Оса зрк фото: Страница не найдена

«США дарят чужое, но советская «Оса» Украину не спасет»

США планируют поставить Украине системы ПВО производства СССР, в том числе зенитные ракетные комплексы (ЗРК) «Оса», которые были «тайно приобретены» Пентагоном, пишет The Wall Street Journal. «Газета.Ru» разбиралась, как советские комплексы оказались в распоряжении США и насколько они могут быть полезны ВСУ сегодня.

The Wall Street Journal отмечает, что комплексы «Оса» знакомы украинским военным, так как страна унаследовала их после развала СССР. Сообщается, что США приобретали ЗРК для того, чтобы изучить технологии, использованные советскими инженерами, а также ознакомить с ними американских специалистов. Пентагон отказался комментировать эти сообщения.

«Самое мощное неядерное оружие России»: на что способен «Солнцепек»

Во время проведения специальной военной операции на Украине российская армия применила тяжелую огнеметную…

21 марта 15:18

Глава МИД России Сергей Лавров заявил ранее, что советские и российские системы ПВО и ПРО не могут быть переданы в третьи страны, и пригрозил, что Россия будет атаковать грузы с военной помощью от партнеров Украины.

Ранее о готовности передать свой единственный зенитный ракетный комплекс С-300 Украине сообщила Словакия, но после министр обороны страны Ярослав Надь отметил, что альтернативы комплексу у Братиславы нет. По данным CNN, Словакия вела переговоры с США о передаче стране другой системы, в частности Patriot.

Комплекс «Оса» был принят на вооружение в СССР в 1971 году. На вооружении комплекса в зависимости от модификации стоят от четырех до шести управляемых ракет с радиокомандной системой наведения. В 1989 году производство «Осы» прекратилось полностью, но комплекс все еще распространен – сейчас на боевом дежурстве находится более 400 систем. Кроме России, такие ЗРК стоят на вооружении у Белоруссии, Польши и Украины. Точное число комплексов, которые остались у Киева после начала спецоперации России, неизвестно.

«Во второй половине 1990-х – начале 2000-х годов США активно приобретали системы ПВО советского производства. Это были нелегальные покупки на территории постсоветских стран и в странах, куда указанные комплексы поставлялись в рамках военно-технического сотрудничества СССР»,

– объяснил «Газете. Ru» главный редактор журнала «Национальная оборона», директор Центра анализа мировой торговли оружием (ЦАМТО) Игорь Коротченко.

Он отметил, что США закупили не только комплексы «Оса», но и С-300 и другие, в частности «Бук». «Эти приобретения совершались в рамках отработки эффективности защиты боевых самолетов США от действий «Осы» и комплексов ПВО – существовала целая программа. Поэтому у США на полигонах имеются образцы советской техники ПВО», – сказал Коротченко.

«Кинжал» – это сложная колбаса. К нему можно пристыковать что угодно»

Армия России впервые применила гиперзвуковые ракеты авиационного ракетного комплекса «Кинжал»…

21 марта 19:56

По словам редактора журнала «Арсенал Отечества», военного эксперта Алексея Леонкова, «Оса» – подвижный комплекс, единственный, который может преодолевать водные преграды и вести при этом огонь по воздушным целям. «Этот комплекс отличился в 1991 году тем, что сбил крылатую ракету «Томагавк», то есть он может сбивать подобные ракеты. Он может работать и по авиационным средствам», – сообщил Леонков.

Перехват американского «Томагавка» «Оса» продемонстрировала во время войны в Персидском заливе 1990-1991 годов. Тогда «Оса» стояла на вооружении армии Ирака. США рассматривали комплекс как одну из наиболее эффективных систем иракской армии и придавали первоочередное значение его нейтрализации. Известно, что тогда американский спецназ захватил один комплекс вместе с расчетом и технической документацией для изучения и организации борьбы с ним на территории Кувейта.

«Главное не сам комплекс, а боевой расчет, который им управляет. За время идущей спецоперации Минобороны России не раз заявляло об уничтожении украинских ЗРК – зачастую они уничтожались вместе с боевыми расчетами. Не просто должен быть расчет, но грамотный и опытный, тогда комплекс «Оса» сможет себя оправдать. Но понятно, что как только эти комплексы себя обнаружат, они тут же станут предметом охоты за ними и целями для уничтожения», – сказал Леонков.

