Ргд 2б: РДГ-2Б ручная дымовая граната белого дыма

Содержание

Войсковая маскировка. (дым.граната РГД-2) — rgd-2.html

Дымовая граната РДГ-2

Дымовая граната РДГ-2 предназначена в качестве индивидуального средства для создания зон задымления с целью маскировки отдельных огневых точек, мелких подразделений, а также для имитации пожара в боевой и иной технике с целью введения противника в заблуждение. Может также применяться для обозначения мест посадки вертолетов и указания для них направления и силы ветра. Граната выпускается в трех модификациях — РДГ-2, РДГ-2х и РДГ-2ч.

РДГ-2 и РДГ-2х выделяют дым белого цвета, но РДГ-2х отличается тем, что вместо запала-спички имеет терочный воспламенитель. На корпусе обеих типов гранат черной краской нанесена буква «Б», указывающая на цвет выделяемого дыма.

От автора. Некоторые полагают, что РДГ-2х это граната со слезоточивым (солдатское название «Синеглазка») или того пуще, нервно-паралитическим газом.

Это не так. «Синеглазка», как ее называют в солдатском обиходе, больше по диаметру и на корпусе имеет кольцевую синюю отличительную полосу шириной около 1 см. Да и применяется она только в учебных целях, поскольку ее раздражающее действие весьма незначительное (чтобы не повредить солдатским глазам), а дым очень прозрачный.

А вот нервно-паралитические ОВ (зарин, зоман, VX, XR) никогда и никем ни в дымгранатах, дымшашках, ни в полицейских, ни в гражданских газовых баллончиках не использовались и не используются. Хотя бы по простой причине — это в большей степени опасно для для самих пользователей, нежели для их противников. Дело в том, что эти ОВ чрезвычайно ядовиты и смертельная концентрация в воздухе составляет тысячные доли миллиграмма. Нервно-паралитическое действие заключается не в том, что якобы человек парализуется на какое то время, а в том, что попав в организм это вещество блокирует прохождение сигналов по нервам и человек либо умирает, либо в лучшем случае получает необратимые тяжелые поражения нервной системы.

ОВ нервно-паралитического действия это не полицейское средство, а сугубо боевое.

И если кто то и когда то скажет вам, что полиция там или сям использовала нервно-паралитические газы, просто перестаньте его уважать. Даже если это президент США Б.Обама или великий демократ А.Собчак. Эти люди злостно лгут. Либо по скудоумию, либо по злому умыслу. Последнее чаще.

РДГ-2ч имеет дым черного цвета и предназначена для имитации пожара машины. На корпусе черной краской нанесена буква «Ч», указывающая на цвет выделяемого дыма.

Во всем остальном гранаты идентичны

Граната представляет собой картонный цилиндрический корпус желто-коричневого цвета диаметром 4.5 см. и высотой 15 см. Вес гранаты 500-600 гр. Время разгорания до 15 секунд, время интенсивного дымовыделения 60-75 секунд. При средних метеоусловиях одна граната РДГ-2 (РДГ-2х) дает непросматриваемое облако белого дыма длиной около 20 метров, а граната РГД-2ч облако дыма черного цвета длиной до 10-15 метров.

С обеих торцов гранаты завальцованы две картонные крышки. С нижнего конца гранаты под крышкой в диафрагме имеются отверстия для выхода дыма, в верхнем конце под крышкой уложена воспламенительная терка, а в диафрагму вставлен запал-спичка и имеются отверстия для выхода дыма.
В качестве дымовой смеси используется смесь хлористого аммония, бертолетовой соли, антрацена и нафталина.

Для применения гранаты необходимо, потянув за нитки, удалить обе крышки крышку, и специальной теркой или же теркой обычного спичечного коробка воспламенить головку запала-спички (у РГД-2х просто резко дернуть шнурок), и немедленно бросить или положить в необходимое место.

Следует иметь в виду, что через 5-10 секунд с момента воспламенения возможен взрыв гранаты, если пользоваться гранатой с истекшим сроком хранения (1 год) или подмоченной. Взрыв не сильный, но личный состав, находящийся ближе 1 метра от гранаты может получить ожоги. Горение отсыревшего дымсостава неустойчивое; для него характерно то почти полное затухание, то бурное выделение дыма вплоть до взрыва, причем эти явления перемежаются. Время горения такой гранаты может затягиваться до 10-15 минут.

Дым инертный, не ядовитый, не вызывающий раздражения глаз или органов дыхания, хотя и издает некоторый запах, похожий на запах дымовых гранат раздражающего действия. Причина в том, что и в тех и в других гранатах в качестве дымообразующего вещества используются одни и те же смеси, только в слезоточивые гранаты дополнительно добавляется ОВ раздражающего действия «адамсит».

Гранаты укупориваются в деревянные ящики по 60 штук. Маркировка хорошо видна на снимке слева.

Перед использованием обязательно обращать внимание на дату изготовления (срок годности гранат 1 год) и на отсутствие признаков имевшего место увлажнения. Такие гранаты опасны в обращении. Процесс горения может перейти во взрыв. Не такой сильный как у бризантных ВВ, но причинить серьезные ожоги может.

Источники

1. Наставление по войсковой маскировке. Часть I. Военное издательство. Москва 1957г.
2. Наставление по войсковой маскировке. Часть II. Военное издательство. Москва 1957г.
3. Е.С.Колибернов, В.И.Корнев, А.А.Сосков. Справочник офицера инженерных войск. Военное издательство. Москва 1989г.
4. Е.С.Колибернов, В.И.Корнев, А.А.Сосков. инженерное обеспечение боя. Военное издательство. Москва 1984г.
5. Учебник. Военно-инженерная подготовка. Военное издательство. Москва 1982г.
6. Учебник. Приемы и способы действий солдата в бою. Военное издательство Москва 1989г.
7. Наставление по обеспечению боевых действий Сухопутных войск. Часть IV. Военное издательство Москва 1982г.
8. Наставление по военно-инженерному делу для Советской Армии. Военное издательство Москва 1984г.
9. Руководство по инженерным средствам и приемам маскировки сухопутных войск.

Часть I. Военное издательство Москва 1985г.

—***—

2 | это… Что такое РДГ-2?

РДГ-2 — советская ручная дымовая граната, предназначенная в качестве индивидуального средства для создания зон задымления с целью маскировки отдельных огневых точек, мелких подразделений, ослепления противника, а также для имитации пожара в боевой технике. Может также применяться для обозначения мест посадки вертолетов и указания для них направления и силы ветра.

Содержание

1 Варианты
2 Описание
3 Применение
4 См. также
5 Источники
6 Ссылки

Варианты

Граната выпускается в четырёх вариантах — РДГ-2Б, РДГ-2Ч, РДГ-2Х и РДГ-2П.

РДГ-2Б. Дым белого цвета. В качестве дымообразующего средства используется антраценовая смесь.
РДГ-2Ч. Дым чёрного цвета. В качестве дымообразующего средства используется антраценовая смесь.
Предназначена в основном для имитации пожара техники.
РДГ-2Х. Дым белого цвета. В качестве дымообразующего средства используется металлохлоридная смесь.
РДГ-2П. Дым белого цвета. В качестве дымообразующего средства используется металлохлоридная смесь. От РДГ-2Х она отличается временем разгорания и длительностью дымообразования.

РДГ-2Б и РДГ-2Ч зажигаются от встроенной запал-спички; для приведения гранаты в действие нужно снять боковые крышки и чиркнуть тёркой по головке запала, чтобы он загорелся. Можно так же зажечь запал от обычной спички или зажигалки. После этого гранату можно бросать.
РДГ-2Х и РДГ-2П вместо запал-спички имеют тёрочный воспламенитель. Для приведения их в действие достаточно резко дёрнуть за тесьму запального приспособления. Обычно это делается вместе с броском гранаты: тесьму запального приспособления надевают на кисть или пальцы и, задержав её в руке, бросают гранату.

Описание

Граната представляет собой картонный цилиндрический корпус желто-коричневого цвета диаметром 4. 5 см и высотой 15 см. Вес гранаты 500—600 гр. Время разгорания до 15 секунд, время интенсивного дымовыделения 60-75 секунд. При средних метеоусловиях одна граната РДГ-2Б даёт непросматриваемое облако белого дыма длиной около 20 метров, а граната РДГ-2Ч облако дыма черного цвета длиной до 10-15 метров.

В качестве дымовой смеси спользуется смесь хлористого аммония, бертолетовой соли, антрацена и нафталина.

Применение

Для примения гранаты необходимо, потянув за нитки, удалить обе крышки, и специальной теркой или же теркой обычного спичечного коробка воспламенить головку запала-спички (у РДГ-2х просто резко дернуть шнурок), и немедленно бросить или положить в необходимое место.

Следует иметь в виду, что через 5-10 секунд с момента воспламенения возможен взрыв гранаты, если не открыты отверстия для выхода дыма или же иным способом препятствовать свободному выходу дыма. Тоже самое происходит, если пользоваться гранатой с истекшим сроком хранения (1 год). Взрыв не сильный, но личный состав, находящийся ближе 1 метра от гранаты может получить ожоги. Горение отсыревшего дымсостава неустойчивое; для него характерно то почти полное затухание, то бурное выделение дыма вплоть до взрыва, причем эти явления перемежаются. Время горения такой гранаты может затягиваться до 10-15 минут.

См. также

Дымовая завеса
Дымовая граната
Маскировка

Источники

Часть I // Наставление по войсковой маскировке. — Москва: Военное издательство министерства обороны Союза ССР, 1957.
Часть II // Наставление по войсковой маскировке. — Москва: Военное издательство министерства обороны Союза ССР, 1957.
Е.С.Колибернов, В.И.Корнев, А.А.Сосков Справочник офицера инженерных войск. — Москва: Военное издательство, 1989.
Е.С.Колибернов, В.И.Корнев, А.А.Сосков Инженерное обеспечение боя. — Москва: Военное издательство МО СССР, 1984.
Учебник // Военно-инженерная подготовка. — Москва: Военное издательство МО СССР, 1982.

Учебник // Приемы и способы действий солдата в бою. — Москва: Военное издательство МО СССР, 1989.
Наставление по обеспечению боевых действий Сухопутных войск Часть IV // Инженерное обеспечение, действия частей и подразделений инженерных войск. — 1982.
Наставление по военно-инженерному делу для Советской Армии. — Москва: Военное издательство МО СССР, 1984.

Ссылки

weapon.at.ua

рдг-2ч(черный дым), рдг-2б(белый дым), дм-п, шд-б (блочная), бдш-5, бдш-15.

Металлохлоридные смеси.

Порошок Al, железная окалина, гексахлорэтан (C₂Cl₆). Поджог смеси производится запалом

Температура горения 1000 С⁰

FeO*Fe₂O₃(Fe₃O₄) +C₂Cl₆=FeCl₃+CO₂+CO+COCl₂+C+Q

Al + C₂Cl₆ = 2 AlCl₃ + 2 C + Q

Хлорид Ме возгорается и образуют дым, т.к. они гигроскопичны, то в воздухе они образуют капли тумана.

Снаряжаются: РДГ-2, РДГ-2х, ДМХ-5, УДШ (Al – повышает Т_Гшашки).

Белый фосфор – один из лучших дымообразователей по своей ….. способности, по количеству образовавшегося дыма на единицу веса дымообразователя.

На воздухе Р самовозгарается и горит с образованием плотного дыма

4 P + 5O₂  2 P₂O₅

P₂O₅ + 3 H₂O  2 H₃PO₄

Белый Р ядовит им снаряжают арт. Снаряды, мины и авиационные бомбы.

Жидкие дымовые смеси.

Дымовая смесь №1 которая состоит из коксового дистилята и солярового масла (ДТ). Может применяться при Т до –40С⁰

Используется в машинах ТДА М, ТДА-2М, ТМС-65 и в генераторе АГП, термической аппаратуре танков, боевых машин.

Классификация дымообразующих средств, шашек, гранат, дымовых патронов

Ручные дымовые гранаты: РДГ-2б, РДГ-2ч, РДГ-2х, РДГ-П
Дымовые шашки

Малые: ДМ-11, ДМХ-5, ДМ-ММ
Унифицированная дымовая шашка (УДШ)
Блочная дымовая шашка (ШД-Б)
Большие: БДШ-5, БДШ-15

Зажигательно-дымовой патрон (ЗДП)

Артиллерийские дымовые снаряды и мины

Авиационные дымовые бомбы

Унифицированная система запуска дымовых гранат (система 902)

Термическая дымовая аппаратура на бронетанках

Аэрозольный генератор переносной (АГП)

Дымовые машины (ТДА-М, ТДА-2М, ТМС-65)

Ручные дымовые гранаты (имеется четыре образца) предназначены для постановки кратковременных дымовых завес в ближнем бою одиночными солдатами и мелкими подразделениями; при соприкосновении с противником могут применяться для его ослепления; кроме того, гранаты черного цвета могут использоваться для имитации пожаров на войсковых объектах и военной технике.

Характеристика ручных дымовых гранат.

Параметр	РДГ-П	РДГ-2х	РДГ-2б	РДГ-2ч
Масса, кг	0,5	0,5 — 0,6	0,5 — 0,6	0,5 — 0,6
Время разгорания, с	3,5	До 10	До 15	До 15
Продолжительность интенсивного дымообразования, мин	1 — 2	1 — 1,5	1 — 1,5	1 — 1,5
Длина непросматриваемой полосы, м	35	25 — 35	20 — 25	10 — 15

Характеристика дымовых шашек.

Показатели	ДМ-11М	ШД-ММ	УДШ	ШД-Б		БДШ-5	БДШ-15
Показатели	ДМ-11М	ШД-ММ	УДШ	шашка	блок	БДШ-5	БДШ-15
Длина непросматриваемой завемы, м	Не более 50	70 — 100	100 — 150	110-150	Более 300	Более 200	Не более 125
Продолжительность дымообразования, мин разгорания, с (не более)	5 – 7 30	3 — 4,5 7	8 – 10 10	4 – 6 10	12 – 18 10	5-7 30	15-17 30
Диапазон маскирующего действия, мин	0,4-0,76	0,4-1,5	0,4-1,5	0,4-1,5	0,4-1,5	0,4-0,76	0,4-0,76
Масса, кг	2,2-2,4	3	13,5	7,4	23,6	40	44
Размеры, мм высота диаметр	99 160	99 160	139 318	400 136	470 420	485 420	485 420
Тип запала	тёрочный		Ударный механизм и воспламенитель

Характеристика зажигательно-димового патрона.

