и полигоны для тестирования на Covid-19 закрылись из-за скопления снега. В Нью-Мексико закрылись некоторые школы и суды.

Синоптики предупредили, что худшие последствия еще могут произойти: ледяной коктейль из осадков угрожает Техасу, Арканзасу, Теннесси и Кентукки, а также Южной Индиане и Огайо.

4. Джефф Цукер ушел с поста президента CNN после того, как не раскрыл отношения на рабочем месте.

В служебной записке для коллег Цукер написал, что его отношения с Эллисон Голласт, исполнительным вице-президентом CNN и директором по маркетингу, всплыли во время расследования сети в отношении бывшего ведущего Криса Куомо.В заявлении Голласт написала, что отношения между давними коллегами «поменялись» во время пандемии, и что она останется в сети. Обе стороны разведены.

Внезапное окончание девятилетнего пребывания Цукера в должности сразу же бросает вызов CNN и его материнской компании WarnerMedia, которая, как ожидается, будет приобретена в конце этого года Discovery Inc. в результате одного из крупнейших слияний СМИ в стране. .

5. Обещание президента Байдена назвать чернокожую женщину в Верховный суд под номером заставило республиканцев пойти на хитрый политический расчет.

Законодатели взвешивают, следует ли предпринять всемерные усилия или занять более сдержанный подход к кандидату Байдена, сталкиваясь с тем, насколько агрессивно нужно выступать против кандидата и как сделать это, не выглядя при этом расистским и сексистским. Без философского баланса в суде некоторые республиканцы склоняются к «понижению температуры», как выразился сенатор Кевин Крамер.

Отдельно, , наша команда по политике рассмотрела, как демократы могут остановить «красную волну», которую многие предсказывают на промежуточных выборах 2022 года.

6. Тысячи афганцев пытаются проникнуть в Иран и Пакистан каждый день, поскольку доходы иссякли, а опасный для жизни голод стал широко распространенным явлением.

По данным исследователей миграции, в период с октября по январь, когда их страна оказалась на грани массового голода, более миллиона афганцев отправились в Иран. Исход вызвал тревогу в Европе, где политики опасаются повторения миграционного кризиса 2015 года.

Кризисы с мигрантами обостряются и в других местах. Двенадцать мигрантов замерзли в Турции, заявил турецкий министр, обвинив греческих охранников в том, что они раздели их и заставили вернуться через границу. А в Демократической Республике Конго по меньшей мере 60 человек были убиты после того, как боевики напали на импровизированный лагерь, в котором размещались люди, перемещенные в результате насилия.

8. «Музыкант» попал в беду по дороге в Ривер-Сити.

Первый Бродвей был закрыт. Затем звезды шоу Хью Джекман и Саттон Фостер заболели Covid вместе с 60 другими актерами и членами съемочной группы.Теперь, после 10-дневного перерыва во время предварительных просмотров, завтра открывается громкое возрождение мюзикла Мередит Уилсон 1957 года. Вот как шоу восстановилось.

«Я хочу, чтобы люди поняли, что это беспрецедентные времена в театре», — сказал Джекман, который играет мошенника Гарольда Хилла вместе с Мэриан Пару Фостера.

Из других новостей культуры: Долли Партон, Эминем, A Tribe Called Quest, Бек и Карли Саймон впервые номинированы в Зал славы рок-н-ролла.

9. Наше туристическое бюро начинает погружаться в мир. Сегодня мы уносим вас у берегов Гондураса.

Воды, окружающие остров Роатан, предлагают одни из самых доступных мест для дайвинга на рифах. Мезоамериканский риф, живая и разнообразная экосистема, насчитывает около 65 видов кораллов и более 500 видов рыб. По мере того, как путешествия набирают обороты, в регионе основное внимание уделяется тому, чтобы сбалансировать возвращение дайверов с хрупкостью морской среды.

Чтобы получить кусочек Парижа, Дори Гринспен приглашает вас на улицы Сен-Жермен-де-Пре. Район Левого берега полон сладостей, в том числе маленьких ореховых пирожных, известных как финансисты, которые вдохновили на создание этого элегантного и легкого торта.

10. И, наконец, еще шесть недель зимы — может быть.

Панксатони Этим утром Фил выбрался из своего пня в Пенсильвании и увидел свою тень, предсказывая более долгую зиму. Его коллега из Нью-Йорка Чак из Стейтен-Айленда предупредил, что впереди потеплеет.Независимо от того, какую чашку чая вы предпочитаете читать, День сурка остается единственным днем в США, посвященным животным.

Помимо неприятной репутации сада, о Marmota monax мало что известно. Но исследование сурков в штате Мэн, которому уже третий десяток лет, проливает свет на их социальные привычки: эти сурки не ведут одиночный образ жизни, как многие предполагают. Они образуют сплоченный клан с тонкими родственными отношениями. Исследователи надеются, что работа может помочь людям понять преимущества сложных социальных сетей.

Доброй ночи.

Дженнифер Арноу собрала фотографии для этого брифинга.

Ваш вечерний брифинг будет опубликован в 18:00. Восточный.

Хотите узнать о прошлых брифингах? Вы можете просмотреть их здесь .