По мнению член-корреспондента Российской академии ракетных и артиллерийских наук, доктора военных наук Константина Сивкова, говорить об эффективности комплексов «Оса» для ВСУ нет смысла, потому что «они не успеют ее показать».

«Вашингтон дарит чужое, но советский комплекс «Оса» Украину не спасет. В день российские военные уничтожали, по заявлениям Миноброны, по три-четыре комплекса С-300 ВСУ. Появятся еще несколько комплексов «Оса» – их сметут за день-два. При этом скрыть поставку этих комплексов на территорию Украины невозможно в условиях контроля ВКС России ее воздушного пространства – это достаточно крупногабаритные системы. Ее уничтожат до того, как ВСУ смогут систему развернуть на боевое дежурство», – заключил Сивков.

ЗРК Оса, тактико-технические характеристики зенитного ракетного комплекса, АМК

Зенитный ракетный комплекс (ЗРК) «Оса» является автоматизированным средством ПВО, предназначенным для отражения воздушных угроз на малых дальностях. Его тактико-технические характеристики способны обеспечить прикрытие от воздушных ударов танковой или мотострелковой дивизии. Ракетный комплекс может действовать как в процессе боя, так и на марше.

Создание ЗРК «Оса» в 60-х годах 20 века было обусловлено тем, что авиация, избегая огня зенитных управляемых ракет, старалась атаковать на сверхмалых высотах. В связи с этим ЗРК, которые существовали в те годы, оказались практически бесполезными. Хотя их ТТХ прекрасно подходили для борьбы с высоколетящими целями, для низколетящих целей они практически не представляли опасности.

Так как новая тактика нападения авиации распространилась по всему миру, военные ведомства многих развитых стран пытались решить задачи по проектированию новых зенитно-ракетных комплексов, которые могли бы эффективно бороться именно с низколетящими целями. Технический уровень развития даже такого мощного государства, как США, не позволял создать ЗРК, который мог бы эффективно бороться с низколетящими целями, но советские конструкторы в очередной раз совершили резкий рывок вперёд в гонке вооружений.

История создания ЗРК «Оса»

Согласно постановлению ЦК КПСС и Совета Министров от 27.10.1960 года, работы по созданию нового зенитно-ракетного комплекса были начаты в том же 1960 году. Ответственным за разработку был назначен НИИ-20 Государственного Комитета СССР по радиоэлектронике. Во главе процесса разработки был поставлен Тарановский, которого вскоре сменил Косичкин.

До сих пор перед советскими конструкторами никогда не ставили сложную задачу по разработке полностью автономного зенитно-ракетного комплекса. Согласно плану, новая система ЗРК должна была совместить на одной базе следующие устройства:

1. Средства обнаружения и сопровождения воздушных целей;
2. Пусковое устройство, способное к запуску зенитной управляемой ракеты;
3. Средства топографии;
4. Средства навигации;
5. Независимые источники электроснабжения.

В довершение ко всему, новый зенитно-ракетный комплекс должен был быть ещё и плавучим. После нескольких попыток разработки стало ясно, что одному НИИ-20 с подобной задачей не справиться. Именно по этой причине разработка ЗРК было доверена целому ряду НИИ и конструкторских бюро:

• НИИ-20 Госкомитета по радиоэлектронике, как уже было сказано выше, назначался ответственным за весь проект. Кроме этого, данное НИИ отвечало за разработку боевой машины;
• Конструкторское бюро №82 машиностроительного завода по авиационной технике было назначено ответственным за разработку и испытания зенитной управляемой ракетой. Главным конструктором, ответственным за ракету, стал А. Потопалов;
• Всесоюзный НИИ по электрооборудованию отвечал за разработку всей системы электропитания ЗРК;
• Самоходное шасси должен был разработать Кутаисский автомобильный завод.

Параллельно с разработкой самоходного зенитно-ракетного комплекса «Оса» разрабатывался аналогичный комплекс ЗРК «Оса-М», основным предназначением которого являлась защита кораблей военно-морского флота от низколетящих воздушных угроз.

Так как военная разведка СССР в 60-е годы успешно работала в США, советскому правительству было известно, что потенциальный соперник разрабатывает свой автономный и мобильный ЗРК на самоходном шасси. Американская новинка, известная под именем «Маулер», должна была обеспечить американские войска защитой от низколетящих целей на расстоянии 10-15 км.