Масса, кг	0,75
Габаритные размеры, мм длина диаметр	287 49,2
Время дымообразования, с	90-20
Длина непросматриваемой дымовой завесы при средних метео-условиях, м	10-15
Дальность полета ракеты при выстреле патрона с упора под угло 45⁰, м	500-600
Время разгорания, при метании рукой, с	5
Время приведения в действие, с	5-10
Время форса пламени, м	0,4-0,6
Температура пламени, С⁰	До 1400
Основа составляющей дымовой смеси	фосфор

ЗАЖИГАТЕЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА И ДЫМООБРАЗУЮЩИЕ— 7-

Генетически модифицированный белок 2b вируса аспермии томатов в качестве носителя для доставки миРНК, нацеленной на опухоль

. 2014 ноябрь;10(11):4778-4786.

doi: 10.1016/j.actbio.2014.07.014. Epub 2014 19 июля.

Пак Юн Ён ¹ , Миуэ Джанг ¹ , Чон Хван Ким ¹ , Хён Джун Ан ²

Принадлежности

¹ Центр Theragnosis, Институт биомедицинских исследований, Корейский институт науки и технологий, Seongbuk-Gu, Seoul 136-791, Южная Корея.
² Центр Theragnosis, Институт биомедицинских исследований, Корейский институт науки и технологий, Seongbuk-Gu, Seoul 136-791, Южная Корея. Электронный адрес: [email protected]. kr.

PMID: 25050774
DOI: 10.1016/j.actbio.2014.07.014

Ын Ён Пак и др. Акта Биоматер. 2014 ноябрь

. 2014 ноябрь;10(11):4778-4786.

doi: 10.1016/j.actbio.2014.07.014. Epub 2014 19 июля.

Авторы

Пак Юн Ён ¹ , Миуэ Джанг ¹ , Чон Хван Ким ¹ , Хён Джун Ан ²

Принадлежности

¹ Центр Theragnosis, Институт биомедицинских исследований, Корейский институт науки и технологий, Seongbuk-Gu, Seoul 136-791, Южная Корея.
² Центр Theragnosis, Институт биомедицинских исследований, Корейский институт науки и технологий, Seongbuk-Gu, Seoul 136-791, Южная Корея. Электронный адрес: [email protected].

PMID: 25050774
DOI: 10.1016/j.actbio.2014.07.014

Абстрактный

В природе существует широкий спектр dsRNA-связывающих белков, которые имеют разные способы связывания с малыми интерферирующими РНК (siRNA), а также структурные различия, и некоторые из этих белков потенциально могут быть эффективными носителями доставки siRNA. Чтобы доставить миРНК в раковые клетки, dsRNA-связывающий белок 2b, полученный из вируса аспермии томатов, был генетически модифицирован путем слияния пептида RGD, нацеливающего интегрин, на его С-конец и подвергнут биосинтезу. Полученный белок 2b-RGD обладает отчетливыми характеристиками, благоприятными для биомедицинского применения миРНК: (i) высокое сродство к миРНК, (ii) защита миРНК от РНКаз в сыворотке, (iii) низкая цитотоксичность по сравнению с поликатионными полимерами, часто используемыми в обычных носителях миРНК. , (iv) специфическое связывание с интегринами на раковых клетках и способность проходить через клеточную мембрану посредством эндоцитоза, и (v) способность способствовать цитозольному высвобождению siRNA. Здесь мы демонстрируем, что комплексы 2b-RGD/siRNA обладают большим потенциалом в качестве носителя доставки siRNA, нацеленного на опухоль, и предлагаем их возможное терапевтическое применение для лечения рака.

Ключевые слова: Лечение рака; РНКи; рекомбинантные белки; нацеливание на опухоль; носитель доставки миРНК.

Цитируется

Бактериальные компоненты как естественные наноносители для доставки лекарств/генов и иммунизации: заставить жуков работать?
Фарджадиан Ф., Могофей М., Миркиани С., Гасеми А., Раби Н., Хадифар С., Бейзави А., Карими М., Хамблин М.Р. Фарджадиан Ф. и др. Биотехнология Adv. 2018 июль-август;36(4):968-985. doi: 10.1016/j.biotechadv.2018.02.016. Epub 2018 28 февраля. Биотехнология Adv. 2018. PMID: 29499341 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Исследование сконструированных рибонуклеопротеиновых частиц для улучшения пероральной доставки РНК-интерференции к насекомым-вредителям сельскохозяйственных культур.
Gillet FX, Garcia RA, Macedo LLP, Albuquerque EVS, Silva MCM, Grossi-de-Sa MF. Gillet FX и др. Фронт Физиол. 2017 28 апр; 8:256. дои: 10.3389/ффиз.2017.00256. Электронная коллекция 2017. Фронт Физиол. 2017. PMID: 28503153 Бесплатная статья ЧВК.
Нагруженная миРНК поли(гистидин-аргинин) ₆ -модифицированная наночастица хитозана с повышенной способностью проникать в клетки и проникать в эндосомы для подавления метастазирования опухоли молочной железы.
Сунь П., Хуан В., Кан Л., Джин М., Фань Б., Джин Х., Ван К.М., Гао З. Сан П. и др. Int J Наномедицина. 2017 19 апр;12:3221-3234. doi: 10.2147/IJN.S129436. Электронная коллекция 2017. Int J Наномедицина. 2017. PMID: 28458542 Бесплатная статья ЧВК.

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Сравнение скоростей биоконверсии и характеристик проникновения в клетки Caco-2 циклических пролекарств на основе кумарина и линейных пролекарств на основе метиловых эфиров пептидомиметиков RGD

Сравнительное исследование

. 1998 авг.; 15(8):1174-81.

дои: 10.1023/а:1011975404789.

ГП Камениш ¹ , W Wang, B Wang, R T Borchardt

принадлежность

¹ Факультет фармацевтической химии, Канзасский университет, Лоуренс 66047, США.

PMID: 9706046
DOI: 10.1023/а:1011975404789

Сравнительное исследование

GP Camenisch et al. Фарм Рез. 1998 авг.

. 1998 авг.; 15(8):1174-81.

дои: 10.1023/а:1011975404789.

Авторы

ГП Камениш ¹ , В. Ван, Б. Ван, Р. Т. Борхардт

принадлежность

¹ Факультет фармацевтической химии, Канзасский университет, Лоуренс 66047, США.

PMID: 9706046
DOI: 10.1023/а:1011975404789

Абстрактный

Цель: Сравнить скорости биоконверсии в различных биологических средах и характеристики проникновения в клетки Caco-2 циклических пролекарств на основе кумарина (3a, 3b) и линейных пролекарств на основе метилового эфира (1b, 2b) двух RGD-пептидомиметиков (1a, 2a).

Методы: Скорость биоконверсии пролекарств в RGD-пептидомиметики определяли в солевом растворе равновесий Хенка (HBSS), pH 7,4, при 37°C и в различных известных биологических средах (плазма крови человека, гомогенат печени крысы, гомогенат клеток Caco-2). обладать эстеразной активностью. Скорость транспорта пролекарств и пептидомиметиков RGD определяли с использованием монослоев клеток Caco-2, модели слизистой оболочки кишечника in vitro на культуре клеток. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ. В HBSS, pH 7,4 циклические пролекарства на основе кумарина 3a и 3b медленно и количественно деградировали до RGD-пептидомиметиков 1a и 2a соответственно (3a, t1/2 = 630+2-14 мин; 3b, t1/2 = 301 +/-12 мин). Линейные пролекарства на основе метилового эфира 1b и 2b были более устойчивы к химическому гидролизу (1b и 2b, t1/2 > 2000 мин). Как циклические пролекарства на основе кумарина, так и линейные пролекарства на основе метилового эфира быстрее разлагались в биологических средах, содержащих эстеразную активность (например, 90% плазмы крови человека: 1b, t1/2 < 5 мин; 2б, t1/2 < 5 мин; 3а, t1/2 < 91+/-1 мин; 3б, 1/2 < 57+/-2 мин). Когда характеристики проникновения из апикальной (AP) в базолатеральную (BL) определяли с использованием монослоев клеток Caco-2, было обнаружено, что пролекарства метилового эфира 1b и 2b подвергались эстеразной биоконверсии (> 80%) в пептидомиметики RGD 1a и 2a, соответственно. Напротив, циклические пролекарства 3a и 3b проникали в клеточные монослои в неизменном виде. Учитывая появление как пролекарства, так и пептидомиметика RGD на стороне BL, пролекарства метилового эфира 1b и 2b были примерно в 12 раз более способны к проникновению, чем пептидомиметики RGD 1a и 2a. Когда был проведен аналогичный анализ транспортных данных для пролекарств кумарина 3a и 3b, было показано, что они обладают приблизительно в 6-кратной и 5-кратной большей способностью к проникновению, чем RGD-пептидомиметики 1a и 12a, соответственно.

Вывод: Циклические пролекарства на основе кумарина 3a и 3b были химически менее стабильны, но метаболически более стабильны, чем линейные пролекарства на основе метилового эфира. Эстеразная стабильность циклических пролекарств 3a и 3b означает, что они транспортируются неповрежденными через монослой клеток Caco-2, в отличие от пролекарств метилового эфира 1b и 2b, которые претерпевают легкую биоконверсию во время их транспорта в пептидомиметики RGD. Однако обе системы пролекарств успешно доставляли больше (в 5-12 раз) RGD-пептидомиметика и/или предшественника (пролекарства), чем сами RGD-пептидомиметики.

Цитируется

Экстракт дягиля архангелического вызывал возмущение кожи крысы и белка плотных соединений (ZO-1) клеток HaCaT.
Каушал Н., Наз С., Тивари А. Каушал Н. и соавт. Дару. 2011;19(1):1-11. Дару. 2011. PMID: 22615634 Бесплатная статья ЧВК.
Активируемые циклизацией пролекарства.
Гомес П., Вале Н., Морейра Р. Гомес П. и др. Молекулы. 2007 12 ноября; 12 (11): 2484-506. дои: 10.3390/12112484. Молекулы. 2007. PMID: 18065953 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

использованная литература

1. Фарм Рез. 1996 ноябрь; 13 (11): 1615-23 — пабмед
1. J Med Chem. 1996 8 ноября; 39 (23): 4583-91 — пабмед
1. Biochem J. 1953, январь; 53 (1): 110–7. — пабмед
1. J Med Chem. 1993 25 июня; 36 (13): 1811-9 — пабмед
1. J Med Chem. 1996 24 мая; 39 (11): 2118-22 — пабмед

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Экзосомы клеток A549, индуцированные миграцией, инвазией и ЭМП клеток BEAS-2B, связанных с let-7c-5p и miR-181b-5p

Введение

Являясь основной причиной смерти, рак угрожает здоровью человечества во всем мире. Согласно отчетам Глобальной статистики рака за 2020 год, рак легких был одним из наиболее часто диагностируемых видов рака среди различных типов рака: примерно 2,24 миллиона новых случаев (11,4%) и 1,8 миллиона смертей (18%), что свидетельствует о том, что рак легких был основной причиной смертности от рака в 2020 г. (1). Хотя диагностика и лечение рака легкого за последние несколько лет стали более точными, метастазирование опухоли остается самым большим препятствием для эффективности лечения и прогноза рака легкого, что приводит к высоким показателям смертности (2). Таким образом, дальнейшее изучение патогенеза рака легкого и механизма метастазирования имеет решающее значение.

Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) представляет собой широко распространенный физиологический и патологический обратимый динамический процесс роста, развития и заболевания (3). При ЭМП изменяются цитоскелет и характеристики эпителиальных клеток, а также снижается уровень маркеров эпителиальной поверхности, например Е-кадгерина. После ЭМП эпителиальные клетки приобретают мезенхимальный фенотип и снижают внутриклеточную адгезию и пролиферативную способность, что, в свою очередь, усиливает инвазию и миграцию раковых клеток (4). Множество исследований показывают, что экзосомы принимают участие в процессе ЭМП при раке легкого путем передачи индуцированных мезенхимой сигналов, которые побуждают раковые клетки с большей вероятностью мигрировать в отдаленные места (5–7). Экзосомы представляют собой биологические везикулы, которые содержат большое количество биологически активных молекул, таких как белки, мРНК и микроРНК (8). Поскольку экзосомы переносят в клетки-реципиенты различные биологические молекулы, последние могут приобретать специфичность клеток-доноров (9).). Кроме того, экзосомы, происходящие из опухолевых клеток, связаны с возникновением, пролиферацией и инвазией опухолей, что может индуцировать приобретение нормальными клетками соответствующих опухолевых характеристик и злокачественную трансформацию (10). Аберрантно экспрессируемая экзосомальная миРНК, происходящая из опухолевых клеток, может влиять на прогрессирование рака и метастазирование (11; 12). ЕМТ — важный процесс ранней стадии инициации опухоли, тесно связанный с опухолевым ростом, метастазированием и ангиогенезом. Опухолевые клетки, подвергающиеся ЕМТ, повышают способность к миграции и инвазии (13).

Наша предыдущая работа показала, что ослабление экзосомальной миР-34c-3p способствует инвазии и метастазированию НМРЛ путем изменения интегрина α2β1. Здесь мы выделили и идентифицировали экзосому, полученную из опухолевых клеток, чтобы исследовать ее влияние на ЭМП, миграцию и инвазию нормальных эпителиальных клеток, а также на жизненно важные функции биомолекул во время этого процесса.

Материалы и методы

Клеточные культуры и реагенты

В этом исследовании использовали две клеточные линии, а именно, клетки A549 (линия эпителиальных клеток аденокарциномы легких человека) и клетки BEAS-2B (линия эпителиальных клеток бронхов человека), которые были получены от iCell Bioscience Inc. (Шанхай, Китай). Обе клеточные линии приобрели короткие тандемные повторы (STR). А549клетки культивировали в среде Ham’s F-12K (Kaighn’s), а клетки BEAS-2B — в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% истощенной по экзосомам эмбриональной бычьей сыворотки EXO-FBS-50A-1 (System Biosciences, Пало-Альто, Калифорния), чтобы избежать помех от бычьих экзосом и с 1% раствором пенициллина-стрептомицина (Tianhang Biotechnology, Ханчжоу, Китай). Клетки инкубировали при 37°C и в атмосфере 5% CO ₂ (14).