В связи с этими обстоятельствами, разработка советского ЗРК началась усиленными темпами. Как показало время, паника была совершенно напрасной, так как данный американский проект с треском провалился – летом 1965 года он был окончательно свёрнут.

Отрывок, характеризующий Оса (гранатомёт)

В этот вечер Марья Дмитриевна ехала к Архаровым и предложила барышням ехать с нею. Наташа под предлогом головной боли осталась дома. Вернувшись поздно вечером, Соня вошла в комнату Наташи и, к удивлению своему, нашла ее не раздетою, спящею на диване. На столе подле нее лежало открытое письмо Анатоля. Соня взяла письмо и стала читать его. Она читала и взглядывала на спящую Наташу, на лице ее отыскивая объяснения того, что она читала, и не находила его. Лицо было тихое, кроткое и счастливое. Схватившись за грудь, чтобы не задохнуться, Соня, бледная и дрожащая от страха и волнения, села на кресло и залилась слезами. «Как я не видала ничего? Как могло это зайти так далеко? Неужели она разлюбила князя Андрея? И как могла она допустить до этого Курагина? Он обманщик и злодей, это ясно. Что будет с Nicolas, с милым, благородным Nicolas, когда он узнает про это? Так вот что значило ее взволнованное, решительное и неестественное лицо третьего дня, и вчера, и нынче, думала Соня; но не может быть, чтобы она любила его! Вероятно, не зная от кого, она распечатала это письмо. Вероятно, она оскорблена. Она не может этого сделать!» Соня утерла слезы и подошла к Наташе, опять вглядываясь в ее лицо. – Наташа! – сказала она чуть слышно. Наташа проснулась и увидала Соню. – А, вернулась? И с решительностью и нежностью, которая бывает в минуты пробуждения, она обняла подругу, но заметив смущение на лице Сони, лицо Наташи выразило смущение и подозрительность. – Соня, ты прочла письмо? – сказала она. – Да, – тихо сказала Соня. Наташа восторженно улыбнулась. – Нет, Соня, я не могу больше! – сказала она. – Я не могу больше скрывать от тебя. Ты знаешь, мы любим друг друга!… Соня, голубчик, он пишет… Соня… Соня, как бы не веря своим ушам, смотрела во все глаза на Наташу. – А Болконский? – сказала она. – Ах, Соня, ах коли бы ты могла знать, как я счастлива! – сказала Наташа. – Ты не знаешь, что такое любовь… – Но, Наташа, неужели то всё кончено? Наташа большими, открытыми глазами смотрела на Соню, как будто не понимая ее вопроса. – Что ж, ты отказываешь князю Андрею? – сказала Соня.

Трудности при разработке ЗРК «Оса»

В СССР разработка ЗРК «Оса» тоже продвигалась очень медленно. Назначенные НИИ и КБ не справлялись с поставленной задачей. Проходили постоянные замены главных конструкторов, которые отвечали за разработку различных узлов, но это мало помогало.

В сентябре 1964 года новым разработчиком был назначен ЗУР-МКБ «Факел». В то время главным конструктором «Факела» был Грушин. Разработка плавающего самоходного шасси также была передана новому предприятию, которым стал Брянский автомобильный завод.

Директор НИЭИ Минрадиопрома СССР Ефремов был назначен главным конструктором ЗРК.

После такой масштабной перестановки, разработка ЗРК «Оса» пошла более успешно и в 1970 году первый прототип ЗРК «Оса» был отправлен на Эмбинский полигон, где успешно прошёл все положенные испытания. 4 октября 1971 года комплекс был принят на вооружение армии СССР. На вооружении ПВО Сухопутных войск данный самоходный комплекс был принят в 1972 году. Общественности зенитно-ракетный комплекс «Оса» впервые был представлен во время военного парада, который проходил на Красной площади в Москве в ноябре 1975 года.

Как создавалась «Оса»

В 50-е годы прошлого века резко изменилась тактика ведения воздушной войны, на смену артиллерийским орудиям пришли управляемые ракеты.

Наведение осуществлялось по информации с РЛС. Это заставляло летчиков искать спасения на больших высотах или наоборот прижиматься к земле, лететь в мертвой зоне радаров. Встал со всей остротой вопрос защиты мотострелковых дивизий от воздушных атак самолетов на бреющем полете.

Для исправления создавшегося положения Совмин СССР выпустил постановление с задачей в кратчайшие сроки разработать современный ЗРК.

Предварительно проект назвали «Эллипсоид».

В нем комплексу предписывалось:

• комплекс должен быть размещён на одном шасси;
• РЛС ЗРК должны были работать не только в боевом положении, но и во время движения;
• пусковые установки должны обладать возможностью стрельбы во время коротких остановок;
• общая масса ракеты не должна превышать 65 кг, это было необходимо для быстрой перезарядки пусковой установки силами расчёта.

Разрабатывать новое зенитное оружие поручили старейшему в стране НИИ-20 ГКРЭ. Назначение главным конструктором получил М. М. Косичкин, первопроходец в сфере исследования малогабаритной артиллерийской радиолокации в подвижном бою.

Средства поражения создавал Тушинский машиностроительный завод, возглавляемый тогда А. В. Потопаловым, человеком с опытом (в свое время он занимался созданием самолета-снаряда 10Х).

Ракетную установку поручили спроектировать Государственному конструкторскому бюро компрессорного машиностроения, ныне АО «НПП «Старт» имени А. И. Яскина.

Выполнить такой амбициозный замысел очень непросто. Достаточно сказать, что у американцев аналогичный проект примерно в то же время не получился, и они его закрыли. Английский Sea Cat с ракетой «Тайгер Кэт» уступал нашему комплексу по всем показателям.

В 1962 году разработчики все еще продолжали заниматься экспериментами в лабораториях. Долго не получалось надежное ракетное топливо и электронные приборы управления.

Недовольство низким темпом создания «Осы» вылилось в новые назначения. Создание ракеты 9МЗЗ перепоручили ОКБ-2 ГКАТ во главе с П. Д. Грушиным. Этот талантливый человек руководил созданием ракеты 1Д для ЗРК С-75, сбившей американский самолёт-шпион U-2, пилотируемый Ф. Г. Пауэрсом.

Срок готовности перенесли на второй квартал 1965 года с корректировкой требований к ракете:

Масса ракеты	Разрешили увеличить массу до 110…115 кг
Объект доступный засечке локатором	Аналогичный МИГ — 19
Скорость цели	Возможность сбивать цели на скорости до 500 м\с
Высота полета	Возможность сбивать цели на высоте от 50…100м до 5 км на сверхзвуковых скоростях
	Возможность сбивать цели на высоте до 6…7 км на дозвуковых скоростях
Дальность поражения	8…10 км на сверхзвуковых скоростях
	до 10…13 км на дозвуковых скоростях

Испытания ракет начались по плану, и к 1967 году полностью комплекс решили представить для испытаний. Но Государственная комиссия, которую возглавлял Т. А. Микитенко, обнаружила расхождения в возможностях изделия с плановым заданием. Недостатки:

1. Малая эффективность и надежность.
2. Слишком длительная подготовка к стрельбе.
3. Недостаточная высота уничтожения целей.
4. Прогар соплового блока при запуске.
5. Недопустимые ошибки наведения.
6. Невозможность ведения огня при некоторых положениях ПУ.
7. Затенение сектора обзора пусковой установкой спереди.

Частичная вина заказчика, пропустившего такие недостатки еще при создании чертежей, не искупала вину конструкторов.

Последовали оргвыводы. М. М. Косичкина сменил директор НИЭМИ (Научно-исследовательского электромеханического института, прежнего НИИ-20 ГКРЭ. В. П. Ефремов (22.03.1926 – 16.09.2006).

Ранее под его руководством создавался ЗРК «Круг». В заместители определили — И. М. Дризе (20.03.1927 – 3.11.2016), который уже работал с Ефремовым над «Кругом». При этом начало комплексного испытания «Осы» перенесли на весну 1970 года.

Параллельно с созданием сухопутного, разрабатывался морской вариант «Осы».

Создание шасси 937, позже переименованного в 5937 «Основа», доверили Брянскому автомобильному заводу Минавтопрома с требованием сделать его колесным и плавающим.

Успешно сдав экзамен Госкомиссии, с 4 октября 1971 года его приняли на вооружение, с этого момента ЗРК «Оса» начал поступать в Советскую Армию. Для нужд ВМФ был выпущен вариант ЗРК «Оса-М». По классификации НАТО, этот комплекс числится как SA-8 «Gecko.