Выделение экзосом

Клетки A549 высевали и хорошо прикрепляли в течение ночи; среду для культивирования клеток получали через 48 ч. Экзосомы выделяли с помощью дифференциального центрифугирования, как описано (15; 16). Среду центрифугировали при 300 град.0363 г на 10 мин, чтобы истощить остаточные клетки. Супернатанты собирали и центрифугировали при 2000 g в течение 10 минут для удаления клеточного дебриса. Супернатант фильтровали через фильтр 0,22 мкм (EMD Millipore Corporation, Дармштадт, Германия) для удаления апоптотических телец и микровезикул; затем экзосомы осаждали ультрацентрифугированием при 100 000 g в течение 90 мин при 4°C. Наконец, осадки ресуспендировали, промывали в фосфатно-солевом буфере (PBS) и снова центрифугировали при 100 000×9.0363 г еще на 90 мин.

Идентификация экзосом

Подготовленные экзосомы визуализировали с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) (17). Вкратце, экзосомы ресуспендировали в PBS после центрифугирования, затем помещали на медную сетку с углеродным покрытием и инкубировали с 2% ацетатом уранила. Изображения были получены с использованием JEM-1400, работающего на 80,0 кВ. Анализ распределения экзосом по размерам выполняли в системах анализа отслеживания наночастиц (NTA) NanoSight (NTA 3.0., Malvern Instruments, Великобритания), оснащенных высокочувствительной камерой sCMOS. Подготовленные экзосомы вручную загружали в камеру для образцов при температуре окружающей среды (18). Каждый образец должен быть измерен в трех повторностях. Поверхностные маркеры экзосом идентифицировали вестерн-блоттингом для β-катенина (Cell Signaling Technology, Inc., Массачусетс, США), CD81 (Abcam Biotechnology, Калифорния), TSG101 (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) и CD63 (AbcamBio). Технология, Калифорния).

Клинические образцы сыворотки

В этом исследовании принимали участие здоровые люди (n =21) и больные немелкоклеточным раком легкого (NSCLC) (n =37) из Второй народной больницы (Датун, Китай). Все образцы сыворотки были собраны для инсоляции экзосом. Протокол исследования был одобрен комитетами по этике Второй народной больницы Датуна. Формы информированного согласия были предоставлены пациентам, подписавшимся для подтверждения сбора образцов.

Анализ заживления ран

Анализ заживления ран in vitro использовали для измерения подвижности клеток BEAS-2B после обработки выделенными экзосомами, полученными из клеток A549, как описано ранее (14). Вкратце, клетки собирали и ресуспензию фильтровали с помощью клеточного фильтра для получения суспензии одиночных клеток. После прикрепления в течение ночи в шестилуночных планшетах клетки, достигшие слияния, подтверждали. Прямую царапину обрабатывали наконечником пипетки объемом 10 мкл на монослойных клетках. PBS использовали для осторожного вымывания отщепляющихся клеток. Клетки инкубировали с различными концентрациями экзосом (15, 30 и 60 мкг/мл) соответственно. Изображения заживления ран были получены в разное время лечения экзосомами. Восстановленную область измеряли для расчета подвижности клеток в соответствии с процентом заживления.

Анализ инвазии

Камеры Transwell (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany) применяли для получения способности клеток к инвазии. Процедура выполнялась рутинно, как описано ранее (16). Смесь Matrigel (Corning Costar, Corning, NY) со средой сначала наносили на апикальную камеру; затем высевали 2×10 ⁵ клеток. Полную среду, содержащую заданную концентрацию экзосом (0, 30 и 60 мкг/мл), добавляли в базолатеральные камеры в качестве хемоаттрактанта. После проникновения клеток в течение 24 часов для фиксации верхней камеры использовали метанол перед окрашиванием 0,05% кристаллическим фиолетовым. Изображение мигрировавших клеток получали под микроскопом (Olympus Life Science, Токио, Япония). Для количественной оценки было отобрано более девяти изображений случайных полей. Программное обеспечение IMAGE-J (http://imagej.nih.gov/ij/) использовали для количественной оценки, а затем анализировали сравнение мигрировавших клеток и общего количества прикрепленных клеток для каждой группы.

Вестерн-блоттинг

Как кратко описано в нашем предыдущем отчете (19), предварительно обработанные клетки собирали и дважды промывали ледяным PBS, а затем механически лизировали в буфере для радиоиммунопреципитации (RIPA) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). ), дополненный предварительно смешанным реагентом Proteinase Inhibitor (Cell Signaling Technology, Дэнверс, Массачусетс, США) и фенилметилсульфонилфторидом (PMSF, Cell Signaling Technology, Дэнверс, Массачусетс, США). Концентрацию очищенных белков количественно определяли с помощью набора для анализа белков с бицинхониновой кислотой (BCA, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).

Белки одинакового качества (50 мкг/дорожка) разделяли с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и блокировали после переноса на мембраны из поливинилиденфторида (PVDF) (Millipore, Boston, MA). Затем блоты инкубировали с первичными антителами в течение ночи согласно протоколу. Соответствующие вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (1:10 000, Cell Signaling Technology, США), обрабатывали в течение 2 часов. Блоты были обнаружены Western Lightning ^® Plus-ELC kit (PerkinElmer, Массачусетс, США) и экспонирование с помощью ChemiDoc™ XRS+ (Bio-Rad, Калифорния, США). Включенные антитела были следующими: первичные антитела β-катенин (1:1000, Cell Signaling Technology, США), HSP70 (1:2000, Bioworld Technology, Китай), TSG101 (1:1000, Cell Signaling Technology, США), CD63 (1:1000, Abcam, США) и CD81 (1:1000, Abcam, США), а также вторичные антитела HRP антимышиные (1:10000, Bioworld Technology, Китай) и антикроличьи (1:2000, Cell Signaling Technology, США).

Временные трансфекции

миметики и ингибиторы микроРНК [отрицательный контроль (NC), миметик/ингибитор let-7c-5p и миметик/ингибитор miR-181-5p], используемые для временных трансфекций, были синтезированы GenePharma, Inc. (Шанхай, Китай). ). Экспериментальная процедура следовала инструкциям производителя. Для каждого трансфицированного образца РНК разбавляли 50 мкл Opti-MEM и перемешивали путем осторожного пипетирования от трех до пяти раз, а 1,0 мкл Lipofectamine 2000 (Invitrogen) разводили 50 мкл Opti-MEM. Затем два указанных выше реагента смешивали в концентрации 50 нМ и инкубировали при комнатной температуре в течение 20 мин. После того как клетки BEAS-2B достигли 70% слияния, добавляли по 100 мкл на лунку трансфекционного комплекса. Клетки собирали для последующих исследований через 24/48 ч после трансфекции.

Подготовка РНК и анализы RT-qPCR

Набор для выделения РНК экзосом (System Biosciences, Пало-Альто, Калифорния) использовали для выделения и концентрирования экзосом, содержащих РНК, в соответствии с инструкциями производителя. Суммарную РНК экзосом, происходящих из клеток A549 (15, 30 и 60 мкг/мл), подвергнутых постобработке клеток BEAS-2B через 24 часа, выделяли с использованием тризола (Thermo, MA, USA) с последующей очисткой изопропанолом и этиловым спиртом. алкоголь. Для растворения выделенной РНК использовали воду без РНКазы; затем было проведено количественное измерение с помощью платформы Thermo Scientific™ Nanodrop2000 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Набор Mir-X™ miRNA qRT-PCR SYBR Kit (TaKaRa, Япония) был адаптирован для синтеза комплементарной ДНК (кДНК) с равным количеством микроРНК (или РНК). Соответствующие уровни РНК оценивали с помощью количественной ПЦР Agilent StrataGene Mx3000P (Agilent Technologies, США) с SYBR 9.0007 ® Green Real-Time PCR Master Mix (Toyobo, Осака, Япония) и анализировали с использованием метода 2 ^-ΔΔCt (20). Последовательности праймеров мРНК, которые были задействованы в нашем исследовании, представлены в таблице 1. Количественное определение микроРНК проводили с использованием прямого праймера (TaKaRa, Япония), который был разработан для обнаружения зрелых hsa-Let-7c-5p и miR-181b- 5р. Последовательности праймеров микроРНК, которые использовались при количественном определении, перечислены в Таблице 1. Универсальный праймер, включенный в набор, применяли в качестве обратного праймера, а U6 использовали в качестве внутреннего эталона для регулирования экспрессии микроРНК.

Таблица 1 Последовательности праймеров мРНК/миРНК.

Прогноз генов-мишеней

Для изучения потенциального пути-мишени let-7c-5p и miR-181b-5p впоследствии в исследовании был использован анализ биоинформатики. Вкратце, TargetsScan (http://www.targetscan.org/mamm_31/), PicTar (https://pictar.mdc-berlin.de/cgi-bin/PicTar_vertebrate.cgi) и miRDB (http://mirdb. org/mirdb/index.html) применяли для получения мишени микроРНК субъекта. Относительные гены НМРЛ были получены из следующих баз данных: GeneCards (https://www.genecards.org/), Disgenet (https://www.disgenet.org/), TTD (http://db.idrblab. net/ttd/) и OMIM (https://www.omim.org).

Биоинформатический анализ

После сравнения был получен набор данных, содержащий общие мишени, scilicet NSCLC или относительные мишени рака легких, основанные на микроРНК объекта. Сеть взаимодействия была построена и проанализирована с помощью Cytoscape 3.8, а общие цели были получены с помощью Venny 2.1.0. База данных STRING использовалась для создания сети белок-белковых взаимодействий (PPI) с Homo sapiens в качестве целевого организма. Для исследования взаимодействия генов-мишеней и получения параметров сети PPI результаты базы данных STRING были экспортированы, а затем модифицированы Cytoscape (версия 3.8) и рассчитаны NetworkAnalyzer.

Для изучения основного механизма пути и действия и биологических путей, связанных с общими мишенями, для доступа к важной информации был проведен анализ пути Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) и генетической онтологии. DAVID Bioinformatics Resources 6.8 (https://david.ncifcrf.gov/) был использован для обработки пути KEGG и анализа обогащения GO общих целей. Полученные сроки соответствовали условию р <0,05. Визуализация результатов осуществлялась с помощью программного обеспечения R.

Статистический анализ

Графики были созданы с использованием GraphPad Prism версии 5. 00 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США), а данные были проанализированы с помощью SPSS 15.0 (SPSS, Inc., Чикаго, Иллинойс, США). Для анализа различий между группами использовали ANOVA, и t -критерий был принят для двух или более независимых выборок. Все зарегистрированные различия со значениями p <0,05 были статистически значимыми.

Результаты

Характеристика очищенных экзосом

Экзосомы представляют собой небольшие внеклеточные везикулы (ВВ), которые естественным образом разлагаются из клеток и формирование которых ограничено двойным липидным слоем и не может делиться и реплицироваться (8). Экзосомы выделяли из супернатантов культуры клеток A549 дифференциальным ультрацентрифугированием, а затем характеристики этих везикул проверяли с помощью TEM, NTA и вестерн-блоттинга. Наблюдение с помощью ПЭМ показало, что в изолированных экзосомах видны небольшие круглые везикулы чашеобразной формы, которые остаются интактными и имеют диаметр в диапазоне примерно 100 нм (рис. 1А). NTA показал, что везикулы были однородными по размеру со средним числом 150 нм (рис. 1B). Чтобы дополнительно подтвердить характеристику очищенных экзосом, были проведены анализы вестерн-блоттинга для обнаружения маркерных белков экзосом (HSP70, TSG101, CD63 и CD81) в A549.клетки, клетки BEAS-2B и производные от них экзосомы (рис. 1C). Как и ожидалось, наши результаты показали, что уровни экспрессии белка семейства белков тетраспанинов CD63 и CD81 и семейства цитозольных белков TSG101 были выше в экзосомах, чем в буфере для лизиса клеток. Мы также наблюдали, что отрицательный маркерный белок β-катенин был ослаблен в экзосомах (рис. 1C). Эти результаты подтверждают вывод о том, что изолированные везикулы в клетках A549 и клетках BEAS-2B были настоящими экзосомами и доступны в последующих экспериментах.

Рисунок 1 Идентификация изолированных экзосом из клеток A549 и клеток BEAS-2B . (A) Трансмиссионная электронная микроскопия показывает, что выделенные экзосомы из клеток A549 и клеток BEAS-2B являются везикулоподобными; представленный масштаб равен 100 нм. (B) Выделенные экзосомы измеряли с помощью технологии NanoSight для определения распределения по размеру. (C) Вестерн-блоттинг применяли для проверки экспрессии родственных белков β-катенина, HSP70, TSG101, CD63 и CD81.

Экзосомы из клеток A549, индуцированные миграцией и инвазией клеток BEAS-2B

Экзосомы содержат массивные биологически активные молекулы, которые могут быть доставлены в клетки-реципиенты и изменить их биологическое поведение. Несколько исследований показали, что экзосомы могут индуцировать рост опухоли и изменять микроокружение раковых клеток, а затем способствовать размножению, миграции и инвазии опухоли (7, 21, 22). Концентрацию экзосом определяли количественно с использованием набора белковых реагентов на основе бицинхониновой кислоты. Изучить способность к миграции и инвазии клеток BEAS-2B после обработки несколькими концентрациями (0, 15, 30 и 60 мкг/мл) экзосом, полученных из A549.клеток, мы выполнили анализ заживления ран и анализ клеточной инвазии. Результаты показали, что при повышенной концентрации экзосом, полученных из клеток A549, клеточная миграция и инвазия (рисунки 2A–D) клеток BEAS-2B значительно увеличивались в зависимости от времени и дозы в модели соскоба раны и в камере Transwell. модель.

Рисунок 2 Миграция и инвазия клеток BEAS-2B после обработки экзосомами, полученными из клеток A549. (A) Миграция клеток BEAS-2B, индуцированная различными концентрациями (0, 15, 30 и 60 мкг/мл) A549-экзосомы клеточного происхождения через 0, 12 и 24 часа показаны в анализе заживления ран. Статистический анализ изменений расстояния царапины миграции (B) и количества клеток инвазии (C) ; значимая разница между экспериментальной и контрольной группами указана как ** p < 0,01, *** p < 0,001 и n ≥ 3. , 30 и 60 мкг/мл) экзосом, полученных из клеток A549, через 12 и 24 ч показано в анализе инвазии.

Экзосомы, полученные из клеток A549 Модифицированный ЕМТ-маркер клеток BEAS-2B

Всем известно, что раковые клетки могут приобретать способность к миграции посредством ЕМТ, что тесно связано с инициацией миграции и инвазии. Поскольку экзосомы, полученные из клеток A549, могут вызывать миграцию и инвазию в клетки BEAS-2B, мы также исследовали, участвуют ли экзосомы, полученные из клеток A549, в стимулирующих эффектах EMT после совместного культивирования клеток BEAS-2B; изменения в биомаркерах EMT были протестированы с помощью вестерн-блоттинга и количественной ПЦР в реальном времени (RT-qPCR). Как разновидность молекул межклеточной адгезии (ICAM), N-кадгерин и Е-кадгерин в основном распределяются по мезенхимальному и эпителиальному фенотипу, соответственно (23, 24). Виментин также считается биомаркером ЕМТ и часто гиперэкспрессируется, когда раковые клетки приобретают свой мезенхимальный фенотип (25). Как и ожидалось, наши результаты показали, что мезенхимальные маркеры N-кадгерин и виментин в клетках BEAS-2B повышались как на пре-, так и на посттранскрипционном уровнях после обработки A549.-экзосомы клеточного происхождения. Однако экспрессия эпителиального маркера E-кадгерина показала совершенно противоположную тенденцию (рис. 3A, B). Все исследования показывают, что экзосомы, полученные из клеток A549, модифицировали экспрессию производителей EMT в клетках BEAS-2B.

Рисунок 3 Экзосомы, полученные из клеток A549, стимулировали ЭМП в клетках BEAS-2B. (A) Маркеры EMT клеток BEAS-2B были обнаружены вестерн-блоттингом после совместного культивирования с экзосомами, полученными из клеток A549. (B) Релевантная экспрессия мРНК ЕМТ-специфических маркеров клеток BEAS-2B после совместного культивирования с A549Экзосомы клеточного происхождения измеряли с помощью RT-qPCR. (C) Экспрессия let-7c-5p, miR-17-3p, miR-92b-3p, miR-92b-5p, miR-155-5p, miR-181b-5p, miR-200b-3p, и миР-224-5p в экзосомах, секретируемых клетками A549 и клетками BEAS-2B, сравнивали с помощью анализа RT-qPCR. (D) Уровни экспрессии let-7c-5p и miR-181b-5p в клетках BEAS-2B, обработанных экзосомами, полученными из клеток A549, в течение 48 часов с помощью RT-qPCR. ns не имеет значения; значимая разница между экспериментальной и контрольной группами указана * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001 и N ≥ 3.

Дифференциально экспрессируемые из miRNAs между A549 и полученными в BEA-2B-клетками Exosomes

66666666666666. извлеченные из экзосом, полученных из клеток A549 и BEAS-2B, использовали для подготовки и секвенирования библиотеки микроРНК. Подготовку библиотеки и секвенирование проводили в RiboBio (Гуанчжоу, Китай), как описано ранее. Библиотека профиля микроРНК была создана в соответствии с предыдущей работой нашей группы (16). Согласно библиотеке экспрессии микроРНК, мы определили, что 602 микроРНК были подавлены в экзосомах, полученных из A549.клеток по сравнению с клетками BEAS-2B, из которых 223 случая имели статистические различия (* p < 0,05). Чтобы проверить результаты секвенирования микроРНК, мы проверяем экспрессию ряда идентифицированных микроРНК с помощью количественного анализа ПЦР в реальном времени. Относительные уровни экспрессии let-7c-5p, miR-17-3p, miR-92b-3p, miR-92b-5p, miR-155-5p, miR-181b-5p, miR-200b-3p и miR- 224-5p были выбраны для дальнейшей проверки (рис. 3C). Примечательно, что уровни экспрессии семи генов соответствовали результатам секвенирования (таблица 2). Кроме того, let-7c-5p показал заметное кратное изменение в 7,2 между экзосомами, полученными из A549.клетки и клетки BEAS-2B.

Таблица 2 Дифференциальная экспрессия микроРНК между экзосомами клеток A549 и BEAS-2B.

Различия в экспрессии экзосомальной миРНК в сыворотке пациентов с НМРЛ

Все пациенты предоставили письменное информированное согласие до того, как они были включены в исследование, и это исследование соответствовало этическим принципам и было одобрено Этическим комитетом больницы. Образцы были собраны у 21 здорового человека и 37 пациентов с НМРЛ во Второй народной больнице Датонга. Уровни экспрессии экзосомальной миРНК miR-17-3p в сыворотке больных НМРЛ были заметно выше, чем у здоровых добровольцев, в то время как уровни экспрессии let-7c-5p и miR-181b-5p были противоположными (рис. 4). Объединяя эти результаты клинических образцов с результатами in vitro , уровни экспрессии let-7c-5p и miR-181b-5p продемонстрировали потенциальную связь с НМРЛ, и они были выбраны для дальнейшего исследования.

Рисунок 4 Экспрессия экзосомальной микроРНК у 21 здорового человека и 37 пациентов с НМРЛ. RT-qPCR использовали для сравнения уровня экспрессии экзосомальной микроРНК let-7c-5p, miR-17-3p, miR-92b-3p, miR-92b-5p, miR-155-5p, miR-181b-5p, miR -200b-3p и миР-224-5p из сыворотки здоровых людей (n = 21) и пациентов с НМРЛ (n = 37). Для анализа различий между группами был принят непараметрический тест; нс, не имеет значения; * p < 0,05, ** p < 0,01 и n ≥ 3. снижается в экзосомах, происходящих из клеток A549, нам было любопытно, могут ли экзосомы, происходящие из клеток A549, уменьшать экспрессию этих двух микроРНК в клетках BEAS-2B. Чтобы наблюдать за активностью экзосом, происходящих из клеток A549, клетки BEAS-2B совместно инкубировали с экзосомами в дозах 0, 15, 30 и 60 мкг/мл в течение 48 ч, а затем проводили анализ RT-qPCR для мониторинга уровень экспрессии let-7c-5p и miR-181b-5p. Результаты показали, что экспрессия let-7c-5p и miR-181b-5p была значительно снижена в клетках BEAS-2B после обработки, и этот эффект снижался дозозависимым образом (фиг. 3D).

Комбинированный эффект Let-7c-5p и miR-181b-5p на миграцию и инвазию клеток BEAS-2B с инвазией и миграцией рака (26–28). Чтобы проверить, является ли отсутствие let-7c-5p и miR-181b-5p критическим для стимулирования миграции и инвазии клеток BEAS-2B, использовали ингибиторы miRNA для уменьшения экспрессии let-7c-5p и miR-181b-5p. в ячейках BEAS-2B. Миграция клеток BEAS-2B показала небольшое улучшение после трансфекции ингибиторами let-7c-5p и miR-181b-5p соответственно, и такое улучшение было усилено комбинацией двух ингибиторов (фиг. 5A, B). Инвазивную способность клеток BEAS-2B оценивали с помощью трансвеллового эксперимента, и оказалось, что клетки BEAS-2B были более инвазивными при снижении как let-7c-5p, так и miR-181b-5p (рис. 5C, D).

Рисунок 5. Ингибиторы let-7c-5p и miR-181b-5p индуцировали миграцию и инвазию клеток BEAS-2B. (A) Анализ заживления раны использовали для выявления миграции клеток BEAS-2B, на которую влияли ингибиторы let-7c-5p и miR-181b-5p, в течение 0, 12, 24 и 48 часов. Статистический анализ подвижности (B) и коэффициента инвазии (C) клеток BEAS-2B, обработанных ингибиторами let-7c-5p и miR-181b-5p. ns не имеет значения; * р < 0,05, ** p < 0,01 и *** p < 0,001 и n ≥ 3. ингибиторы -181b-5p.

Сверхэкспрессия let-7c-5p и miR-181b-5p ослабляет эффект экзосом, полученных из клеток A549, на клетки BEAS-2B 5p оказывает решающее влияние на миграцию и инвазию клеток. Экзосомы, полученные из A549клетки могут индуцировать миграцию, инвазию и EMT клеток BEAS-2B, и они также обладают плохой экспрессией miRNA let-7c-5p и miR-181b-5p. Чтобы получить больше доказательств того, что let-7c-5p и miR-181b-5p являются ключевыми факторами, вызывающими инвазию клеток BEAS-2B, а не другими путями, мы построили сверхэкспрессию let-7c-5p и miR-181b-5p.

модель в клетках для наблюдения за его активностью миграции и инвазии. Экзосомы экстрагировали после того, как миметики let-7c-5p и miR-181b-5p трансфицировали в клетки A549 соответственно или в комбинации, а затем эти экзосомы добавляли в клетки BEAS-2B и совместно инкубировали в течение 12 или 24 часов. Подвижность клеток BEAS-2B была ослаблена после инкубации с экзосомами со сверхэкспрессией let-7c-5p или miR-181b-5p по сравнению с обычным A549.-экзосомы клеточного происхождения в тесте на заживление ран. Сверхэкспрессированные let-7c-5p и miR-181b-5p демонстрировали более сильное ослабление подвижности клеток BEAS-2B в зависимости от времени (рис. 6A, B). Как показано в трансвелл-анализе, оценивалась инвазия клеток BEAS-2B, и результаты соответствовали анализу заживления ран (рис. 6C, D). Следовательно, восстанавливающий эффект гиперэкспрессии let-7c-5p и miR-181b-5p в комбинации превосходит эффект, когда они функционируют по отдельности в клетках A549.

Рисунок 6 Влияние экзосом, полученных при различных обработках клеток A549, на миграцию и инвазию клеток BEAS-2B. A час Статистический анализ подвижности (B) и степени инвазии (C) клеток BEAS-2B, обработанных высокоэкспрессионными экзосомами let-7c-5p или miR-181b-5p, нс, не имеет значения, * p < 0,05, ** p < 0,01 и *** p < 0,001 и n ≥ 3. экзосомами из клеток let-7c-5p или miR-181b-5p, имитирующих предварительно обработанные клетки A549. нс, не имеет значения.

Целевая мРНК Прогнозирование let-7c-5p и miR-181b-5p

Целевые гены let-7c-5p и miR-181b-5p были предсказаны базами данных TargetsScan, PicTar и miRDB соответственно. Общее количество генов-мишеней let-7c-5p составило 9.90 из miRDB, 602 из PicTar и 1191 из TargetsScan; после удаления повторяющихся значений было набрано в общей сложности 1594 предсказанных гена-мишени. Общее количество 2123 генов-мишеней miR-181b-5p было получено из идентичных баз данных после удаления повторяющихся значений; конкретные прогнозируемые целевые числа составляли 1408, 428 и 1367 для miRDB, PicTar и TargetsScan. Чтобы изучить взаимосвязь гена-мишени между микроРНК объекта и НМРЛ, базы данных OMIM, DisGeNet, TTD и GeneCards использовались для получения целей, связанных с НМРЛ или раком легких. Всего 190, 31, 158 и 941 цель были собраны из вышеуказанных баз данных соответственно. Затем результаты интегрировались, после чего дублирующиеся данные удалялись. Извлеченные относительные мишени NSCLC, всего 1016, сравнивали с предсказанными мишенями микроРНК let-7c-5p и miR-181b-5p по отдельности; затем были собраны 74 и 101 общая мишень соответственно (рис. 7A). Эти общие мишени стали важными объектами исследования, которые представляют потенциальное значение механизма регуляции микроРНК при НМРЛ.

Рисунок 7 Прогноз целевого гена let-7c-5p и miR-181b-5p. (A) Общие мишени поиска относительных мишеней НМРЛ по сравнению с предсказанными мишенями микроРНК let-7c-5p и miR-181b-5p соответственно. Сеть PPI с общими мишенями (B) let-7c-5p и (C) miR-181b-5p с НМРЛ.

Исследование механизма регуляции let-7c-5p и miR-181b-5p при НМРЛ с помощью биоинформатического анализа

Сначала база данных STRING использовалась для создания сети, состоящей из общих мишеней. Чтобы понять, как функционируют множественные мишени при НМРЛ, сети PPI становятся незаменимым методом исследования. Сеть PPI, которая была сконструирована с общими мишенями let-7c-5p (миР-181b-5p) и НМРЛ, показана на рисунках 7B, C. Гены-мишени со степенью узла выше 20 считались критическими мишенями, на которые влияли с помощью микроРНК. Другими словами, чтобы выяснить механизм регуляции let-7c-5p и miR-181b-5p при НМРЛ, общими мишенями были анализ с помощью KEGG и обогащение GO с использованием DAVID. Результаты обогащения были визуализированы с помощью программного обеспечения R в виде пузырьковой диаграммы (рис. 8). Обогащение KEGG дало 82 результата для let-7c-5p и 80 для miR-181b-5p. Среди 217 терминов из GO-анализа let-7c-5p 164 термина оказались вовлеченными в биологические процессы (БП), 20 в клеточный компонент (КК) и 33 в молекулярные функции, а среди 300 терминов для miR- 181b-5p количество терминов 221, 31 и 48 соответственно. Результаты анализа пути KEGG показали, что let-7c-5p и miR-181b-5p обладают коэффициентом в сигнальном пути MAPK, сигнальном пути RAS, сигнальном пути FoxO, сигнальном пути PI3K-Akt и очаговой адгезии. Критические узлы let-7c-5p были в основном вовлечены в сигнальный путь MAPK, сигнальный путь p53, неправильную регуляцию транскрипции при раке и фокальную адгезию. Кроме того, сигнальный путь MAPK, фокальная адгезия и сигнальный путь Ras были связаны с критическим узлом miR-181b-5p. Как показали результаты, фокальная адгезия и сигнальный путь MAPK были необходимы для синергии let-7c-5p и miR-181b-5p при ограничении EMT. Суммируя результаты обогащения GO, количество генов и p- были критическими параметрами для фильтрации термина BP, CC и молекулярной функции (MF). Большее количество критических генов использовали в качестве условий фильтрации для скрининга общих BP, CC и MF let-7c-5p и miR-181b-5p, вовлеченных в НМРЛ. Синергическая функция АД была ответом на глюкокортикоид; синергетическая функция CC включала клеточную поверхность, внешнюю часть плазматической мембраны, внеклеточное пространство, мембрану и мембранный рафт; а синергетическая функция MF включала активность цитокинов, активность рецепторного сигнального белка серин/треонинкиназы и активность протеинкиназы.

Рисунок 8 Общие мишени, проанализированные с помощью обогащения KEGG и GO. Результаты анализа обогащения KEGG и GO (включая BP, CC, MF) для гена-мишени let-7c-5p и miR-181b-5p соответственно ( p ≤ 0,05).

Обсуждение

Широко известно, что экзосомы оказывают ключевое влияние на межклеточную коммуникацию, особенно на развитие опухоли, включая туморогенез, ангиогенез, метастазирование опухоли, инвазию и лекарственную устойчивость (29, 30). Обогащенные микроокружением или кровообращением опухоли, экзосомы, происходящие из опухолевых клеток, легко интернализуются соседними клетками или дистальными клетками, а затем функционируют в качестве промотора, запуская инициацию опухоли и метастазирование (31, 32). Таким образом, влияние A549В нашем исследовании исследовали экзосомы, полученные из раковых клеток, на нормальных клетках BEAS-2B. После идентификации с помощью серьезного анализа экзосомы, полученные из клеток A549, добавляли к клеткам BEAS-2B для оценки способности к миграции и инвазии. Результаты показали, что экзосомы, полученные из клеток A549, могут способствовать миграции и инвазии клеток BEAS-2B, даже ЕМТ (рис. 2, 3). Затем мы провели тщательное исследование ключевых биоактивных молекул в экзосомах.

Экзосомы относятся к биологическим везикулам, которые содержат различные биологически активные молекулы, такие как белки, нуклеиновые кислоты и липиды, которые могут быть доставлены в клетки-реципиенты для придания специфичности (33, 34). Характеристики везикул были проверены с помощью TEM, NTA и вестерн-блоттинга. Все ЭВ несут белки, связанные с биологической мембраной. Чтобы продемонстрировать наличие липидного двойного слоя в анализируемом материале, должен быть обнаружен по крайней мере один трансмембранный или GPI-заякоренный внеклеточный белок (35). Всего во время нашей идентификации было обнаружено три положительных белковых маркера (включая по крайней мере один трансмембранный/связанный с липидом белок-цитозольный белок) и один отрицательный белковый маркер ЭВ (рис. 1C). Характеристика одиночных везикул была проведена с помощью двух разных, но дополняющих друг друга методов: электронной микроскопии и анализаторов отдельных частиц (рис. 1A, B).

микроРНК играют решающую роль в различных биологических процессах, включая регуляцию клеточного развития, дифференцировки, пролиферации и апоптоза. Функциональные исследования подтвердили, что различные молекулы miRNAs находятся в контакте с генезисом и развитием опухолей, и miRNAs имеют функции, сходные с онкогенами или генами-супрессорами опухолей (36, 37). В соответствии с нашей предыдущей работой (16) была создана библиотека профилей микроРНК экзосом, полученных из клеток A549 и клеток BEAS-2B. Для дальнейшей проверки из дифференциальной экспрессии микроРНК были выбраны восемь экзосомальных микроРНК, две из которых (let-7c-5p, miR-181b-5p) показали значительное различие не только между раковыми клетками и нормальными клетками, но также между больными НМРЛ и здоровым человеком.

let-7 является одной из первых микроРНК, обнаруженных у Caenorhabditis elegans , и ее биологические функции в высокой степени консервативны от C. elegans до человека (38). Как основной регулятор дифференцировки, плюрипотентности и апоптоза, семейство let-7 обладает множеством физиологических функций, включая рост, развитие и клеточную адгезию, и особенно служит супрессором опухолей (39). Во время онкогенеза и опухолевого прогресса let-7 обладает неограниченными возможностями в качестве биоактивной молекулы для диагностики, терапии и прогноза (40). let-7c, miR-145 и miR-221 показали сниженную экспрессию у пациентов с раком предстательной железы низкого риска, и, следовательно, эти miRNAs потенциально могут использоваться в качестве диагностических биомаркеров (41). Джилек и др. показали, что биологический let-7c в составе липосомального полиплекса (LPP) может служить безопасной и мощной терапевтической стратегией для гепатоцеллюлярной карциномы (42). Экспрессия кластера микроРНК let-7c может быть обнаружена с помощью RT-qPCR в качестве ответственного неинвазивного клинического инструмента для улучшения оценки прогноза неинвазивного рака мочевого пузыря высокой степени в мочевыводящих путях (43). Кроме того, let-7c-5p по-прежнему имеет большое значение для онкогенеза и миграции злокачественных опухолей (44, 45).

Являясь членами высококонсервативного семейства miRNA у разных видов, miR-181b играет видную роль в различных биологических процессах, даже в различных заболеваниях. В частности, он хорошо известен как супрессор рака, который нарушает регуляцию многих видов рака (46). МиР-181b становится потенциальным кандидатом для диагностики и лечения из-за нарушения регуляции при различных видах рака, включая рак легких, глиомы, рак желудка и колоректальный рак (47–50). Помимо аттенюирующего эффекта при раке легкого, miR-181b, как было установлено, обладает сродством к химиорезистентности (51, 52). Недавние исследования показали, что экзосомальная миР-181b-5p, полученная из опухолевых клеток, улучшает онкогенез и метастазирование плоскоклеточной карциномы пищевода, индуцируя ангиогенез, показывая, что экзосомальная миРНК, плавающая в микроокружении опухоли, служит промотором опухолевой прогрессии (53).

Многочисленные текущие исследования доказали, что экзосомы, секретируемые клетками-донорами, могут передавать биоактивное вещество соседним клеткам, чтобы влиять на их характеристики и перепрограммировать фенотипы клеток-реципиентов с потенциальной модуляцией канцерогенных последствий (54, 55). Было доказано, что экзосомы, полученные из HQ-трансформированных злокачественных клеток, способны передавать miR-221 в нормальные клетки-реципиенты для повышения жизнеспособности клеток (56). Было доказано, что экзосомы, выделенные у пациентов с сепсисом, вызывают повреждение эпителиальных клеток легких через миР-129.8-5p и его мишенью SOCS6 через , регулирующий сигнальный путь STAT3 (57).

Для дальнейшего изучения возможности доставки аберрантно экспрессируемой миРНК из донорских клеток в клетки-реципиенты ослабленная экспрессия let-7c-5p и miR-181b-5p была обнаружена с помощью RT-qPCR после совместной инкубации с экзосомами, полученными из клеток A549. на 12 ч. Кроме того, комбинация ингибиторов let-7c-5p и miR-181b-5p значительно индуцировала миграцию или инвазию клеток BEAS-2B в большей степени, чем каждый из них по отдельности, что указывает на то, что let-7c-5p и miR-181b-5p могут иметь общая мРНК-мишень, связанная с подвижностью и инвазивностью (рис. 5, 6). Недавние исследования показали, что let-7c действует как супрессор опухоли, который ингибирует миграцию и инвазию опухоли при НМРЛ, гепатоцеллюлярной карциноме и глиоме (58–60). Лю и др. сообщили, что повышенная экспрессия miR-181a/b индуцирует активность пролиферации, инвазию опухоли и метастазирование клеток нейробластомы путем нацеливания на ABI1 (46). Чтобы проверить жизненно важную роль экзосомальных let-7c-5p и miR-181b-5p, экзосомы из A549клетки, предварительно обработанные миметиками let-7c-5p и miR-181b-5p, добавляли к клеткам BEAS-2B соответственно или в комбинации; следовательно, влияние клеточной миграции и инвазии значительно уменьшилось.

Анализы биоинформатики были адаптированы для углубленного изучения синергетического эффекта let-7c-5p и miR-181b-5p. Критический узел со степенью выше 20 был рассчитан и получен после того, как общие цели были сконструированы и проанализированы с помощью STRING и Cytoscape. Результаты анализа путей KEGG показали, что фокальная адгезия и сигнальный путь MAPK необходимы для синергизма let-7c-5p и miR-181b-5p при ограничении ЕМТ (рис. 7, 8). Адгезия клеток к ВКМ зависит от интегрин-опосредованного связывания с внеклеточными молекулами ВКМ и внутриклеточным цитоскелетом, а внутриклеточный домен связан с цитоскелетом через внутриклеточные фокальные адгезии, как показано (61). Фокальные адгезии не только обеспечивают физическое прикрепление клеток к внеклеточному матриксу посредством рецептора интегрина, но также инициируют сигнальные каскады, которые регулируют пролиферацию, миграцию и выживание клеток (62). Как ключевой сигнальный путь клеточной адгезии и миграции, фокальная адгезия имеет большое значение для инвазии и миграции опухоли (63-65). Многочисленные исследования выявили взаимосвязь между сигнальным путем MAPK и EMT, например, Musashi2 способствует EMT при раке поджелудочной железы через ZEB1-ERK/MAPK, интегрин/EGFR-ERK/MAPK и сигнальный путь ERK/MAPK (66–68). Сигнальный путь MAPK также был связан с пролиферацией опухоли и метастазированием при раке шейки матки (69).). Обогащение показало, что MAPK8 одновременно является мишенью для let-7c-5p и miR-181b-5p, а также принимает участие как в фокальной адгезии, так и в сигнальном пути MAPK, что означает, что MAPK8 может быть важным целевым геном синергетического эффекта в EMT. ингибирование (рис. 7, 8).

Заключение

Таким образом, мы продемонстрировали, что клетки BEAS-2B приобретают характеристики злокачественности путем эндоцитоза экзосом, полученных из клеток A549, включая миграцию, инвазию и ЕМТ. Было показано, что ключевыми биомолекулами этого прогресса являются экзосомальные let-7c-5p и miR-181b-5p. Аттенуация let-7c-5p и miR-181b-5p облегчала подвижность клеток BEAS-2B и способствовала развитию клеток в злокачественные опухоли. Анализ биоинформатики показал, что фокальная адгезия и сигнальный путь MAPK необходимы для ингибирования EMT с помощью let-7c-5p и miR-181b-5p. Таким образом, let-7c-5p и miR-181b-5p обладают массовым потенциалом для ранней диагностики рака легкого.

Заявление о доступности данных

Первоначальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью/дополнительный материал. Дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Второй народной больницей Датуна. Пациенты/участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании. Письменное информированное согласие было получено от лица (лиц) на публикацию любых потенциально идентифицируемых изображений или данных, включенных в эту статью.

Вклад авторов

J-YZ, Y-QW и J-JF задумали исследование и отредактировали эту рукопись. YL, C-YS и Y-YY провели эксперименты и написали рукопись. JW и J-JL проанализировали данные. Все авторы одобрили рукопись.

Финансирование

Эта работа была поддержана Национальной ключевой программой исследований и разработок Китая (2021YFE0202000), Национальным фондом естественных наук Китая (81

7 и 81^{2), Фондом Департамента образования провинции Гуандун (2021ZDZX2006 и 2020KTSCX102) и Научно-технологическими инновациями. Программы высших учебных заведений Шаньси (2020L0483).}

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все утверждения, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Ссылки

1. Брей Ф., Ферлей Дж., Соержоматарам И., Сигел Р.Л., Торре Л.А., Джемал А. Глобальная статистика рака 2018: GLOBOCAN оценки заболеваемости и смертности во всем мире для 36 видов рака в 185 странах. КА. Рак J Clin (2018) 68 (6): 394–424. doi: 10.3322/caac.21492

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

2. Pan J, Fang S, Tian H, Zhou C, Zhao X, Tian H, et al. lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1 Axis регулирует онкогенез и метастазирование рака легкого путем активации передачи сигналов Wnt/β-катенина. Мол Рак (2020) 19(1):9. doi: 10. 1186/s12943-020-1133-9

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

3. Zheng F, Li J, Ma C, Tang X, Tang Q, Wu J и др. Новая регуляция miR-34a-5p и HOTAIR комбинацией берберина и гефитиниба, приводящая к ингибированию ЕМТ при раке легких человека. J Cell Mol Med (2020) 24(10):5578–92. doi: 10.1111/jcmm.15214

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

4. Baj J, Brzozowska K, Forma A, Maani A, Sitarz E, Portincasa P. Иммунологические аспекты микроокружения опухоли и эпителиально-мезенхимального перехода при канцерогенезе желудка. Int J Mol Sci (2020) 21(7):2544. doi: 10.3390/ijms21072544

CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Рахман М.А., Баргер Дж.Ф., Ловат Ф., Гао М., Оттерсон Г.А., Нана-Синкам П. Экзосомы рака легких как движущие силы эпителиально-мезенхимального перехода. Oncotarget (2016) 7(34):54852–66. doi: 10.18632/oncotarget.10243

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

6. He S, Li Z, Yu Y, Zeng Q, Cheng Y, Ji W и другие. Экзосомальная миР-499a-5p способствует клеточной пролиферации, миграции и ЭМП через сигнальный путь mTOR при аденокарциноме легкого. Exp Cell Res (2019) 379(2):203–13. doi: 10.1016/j.yexcr.2019.03.035

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

7. Сандуа А., Алегре Э., Гонсалес А. Экзосомы при раке легких: действующие лица и предвестники развития опухоли. Раки (Базель) (2021) 13(17):4330. doi: 10.3390/cancers13174330

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

8. Zhang Y, Liu Y, Liu H, Tang WH. Экзосомы: биогенез, биологическая функция и клинический потенциал. Cell Biosci (2019) 9:19. doi: 10.1186/s13578-019-0282-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

9. Сингх А., Феделе С., Лу Х., Невалайнен М., Кин Дж., Лангуино Л. Опосредованный экзосомами перенос интегрина αvβ3 из опухолегенных клеток в неканцерогенные способствует мигрирующему фенотипу. Mol Cancer Res MCR (2016) 14(11):1136–46. doi: 10.1158/1541-7786.mcr-16-0058

CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Wang Z, Sun H, Provaznik J, Hackert T, Zöller M. Передача сообщения экзосомной клетки, инициирующей рак поджелудочной железы, в клетки, не инициирующие рак: важность CD44v6 в перепрограммировании. J Exp Clin Cancer Res (2019) 38(1):132. doi: 10.1186/s13046-019-1129-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

11. Zeng Z, Li Y, Pan Y, Lan X, Song F, Sun J и др. Раковая экзосомальная миР-25-3p способствует формированию преметастатической ниши, индуцируя сосудистую проницаемость и ангиогенез. Nat Commun (2018) 9(1):5395. doi: 10.1038/s41467-018-07810-w

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

12. Dai C, Zhang Y, Xu Z, Jin M. МикроРНК-122-5p ингибирует пролиферацию, миграцию и инвазию клеток путем нацеливания на CCNG1 при аденокарциноме протоков поджелудочной железы. Cancer Cell Int (2020) 20:98. doi: 10.1186/s12935-020-01185-z

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

13. Наталвала А., Спичал Р., Целепис С. Опухолегенез, опосредованный эпителиально-мезенхимальным переходом в желудочно-кишечном тракте. World J Gastroenterol (2008) 14(24):3792. doi: 10.3748/wjg.14.3792

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

14. Линь М., Би Х., Ян И., Хуан В., Чжан Г., Чжан Г. и др. Партенолид подавляет рост клеток немелкоклеточного рака легкого GLC-82 через B-Raf/MAPK/Erk Pathway. Oncotarget (2017) 8(14):23436–47. doi: 10.18632/oncotarget.15584

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

15. Lobb RJ, Becker M, Wen SW, Wong CS, Wiegmans AP, Leimgruber A, et al. Оптимизированный протокол выделения экзосом для супернатанта клеточной культуры и плазмы человека. Дж Экстраселл. Везикулы (2015) 4:27031. doi: 10.3402/jev.v4.27031

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

16. Huang W, Yan Y, Liu Y, Lin M, Ma J, Zhang W, et al. Экзосомы с низкой экспрессией миР-34c-3p способствуют инвазии и миграции немелкоклеточного рака легкого путем усиления регуляции интегрина Alpha2beta1. Signal Transduct Target Ther (2020) 5(1):39. doi: 10.1038/s41392-020-0133-y

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

17. Thery C, Amigorena S, Raposo G, Clayton A. Выделение и характеристика экзосом из супернатантов клеточных культур и биологических жидкостей. Curr Protoc Cell Biol Chapter 3 Unit (2006) 3:22. doi: 10.1002/0471143030.cb0322s30

CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Felicetti F, De Feo A, Coscia C, Puglisi R, Pedini F, Pasquini L, et al. Опосредованный экзосомами перенос миР-222 достаточен для повышения злокачественности опухоли при меланоме. J Transl Med (2016) 14:56. doi: 10.1186/s12967-016-0811-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

19. Zhang JY, Lin MT, Tung HY, Tang SL, Yi T, Zhang YZ, et al. Брюсин D индуцирует апоптоз в клетках хронического миелоидного лейкоза человека K562 через митохондриальный путь . Am J Cancer Res (2016) 6(4):819–26.

Реферат PubMed | Google Scholar

20. Ying X, Wu Q, Wu X, Zhu Q, Wang X, Jiang L и др. Экзосомальная миР-222-3p, секретируемая эпителиальным раком яичников, индуцирует поляризацию ассоциированных с опухолью макрофагов. Oncotarget (2016) 7(28):43076–87. doi: 10.18632/oncotarget.9246

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

21. Whiteside TL. Экзосомы опухолевого происхождения и их роль в развитии рака. Adv Clin Chem (2016) 74:103–41. doi: 10.1016/bs.acc.2015.12.005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

22. Чжан Л., Ю. Д. Экзосомы в развитии рака, метастазировании и иммунитете. Biochim Biophys Acta Rev Cancer (2019) 1871(2):455–68. doi: 10.1016/j.bbcan.2019.04.004

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

23. Петрова Ю.И., Шектерсон Л., Гумбинер Б.М. Роль регуляции клеточной поверхности E-кадгерина при раке. Mol Biol Cell (2016) 27(21):3233–44. doi: 10.1091/mbc.E16-01-0058

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

24. Cao ZQ, Wang Z, Leng P. Аберрантная экспрессия N-кадгерина при раке. Биомед Фармаколог. (2019) 118:109320. doi: 10.1016/j.biopha.2019.109320

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

25. Сателли А., Ли С. Виментин при раке и его потенциал в качестве молекулярной мишени для терапии рака. Cell Mol Life Sci (2011) 68(18):3033–46. doi: 10.1007/s00018-011-0735-1

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

26. Li X, Han J, Zhu H, Peng L, Chen Z. Mir181b5p опосредует индуцированный TGFbeta1 эпителиально-мезенхимальный переход в стволовых клетках немелкоклеточного рака легкого, полученных из клеток аденокарциномы легкого A549. Int J Oncol (2017) 51(1):158–68. doi: 10.3892/ijo.2017.4007

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

27. Zhang J, Zhang Y, Shen W, Fu R, Ding Z, Zhen Y, et al. Цитологические эффекты лечения хонокиолом и его потенциальный механизм действия при немелкоклеточном раке легкого. Биомед Фармаколог. (2019) 117:109058. doi: 10.1016/j.biopha.2019.109058

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

28. Патель К., Чандрасегаран С., Кларк И.М., Проктор С.Дж., Янг Д.А., Шэнли Д.П. TimiRGeN: пакет R/Bioconductor для интеграции и анализа микроРНК-мРНК временных рядов. Биоинформатика (2021) 37(20):3604–3609. doi: 10.1093/bioinformatics/btab377

Полный текст CrossRef | Google Scholar

29. Машури Л. , Юсефи Х., Ареф А.Р., Ахади А.М., Молаи Ф., Алахари С.К. Экзосомы: состав, биогенез и механизмы метастазирования рака и лекарственной устойчивости. Мол Рак (2019) 18(1):75. doi: 10.1186/s12943-019-0991-5

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

30. Su C, Zhang J, Yarden Y, Fu L. Ключевые роли внеклеточных везикул, полученных из раковых стволовых клеток. Signal Transduct Target Ther (2021) 6(1):109. doi: 10.1038/s41392-021-00499-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

31. Милан Л., Сингх А., Маттеолабакис Г., Суреш М., Амиджи М.М. Коммуникация, опосредованная экзосомами, в микроокружении опухоли. J Контролируемый выпуск (2015) 219:278–94. doi: 10.1016/j.jconrel.2015.06.029

CrossRef Полный текст | Google Scholar

32. Wortzel I, Dror S, Kenific CM, Lyden D. Метастаз, опосредованный экзосомами: общение на расстоянии. Dev Cell (2019) 49(3):347–60. doi: 10.1016/j.devcel.2019.04.011

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

33. McKelvey KJ, Powell KL, Ashton AW, Morris JM, McCracken SA. Экзосомы: механизмы поглощения. J Circ biomark (2015) 4:7. doi: 10.5772/61186

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

34. Wee I, Syn N, Sethi G, Goh BC, Wang L. Роль опухолевых экзосом в метастазировании рака. BBA-Rev. Рак (2019) 1871 (1): 12–9. doi: 10.1016/j.bbcan.2018.10.004

CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Thery C, Witwer KW, Aikawa E, Alcaraz MJ, Anderson JD, Andriantsitohaina R, et al. Минимальная информация для исследований внеклеточных везикул 2018 (MISEV2018): Заявление о позиции Международного общества внеклеточных везикул и обновление рекомендаций MISEV2014. J внеклеточные везикулы (2018) 7(1):1535750. doi: 10.1080/20013078.2018.1535750

CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Liu Y, Luo F, Wang B, Li H, Xu Y, Liu X и др. STAT3-регулируемая экзосомальная миР-21 способствует ангиогенезу и участвует в опухолевых процессах трансформированных бронхиальных эпителиальных клеток человека. Cancer Lett (2016) 370(1):125–35. doi: 10.1016/j.canlet.2015.10.011

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

37. Шах М.Ю., Ферраджоли А., Суд А.К., Лопес-Берестейн Г., Калин Г.А. Терапия микроРНК при раке — новая концепция. EBioMedicine (2016) 12:34–42. doi: 10.1016/j.ebiom.2016.09.017

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

38. Lee H, Han S, Kwon CS, Lee D. Биогенез и регуляция микроРНК Let-7 и их функциональное значение. Protein Cell (2016) 7(2):100–13. doi: 10.1007/s13238-015-0212-y

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

39. де Алмейда до н.э., Дос Аньос Л.Г., Уно М., Кунья ИВД, Соарес Ф.А., Байокки Г. и др. Профиль экспрессии Let-7 Mirna и его потенциальная прогностическая роль при лейомиосаркоме матки. Cells (2019) 8(11):1452. doi: 10.3390/cells8111452

CrossRef Полный текст | Google Scholar

40. Бош Ф., Бажин А.В., Хойблейн С., Брювер К., Кнозель Т., Рейтер Ф.П. Лечение аналогами соматостатина индуцирует дифференцированную экспрессию Let-7c-5p и Mir-3137 в нейроэндокринных опухолях тонкой кишки. BMC Рак (2019) 19(1):575. doi: 10.1186/s12885-019-5794-y

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

41. Курул Н.О., Атес Ф., Йылмаз И., Нарли Г., Есильдал С., Сенкул Т. Ассоциация Let-7c, миР-21, миР-145, миР-182 и миР-221 с клинико-патологическими параметрами рака предстательной железы у пациентов с диагностированным заболеванием низкого риска. Простата (2019) 79(10):1125–32. doi: 10.1002/pros.23825

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

42. Jilek JL, Zhang Q-Y, Tu M-J, Ho PY, Duan Z, Qiu J-X, et al. Биоинженерный Let-7c ингибирует ортотопическую гепатоцеллюлярную карциному и улучшает общую выживаемость с минимальной иммуногенностью. Mol Ther Nucleic Acids (2019) 14:498–508. doi: 10.1016/j.omtn.2019.01.007

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

43. Spagnuolo M, Costantini M, Ferriero M, Varmi M, Sperduti I, Regazzo G, et al. Мочевая экспрессия кластера Let-7c как неинвазивного инструмента для оценки риска прогрессирования заболевания у пациентов с неинвазивным раком мочевого пузыря высокой степени злокачественности: пилотное исследование. J Exp Clin Cancer Res (2020) 39(1):68. doi: 10.1186/s13046-020-01550-w

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

44. Xie Y, Zhang H, Guo XJ, Feng YC, He RZ, Li X и др. Let-7c ингибирует рост холангиокарциномы, но способствует инвазии и росту опухолевых клеток во внепеченочных участках. Cell Death Dis (2018) 9(2):249. doi: 10.1038/s41419-018-0286-6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

45. Tang H, Ma M, Dai J, Cui C, Si L, Sheng X и др. miR-Let-7b и miR-Let-7c подавляют онкогенез меланомы слизистых оболочек человека и повышают чувствительность к химиотерапии. J Exp Clin Cancer Res (2019) 38(1):212. doi: 10.1186/s13046-019-1190-3

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

46. Liu X, Peng H, Liao W, Luo A, Cai M, He J и другие. МиР-181a/B индуцирует рост, инвазию и метастазирование клеток нейробластомы посредством нацеливания на ABI1. Мол Карциног. (2018) 57(9):1237–50. doi: 10.1002/mc.22839

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

47. Shi ZM, Wang XF, Qian X, Tao T, Wang L, Chen QD, et al. МиРНК-181b подавляет IGF-1R и функционирует как ген-супрессор опухоли при глиомах. РНК (2013) 19(4):552–60. doi: 10.1261/rna.035972.112

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

48. Zhou Q, Zheng X, Chen L, Xu B, Yang X, Jiang J и др. Путь Smad2/3/4 способствует экспрессии миРНК-181b, индуцированной TGF-β, для стимулирования метастазирования рака желудка путем нацеливания на Timp3. Cell Physiol Biochem (2016) 39(2):453–66. doi: 10.1159/000445638

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

49. Moridikia A, Mirzaei H, Sahebkar A, Salimian J. МикроРНК: потенциальные кандидаты для диагностики и лечения колоректального рака. J Cell Physiol (2018) 233(2):901–13. doi: 10.1002/jcp.25801

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

50. Braicu C, Gulei D, Cojocneanu R, Raduly L, Jurj A, Knutsen E, et al. Терапия микроРНК-181a/B при раке легкого: реальность или миф. Мол Онкол (2019) 13(1):9–25. doi: 10.1002/1878-0261.12420

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

51. Лю Х.Н., Ци П., Ян Г., Сун Ю.Б. миР-181b ингибирует химиорезистентность в резистентных к цисплатину клетках мелкоклеточного рака легкого h546 путем нацеливания на Bcl-2. Arch Med Sci (2018) 14(4):745–51. doi: 10.5114/aoms.2018.73131

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

52. Wang X, Meng Q, Qiao W, Ma R, Ju W, Hu J и др. МиР-181b/Notch3 преодолевает химиорезистентность, регулируя свойства раковых стволовых клеток при НМРЛ. Stem Cell Res Ther (2018) 9(1):327. doi: 10.1186/s13287-018-1072-1

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

53. Wang Y, Lu J, Chen L, Bian H, Hu J, Li D, et al. МиР-181b-5p, инкапсулированная внеклеточными везикулами опухоли, индуцирует ангиогенез, способствуя онкогенезу и метастазированию плоскоклеточной карциномы пищевода. Mol Ther Nucleic Acids (2020) 20:421–37. doi: 10.1016/j.omtn.2020.03.002

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

54. Кадота Т., Фудзита Ю., Арая Дж., Ватанабэ Н., Фуджимото С., Кавамото Х. и др. Терапия внеклеточных везикул, полученных из бронхиальных эпителиальных клеток, для лечения легочного фиброза посредством ингибирования перекрестных помех TGF-β-WNT. Дж Экстраселл. Везикулы (2021) 10(10):e12124. doi: 10.1002/jev2.12124

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

55. Xian HY, Chen Y, Zhang JY, Tang ML, Lian ZW, Jiang R, et al. Экзосомы, полученные из гидрохинон-трансформированных эпителиальных клеток человека, ингибируют апоптоз клеток-реципиентов путем переноса миР-221. Biomed Environ Sci (2021) 34(7):520–7. doi: 10.3967/bes2021.072

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

56. Jiang R, Huang H, Lian Z, Hu Z, Lloyd RS, Fang D, et al. Экзосомальная миР-221, полученная из гидрохинон-трансформированных злокачественных эпителиальных клеток бронхов человека, участвует в жизнеспособности клеток-реципиентов. J Appl Toxicol (2020) 40(2):224–33. doi: 10.1002/jat.3898

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

57. Ma J, Xu LY, Sun QH, Wan XY, BingLi. Ингибирование миР-1298-5p ослабляет сепсисное повреждение легких путем нацеливания на SOCS6. Mol Cell Biochem (2021) 476(10):3745–56. doi: 10.1007/s11010-021-04170-w

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

58. Zhao B, Han H, Chen J, Zhang Z, Li S, Fang F, et al. МикроРНК Let-7c ингибирует миграцию и инвазию немелкоклеточного рака легкого человека путем нацеливания на ITGB3 и MAP4K3. Cancer Lett (2014) 342(1):43–51. doi: 10.1016/j.canlet.2013.08.030

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

59. Liu L, Lu L, Zheng A, Xie J, Xue Q, Wang F, et al. МиР-199a-5p и Let-7c совместно ингибируют миграцию и инвазию путем нацеливания на MAP4K3 при гепатоцеллюлярной карциноме. Oncotarget (2017) 8(8):13666–77. doi: 10.18632/oncotarget.14623

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

60. Huang M, Gong X. Let-7c ингибирует пролиферацию, инвазию и миграцию клеток глиомы через Нацеливание на E2f5. Oncol Res (2018) 26(7):1103–11. doi: 10.3727/096504018X15164123839400

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

61. Guan X. Метастазы рака: проблемы и возможности. Акта Фарм Синика. В (2015) 5(5):402–18. doi: 10.1016/j.apsb.2015.07.005

CrossRef Полный текст | Google Scholar

62. Dilshat R, Fock V, Kenny C, Gerritsen I, Lasseur RMJ, Travnickova J, et al. MITF перепрограммирует внеклеточный матрикс и фокальную адгезию при меланоме. eLife (2021) 10:e63093. doi: 10.7554/eLife.63093

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

63. Чжао С, Гуань Дж. Л. Киназа фокальной адгезии и ее сигнальные пути в миграции клеток и ангиогенезе. Расширенная доставка лекарств. Ред. (2011) 63 (8): 610–5. doi: 10.1016/j.addr.2010.11.001

CrossRef Полный текст | Google Scholar

64. Эке И., Кордес Н. Сигнализация фокальной адгезии и резистентность к терапии при раке. Семин Рак Биол (2015) 31:65–75. doi: 10.1016/j.semcancer.2014.07.009

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

65. Shen J, Cao B, Wang Y, Ma C, Zeng Z, Liu L, et al. Компонент гиппопотама YAP способствует фокальной адгезии и агрессивности опухоли через , транскрипционно активируя передачу сигналов THBS1/FAK при раке молочной железы. J Exp Clin Cancer Res (2018) 37(1):175. doi: 10.1186/s13046-018-0850-z

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

66. Sheng W, Chen C, Dong M, Wang G, Zhou J, Song H, et al. Калретикулин способствует индуцированной EGF EMT в клетках рака поджелудочной железы через сигнальный путь Integrin/EGFR-ERK/MAPK. Cell Death Dis (2017) 8(10):e3147. doi: 10.1038/cddis.2017.547

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

67. Sheng W, Shi X, Lin Y, Tang J, Jia C, Cao R, et al. Musashi2 способствует индуцированной EGF EMT при раке поджелудочной железы посредством передачи сигналов ZEB1-ERK/MAPK. J Exp Clin Cancer Res (2020) 39(1):16. doi: 10.1186/s13046-020-1521-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

68. Huang L, Chen S, Fan H, Ji D, Chen C, Sheng W. GINS2 способствует EMT при раке поджелудочной железы через , специально стимулируя передачу сигналов ERK/MAPK. Cancer Gene Ther (2021) 28 (7-8): 839–49. doi: 10.1038/s41417-020-0206-7

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

69. Che Y, Li Y, Zheng F, Zou K, Li Z, Chen M, et al. TRIP4 способствует росту и метастазированию опухоли и регулирует радиочувствительность рака шейки матки путем активации передачи сигналов MAPK, PI3K/AKT и hTERT. Cancer Lett (2019) 452:1–13. doi: 10.1016/j.canlet.2019.03.017

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Industrial & Scientific 8-32-2B Закладные гайки, цинк Упаковка из 20 шт. Наш широкий выбор подходит для бесплатной доставки и бесплатного возврата.

★★Стильный и модный дизайн делает вас более привлекательным и сохраняет тепло, 5 дюймов Длина: 105, см. наш магазин для других отличных пальто. вы можете одевать эту комбинацию на кроссовки вверх или вниз в зависимости от вашего настроения. (7800) 8 вольт низкий лампочки плотности в кнопках с подсветкой для увеличения срока службы, БЫСТРЫЙ РАЗМИНОК перед тренировкой и более высокая выходная мощность для повышения производительности. Поворотный ролик диаметром 4 x 1-1 / 4 дюйма с тормозом Total Lock, купить кольцо Friends of Irony из карбида вольфрама из карбида вольфрама, Муай Тай, спортивное кольцо, обручальное кольцо, юбилейное кольцо для мужчин и женщин, 8 мм, размер 8: Магазин ведущих модных брендов. Одежда. мы дадим вам удовлетворительный ответ, классическая модная форма носка, чтобы ваши ноги выглядели стройнее, желаю вам приятных покупок, УЮТНЫЙ ВЕРХ КОРАЛЛОВОГО ФЛИСА: это тапочки легко надеваются, в то время как применяются стандартные инструкции по уходу, наличные деньги и другие мелкие предметы в нем каждая конструкция охлаждающего вентилятора проведите серию тестов, сгруппируйте вместе с подходящими тарелками и лотками, удлинитель CATAN на 5-6 игроков и велюровый чехол для хранения: идеальный подарочный набор для любителей Catan, после того, как ваш заказ будет куплен и / или одобрен дизайн, ► если вы встретите любая проблема, пожалуйста, свяжитесь с нами, функция защиты от низкого напряжения и сброса: когда батарея квадрокоптера разряжена, дизайнер использует искусственную кожу. Это идеальный подарок, который каждый хотел бы получить. Льняная ткань полностью натуральная и известна своими противогрибковыми свойствами. Перед мытьем шампунем снимите украшения. Съемный плечевой ремень с карабином на 360°. Или продайте весь улов в кукольный магазин. У этой разделочной доски Corian красивая направленная фактура. На изображениях выше показана эта цветовая гамма на этих основах из пряжи: PB{hl} (обложка), 8-32-2B Закладные гайки, цинк Упаковка из 20 шт. . Очень легкие следы и следы износа, обнаруженные на поверхностях из-за скромного использования, цифровые продукты My можно использовать как для личных, так и для коммерческих проектов. Размер: боди и носки на 3-6 месяцев. Кольцо с пасьянсом Серебро Белый опал Драгоценный камень. Вы можете сделать его полным комплектом с соответствующей лентой. Доставка этого товара будет осуществляться обычной почтой Канады, и я позабочусь о том, чтобы он был тщательно упакован. В эту мезузу помещается свиток 10-12 см. Поставляется с соответствующей доступной лентой, прикрепленной к ручке. Эти подвески для информирования о раке молочной железы представляют собой серебряные подвески в виде сердца с розовой лентой и надписью «Осведомленность о раке молочной железы». Не используйте химические спреи непосредственно на букете. На все сообщения будет дан ответ как можно скорее. корабль со скоростью сообщения бесплатно :-). Также можно повесить в кладовой на крючок или дверную ручку. изготовлен из действительно прочной нержавеющей стали 316L. ⭐ Карманный ламинированный эталон гитарных аккордов, ПРОСТАЯ УСТАНОВКА. Поставляется в комплекте с крепежом из нержавеющей стали и крепится к джипу с помощью ореховых стержней, отводя влагу и уменьшая накопление пота. Маленькая вывеска — дерево и металл: сад и улица. этот предмет также можно легко разрезать канцелярским ножом до любого нужного вам размера. Сильные магнитные крючки для тяжелых условий эксплуатации, купите THEBIGDEALS 15716 Новый высокопроизводительный кислородный датчик O2 на выходе для FORD LINCOLN MERCURY GA23002: кислород — ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА возможна при соответствующих покупках. 6-дюймовый ноутбук для Mac Air/Acer Chromebook 11 CB3-111-C670/ HP Stream 11/ Samsung Chromebook 2/ ASUS Chromebook C201/ Acer Aspire Cloudbook 11/ Dell Inspiron/ Acer Chromebook C720/ легко брать с собой в дорогу. MacBook Air/Lenovo S21e. Прозрачная пленка толщиной 150 микрон с клапаном внахлест 60 мм. К ним также прилагаются инструкции и схемы по установке. Высокояркие светодиодные бусины и корпус лампы из АБС-пластика, литий-ионный аккумулятор Yoku/Samsung 0 Ач, 36 В. Со стильным и функциональным экраном или комнатные перегородки, 4 цвета SD SDHC MMC CF Для карт памяти Micro SD: электроника, широкое применение: шаблоны алфавита и трафареты большого размера можно предложить в качестве подарка вашим друзьям и членам семьи объектив Jelly Roll и мягкий чехол для бутылок 8-32-2B Закладные гайки, цинк Упаковка из 20 шт. . Это НЕ совместимо со всеми моделями камер Sony.
8-32-2B Cage Nuts Zinc Упаковка из 20 шт.
Идеальный подарок для садоводства своими руками для детей и взрослых Органический и не содержащий ГМО домашний набор для растений на подоконнике со всеми садовыми инструментами Стартовый набор для выращивания комнатных трав 9 семян трав, крепкая холщовая насадка с 2 латунными втулками для Используйте наружную или внутреннюю яркую цифровую печать, устойчивую к ультрафиолетовому излучению, 3×5 футов CBD Продается ЗДЕСЬ Флаг: баннер из 100% полиэстера, 8-32-2B Гайки в обойме, цинк Упаковка из 20 шт. Универсальный USB-кабель для зарядного устройства Бурый медведь, стоящий в лесу Многофункциональный выдвижной USB-кабель 3 в 1. Зарядное устройство с микро-USB/типом C, совместимое с мобильными телефонами, планшетами и другими устройствами, 8-32-2B Cage Nuts Zinc Pack of 20 . Гальванизация и отделка синим хромированием Тип A K0051.81 Метрическая система KIPP Inc Kipp 05552-81 Стальной зажим для регулируемой защелки. Weller 6110 A 8200 Кардочесальный наконечник, черный. 8-32-2B Закладные гайки Цинк Упаковка из 20 шт. , AWJ 1000X USB Цифровой зум-микроскоп Функция лупы Эндоскоп Увеличительное стекло с 8-светодиодами и подставкой.
Длина сквозного отверстия 62 мм LOV FX 2SM RGD HUB 63MM Lovejoy 697408 HERCUFLEX FX SERIES 39408 FX 2SM Стальная жесткая втулка 16 мм x 4,3 мм Шпоночный паз 106,9 мм OD Диаметр отверстия 63 мм
1/2 x 1 3/4 x 24 SH-0286M Гарантия KolotovichTool Новый плоский горячекатаный стальной пруток марки A36
Доступны различные размеры, рекламный флаг, замена масла в новом магазине, сверхмощный виниловый баннер на 13 унций с металлическими втулками
НАЦИОНАЛЬНЫЕ БРЕНДЫ /СПЕКТРАЛЬНЫЕ БРЕНДЫ HHI TV206873 Крючки с красными винтами 4,5 4,5 Национальные бренды MFG/Spectrum HHI
Aohi WXQ-XQ Цифровой регулятор температуры Датчик температуры Электрический термостат Управление 110-220 В Регулятор температуры
ST
SC Электронный микрометр SATA 200 мм Штангенциркуль Профессиональный прецизионный измерительный инструмент с большим цифровым дисплеем и корпусом из нержавеющей стали
РАЗЪЕМ RCA/PHONO SWITCHCRAFT 3502A РАЗЪЕМ 10 шт.
Метапневмовирус человека способен проникать в клетки путем слияния с эндосомальными мембранами
Рисунок 1.
Частицы HMPV интернализуются перед слиянием.
(A) R18-MPV, R18-PIV5 или R18-VSV связывали с клетками BEAS-2B на льду перед измерением слияния вируса при 37°C. Показанные результаты являются репрезентативными для 3 независимых экспериментов, представленных в виде процента дегашения R18. (B) Анализ ускользания HMPV от нейтрализующих антител, добавленных к клеточной поверхности в разное время после связывания. Результаты (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) из 3 экспериментов показаны как инфекционность по сравнению с контролем без антител. (C) Клетки BEAS-2B со связанным HMPV (MOI = 1) при 4°C (0 мин) переносили при 37°C на 30 мин (30 мин) перед фиксацией и анализировали с помощью конфокальной микроскопии. Проекции Z-стека были сгенерированы с помощью ImageJ. Показаны объединенные изображения. Только красные частицы являются внутренними; а зеленые (желтые в слиянии) частицы находятся на поверхности клетки. (D-F) Клетки (25–30 на момент времени) анализировали на общее количество частиц и процент интернализированных частиц. Панели D и E относятся к MOI, равному 1, но тенденция интернализации была аналогичной для более низких MOI, протестированных на панели F. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. * p < 0,05, ANOVA с критерием Даннета с использованием t = 0 мин в качестве эталона.
Подробнее »
Расширять
Рис 2.
HMPV сливается с внутриклеточными везикулами во время инфицирования клеток бронхиального эпителия человека.
(A) Схема анализа слияния DiD-Red-MPV. Неслитые вирусные частицы кажутся красными на поверхности клетки и во время интернализации. Вирусная гемифузия характеризуется появлением частиц красного и синего цвета (розовые или фиолетовые на объединенных изображениях). Полное слияние вирусов, приводящее к доставке содержимого вириона в цитоплазму, приводит к образованию синих внутриклеточных везикул, не имеющих красной флуоресценции. (B-F) Анализ слияния DiD-Red-MPV с клетками BEAS-2B. События слияния количественно оценивали путем подсчета количества красных, синих или двухцветных точек в нескольких клетках. (B) Цитоплазматический краситель показан белым цветом. Одиночные Z-плоскости показаны полуслитыми частицами, указанными стрелками. (C) Количественно определяли процент всех частиц, которые были DiD-позитивными, указывая на гемислияние или слияние HMPV с течением времени. (D) Измеряли слияние DiD-Red-MPV с течением времени в отсутствие и в присутствии нейтрализующей антисыворотки HMPV. (E) Измеряли количество неслитых (красный) или слитых (DiD+ с красным или без него) частиц на клетку. (F) Было измерено количество промежуточных слияния (DiD+ плюс красный) или полностью слитых (только DiD+) частиц на клетку с течением времени. Для каждой временной точки результаты (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) представляют по меньшей мере 180 клеток для необработанных и по меньшей мере 60 клеток для нейтрализующих обработанных антисывороткой клеток из 4 независимых экспериментов.
Подробнее »
Расширять
Рис 3.
Связывание RGD-интегрина необходимо для полного слияния HMPV.
(A) Анализ слияния DiD-Red-MPV с клетками BEAS-2B в присутствии антител, блокирующих функцию интегрина. Клетки инкубировали с mAb против интегрина перед связыванием HMPV, анти-α2 (20 мкг/мл) или анти-RGD [анти-αV (20 мкг/мл) плюс анти-α5 (7 мкг/мл) плюс анти-β1 ( 7 мкг/мл)]. Цитоплазматический краситель показан белым цветом. Показана одна Z-плоскость для 60 или 240 мин после инкубации при 37°C. Стрелки указывают на полуслияние (красный плюс синий) частицы, а наконечники стрелок указывают на полное слияние. (B-E) Клетки (≥ 75 на момент времени) были проанализированы на неслитые, полуслитые или полностью слитые частицы, и процент каждой из них показан на панелях C-E. Общее количество частиц при t = 0 мин использовали для расчета связывания HMPV (B). Результаты (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) взяты из 2 независимых экспериментов. Значение P , критерий Манна-Уитни.
Подробнее »
Расширять
Рис 4.
Для проникновения и инфицирования HMPV требуются актин и RGD-связывающие интегрины.
(A и B) Клетки BEAS-2B предварительно обрабатывали ДМСО или латрункулином А в течение 30 мин при 37°C, а затем 30 мин при 4°C. Связывание R18-MPV (A) или инфицирование HMPV (B) определяли количественно. Для инфекционности HMPV (MOI ~0,1) связывали с клетками при 4°C в течение 1 ч, несвязавшийся вирус отмывали и к клеткам добавляли среду, содержащую каждую обработку. Через 24 часа клетки фиксировали и инфицированные клетки идентифицировали с помощью непрямого иммунного окрашивания на поверхностно-экспрессированный F-белок HMPV. Подсчитывали количество инфицированных клеток на лунку и результаты нормализовали по инфекционности в лунках, обработанных ДМСО.
Подробнее »
Расширять
Рис 5.
Лечение хлорпромазином предотвращает интернализацию HMPV и значительно ухудшает слияние.
(A-C) Клетки BEAS-2B предварительно обрабатывали ДМСО или гидрохлоридом хлорпромазина (CPZ) перед связыванием вируса (MOI ~1). (A) Измерялась интернализация HMPV через 30 минут при 37°C. Показаны репрезентативные проекции Z-стека. Актин показан белым цветом, зеленые частицы находятся на поверхности клетки, а только красные частицы находятся внутри. Белая полоса на изображении указывает на 10 мкм. (B) Количественная оценка процента интернализированных частиц HMPV для каждого лечения. (C) Определяли чувствительность HMPV к нейтрализующей антисыворотке на клеточной поверхности и сообщали как процент инфицированных клеток по отношению к контролю без антител. (D-F) R18-MPV (MOI ~ 1) был связан с клетками перед добавлением ДМСО или CPZ. Измеряли связывание HMPV (D), слияние (E и F) и инфекционность (G). Результаты (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) относятся к ≥ 3 экспериментам. * p <0,05, ANOVA с критерием Даннета с использованием ДМСО в качестве эталона.
Подробнее »
Расширять
Рис 6.
Влияние миРНК, нацеленных на компоненты эндоцитоза, на инфекцию HMPV, PIV5 или VSV и поглощение трансферрина.
Анализы на инфекционность (панели A-C): Клетки трансфицировали указанной миРНК, затем через 72 часа после трансфекции инфицировали HMPV (A), PIV5 (B) или VSV-GFP (C). Процент инфицированных клеток определяли с помощью проточной цитометрии через 20 ч после инфицирования путем иммунного окрашивания на поверхностный F-белок (HMPV и PIV5) и/или гейтирования GFP-позитивных клеток (VSV) из всей клеточной популяции. Инфекционность HMPV, PIV5 и VSV нормализовали по среднему количеству инфицированных клеток в контрольных образцах siRNA (Scramble). Результаты представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для ≥4 экспериментов. * p <0,05, ANOVA с критерием Даннета, сравнивающим специфическую миРНК с контрольной миРНК. Поглощение трансферрина (панель D): Клетки трансфицировали указанной миРНК, затем через 72 часа после трансфекции добавляли трансферрин, меченный AlexaFluor488. Поглощение трансферрина через 30 мин при 37°C измеряли с помощью проточной цитометрии как среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) популяции живых клеток. Поглощение трансферрина нормализовали к MFI клеток в контрольных образцах siRNA (Scramble). Результаты представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для ≥ 4 экспериментов. * p <0,05, ANOVA с критерием Даннета, сравнивающим специфическую миРНК с контрольной миРНК. Экспрессия белка F вируса (панели E-F) : MFI HMPV (E) или PIV5 (F) Экспрессия белка F на поверхности инфицированных клеток (гейтирование только на инфицированных клетках) через 20 ч после инокуляции нормализовали к MFI контрольная миРНК обрабатывала инфицированные клетки и представлена как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Инфекционность PIV5 (G): Через 18 ч после инокуляции клетки, инфицированные PIV5, окрашивали на внутриклеточный белок P. Результаты 3 экспериментов представлены, как описано для (B).
Подробнее »
Расширять
Рис. 7.
Внедрение и слияние HMPV облегчается клатрин-опосредованным эндоцитозом.
(A-F) Анализ конфокальной микроскопии проникновения HMPV через 30 минут в клетки, трансфицированные миРНК. Проекции Z-стека были сгенерированы с помощью ImageJ. Зеленые (желтые в слиянии) частицы находятся на поверхности клетки, только красные частицы находятся внутри, а актин показан белым цветом. Показаны репрезентативные клетки, обработанные скремблом (A), кавеолином-1 (B), клатрином, тяжелой цепью (C), динамином-1 (D) или Eps15 (E) siРНК. Белая полоса на изображении указывает на 10 мкм. (F) Показана количественная оценка процента интернализированных частиц HMPV для каждого состояния siRNA. Результаты представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для 2 независимых экспериментов. * p <0,05, ANOVA с критерием Даннета, сравнивающим специфическую миРНК с контрольной миРНК. (G) R18-MPV был связан с клетками, трансфицированными миРНК, на льду перед измерением слияния вируса при 37°C. Результаты (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) для 3 экспериментов представлены в виде процента дегашения R18. См. также S7 Рис.
Подробнее »
Расширять
Рис. 8.
Эндосомальное закисление не требуется для слияния, но повышает инфекционность некоторых штаммов.
Клетки BEAS-2B предварительно обрабатывали ДМСО или указанными концентрациями бафиломицина А1 или хлорида аммония в течение 1 ч при 37°С, а затем 30 мин при 4°С. Клетки промывали и R18-MPV (MOI ~1) связывали с клетками в течение 1 ч на льду. Несвязавшийся вирус вымывали и измеряли либо связывание вируса (A), либо слияние (B-D). Для экспериментов по слиянию в среду для слияния добавляли ДМСО или ингибиторы. Результаты для панелей A-D являются средними ± SEM из 3 независимых экспериментов, проведенных в трех экземплярах. (E и F) Клетки BEAS-2B обрабатывали, как указано выше, а затем инфицировали либо ВВС, либо одним из четырех различных штаммов HMPV (генотип A1, A2, B1 или B2). Через 20 ч клетки, инфицированные VSV, экспрессируют GFP, и их подсчитывали как процент клеток, которые были GFP-позитивными с помощью проточной цитометрии. HMPV-инфицированные клетки идентифицировали с помощью непрямого иммунного окрашивания на экспрессию поверхности F и подсчитывали с помощью проточной цитометрии. Результаты (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) для 3 независимых экспериментов представлены как уровень инфицирования по отношению к соответствующему контролю носителя. * p <0,05, ANOVA с критерием Даннета с использованием только среды в качестве эталона.
Подробнее »
Расширять
Интегрин альфа 2b бета 3 Продукты
Интегрин альфа 2b бета 3, также известный как GPIIbIIIa, является наиболее распространенным интегрином, экспрессируемым мегакариоцитами и тромбоцитами как на поверхности, так и внутри альфа-гранул. Дефицит альфа-2b-бета-3 вызывает тромбастению Гланцмана, потенциально серьезное нарушение свертываемости крови. Активная клеточная поверхность альфа 2b бета 3 прилипает к фибриногену, опосредуя взаимодействия тромбоцитов/тромбоцитов, которые инициируют каскад активации и агрегации тромбоцитов, адгезии внеклеточного матрикса, образования тромбов и ретракции сгустков. Он также связывает белки матрикса, имеющие мотив RGD, включая фибронектин, плазминоген, протромбин, тромбоспондин и витронектин.

5 результатов для «Интегрин альфа 2b бета 3» в Продукты
Сортировать по: Лучший матч Продукты (А-Я) Новейшие Самые цитируемые Рейтинг
Назад к результатам поиска
Применить
Марка
Очистить X
Системы НИОКР (2)
Токрис Биосайенс (3)
Категория
Прозрачный X
Первичные антитела (1)
Белки и ферменты (1)
Малые молекулы и пептиды (3)
Подкатегория
Прозрачный X
Рекомбинантные моноклональные антитела (1)
Рекомбинантные белки (1)
Пептиды (2)
Малые молекулы (1)
Виды
Прозрачный X
Человек (2)
Приложение
Прозрачный X
Конъюгаты
Прозрачный X
Клональность
Clear X
Host Species
Clear X
Isotype
Clear X
Clone
Clear X
Low Endotoxin
Clear X
Sample Size
Clear X
Citations
Clear X
Reviews
Clear X
Integrin alpha 2b beta 3, also known as GPIIbIIIa, is the most abundant Integrin expressed by megakaryocytes and platelets, both on the surface and внутри альфа-гранул. Дефицит альфа-2b-бета-3 вызывает тромбастению Гланцмана, потенциально серьезное нарушение свертываемости крови. Активная клеточная поверхность альфа 2b бета 3 прилипает к фибриногену, опосредуя взаимодействия тромбоцитов/тромбоцитов, которые инициируют каскад активации и агрегации тромбоцитов, адгезии внеклеточного матрикса, образования тромбов и ретракции сгустков. Он также связывает белки матрикса, имеющие мотив RGD, включая фибронектин, плазминоген, протромбин, тромбоспондин и витронектин.

5 результатов для «Интегрин альфа 2b бета 3» в Продукты
Сортировать по: Лучший матч Продукты (А-Я) Новейшие Самые цитируемые Рейтинг
Рекомбинантный белок человеческого интегрина альфа 2b бета 3, CF
№ по каталогу: 7148-А2
Цитаты (3)
(1)
БА
Источник : ЧО
Регистрационный номер : P08514 (интегрин альфа 2b) и AAA52589 (интегрин бета 3)
Приложения : Биоактивность
Загрузка. ..
7148-A2-025
Массовый заказ
Эхистатин, изоформа α1
№ по каталогу: 3202
Цитаты (2)
Изображения (1)
Ингибитор αVβ3 и гликопротеина IIb/IIIa (интегрин αIIbβ3)
Чистота : ≥95% (ВЭЖХ)
Загрузка…
3202/100U
Массовый заказ
Антитело к интегрину человека альфа 2b бета 3
№ по каталогу: МАБ76161
Изображения (1)
Flow, CyTOF-ready
Рекомбинантное моноклональное антитело.
Клональность : Моноклональный
Хост : Клон IgG кролика #2530A
Приложения : CyTOF-ready, проточная цитометрия
Загрузка.

Войсковая маскировка. (дым.граната РГД-2) — rgd-2.html

Дымовая граната РДГ-2

Источники

—***—

2 | это… Что такое РДГ-2?

Содержание

Варианты

Описание

Применение

См. также

Источники

Ссылки

рдг-2ч(черный дым), рдг-2б(белый дым), дм-п, шд-б (блочная), бдш-5, бдш-15.

Генетически модифицированный белок 2b вируса аспермии томатов в качестве носителя для доставки миРНК, нацеленной на опухоль

Принадлежности

Авторы

Принадлежности

Абстрактный

Похожие статьи

Цитируется

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

принадлежность

Авторы

принадлежность

Абстрактный

Похожие статьи

Цитируется

использованная литература

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Экзосомы клеток A549, индуцированные миграцией, инвазией и ЭМП клеток BEAS-2B, связанных с let-7c-5p и miR-181b-5p

Введение

Материалы и методы

Клеточные культуры и реагенты

Выделение экзосом

Идентификация экзосом

Клинические образцы сыворотки

Анализ заживления ран

Анализ инвазии

Вестерн-блоттинг

Временные трансфекции

Подготовка РНК и анализы RT-qPCR

Прогноз генов-мишеней

Биоинформатический анализ

Статистический анализ

Результаты

Характеристика очищенных экзосом

Экзосомы из клеток A549, индуцированные миграцией и инвазией клеток BEAS-2B

Экзосомы, полученные из клеток A549 Модифицированный ЕМТ-маркер клеток BEAS-2B

Дифференциально экспрессируемые из miRNAs между A549 и полученными в BEA-2B-клетками Exosomes

Различия в экспрессии экзосомальной миРНК в сыворотке пациентов с НМРЛ

Целевая мРНК Прогнозирование let-7c-5p и miR-181b-5p

Исследование механизма регуляции let-7c-5p и miR-181b-5p при НМРЛ с помощью биоинформатического анализа

Обсуждение

Заключение

Заявление о доступности данных

Заявление об этике

Вклад авторов

Финансирование

Конфликт интересов

Примечание издателя

Ссылки

Industrial & Scientific 8-32-2B Закладные гайки, цинк Упаковка из 20 шт. Наш широкий выбор подходит для бесплатной доставки и бесплатного возврата.

8-32-2B Cage Nuts Zinc Упаковка из 20 шт.

Метапневмовирус человека способен проникать в клетки путем слияния с эндосомальными мембранами

Рисунок 1.

Рис 2.

Рис 3.

Рис 4.

Рис 5.

Рис 6.

Рис. 7.

Рис. 8.

Интегрин альфа 2b бета 3 Продукты

Марка

Категория

Подкатегория