Описание ЗРК «Оса» и его основные боевые характеристики

Зенитно-ракетный комплекс «Оса» способен самостоятельно следовать за танковыми и мотострелковыми дивизиями практически в любых погодных условиях. Уникальная конструкция шасси обеспечивает ему прекрасную проходимость и плавучесть. Он имеет высокую эффективность и обладает хорошей защитой от помех. Мобильный самоходный ЗРК «Оса» включает в свой состав следующие средства:

• Машина 9А33Б, оборудованная средствами наведения и пуска ракет;
• Системы разведки;
• Заряжающая машина;
• Ракета 9М33, которая является управляемой.

Как заряжающая, так и боевая машины находятся на плавающих шасси БАЗ-5937. Данное трёхосное шасси обладает прекрасной проходимостью в условиях бездорожья и способно преодолевать водные преграды. Кроме того, оно оснащено следующими устройствами:

• Средствами электроснабжения;
• Навигацией;
• Системами жизнеобеспечения;
• Генератором отбора мощности.

Данный комплекс, помимо того, что может передвигаться своим ходом, может транспортироваться на грузовых самолётах ИЛ-76 или железнодорожном транспорте. Мощный двигатель способен обеспечить ЗРК максимальную скорость до 80 км/ч по шоссе. При этом по грунтовым дорогам комплекс способен передвигаться со скоростью до 55 км/ч.

В случае необходимости, ЗРК «Оса» способен плыть со скоростью до 10 км/ч. В данном случае, двигатель обеспечивает работоспособность специального водомёта. Само шасси может буксировать прицепы весом до 7 200 кг.

Для обнаружения воздушных целей на ракетном комплексе используется мощная радиолокационная станция. Она может обнаруживать воздушные цели, находясь как на месте, так и в движении. Кроме того, ЗРК способна идентифицировать цели по признаку «свой – чужой».

Материал опубликован в журнале «Арсенал Отечества» № 4 (24) за 2016 г.

В 2015 году исполнилось 10 лет со дня открытия возле здания заводоуправления монумента боевой машины зенитно-ракетного комплекса «Оса». Этот памятник был открыт в преддверии 60-й годовщины Победы в Великой Отечественной войне и 35-летия с момента серийного производства комплексов. Отмечая в 2021 году 45-летие принятия на вооружение ЗРК «Оса», давайте вспомним, как начиналась эра легендарной «Осы».

ЗРК «Оса» – один из видов оборонительного оружия, в котором были воплощены лучшие конструкторские разработки, высокий интеллект и творческий замысел многих создателей этого изделия. И, в первую очередь, необходимо вспомнить имя генерального конструктора Научно-исследовательского электромеханического института Вениамина Павловича Ефремова. Вениамин Павлович всю жизнь проработал в военно-промышленном комплексе, начинал свой путь с должности техника в Научно-исследовательском электромеханическом институте и вырос до генерального конструктора — академик Российской академии наук, один из крупнейших ученых в области создания современных средств ПВО. Под его руководством были освоены в производстве и приняты на вооружение армии такие известные в стране и за рубежом зенитно-ракетные комплексы и системы, как «Круг», «Оса», «Тор», «С-300В», «С-300ВМ».

Изделия «Круг», «Оса», «Тор» сделали имя не только институту, они способствовали становлению и развитию Ижевского электромеханического завода. Советская техника должна была опережать образцы зарубежных конкурентов по основным тактико-техническим требованиям и приниматься на вооружение, по крайней мере, на десяток лет раньше. Комплексы «Круг», «Оса», «Тор», каждый в свое время, являлись основой противовоздушной обороны Сухопутных войск России. За созданием этих комплексов и систем стоят высочайшая эрудиция, неординарные способности, глубокие технические знания генерального конструктора. По боевым характеристикам все изделия в период разработки не имели себе равных в мире.

Основные вехи в истории создания и производства ЗРК «Оса».

1971-1980 годы можно смело назвать десятилетием «Осы». Для ИЭМЗ — это период расцвета творческой активности инженерно-технических работников, передовых рабочих и руководителей всех звеньев управления. После проведения заводских испытаний в июле 1970 года и совместных государственных испытаний в феврале 1971-го постановлением ЦК КПСС и Совета министров СССР комплекс был принят на вооружение. В апреле 1971 года климатические испытания боевой машины были завершены, полученные данные использовались при разработке плана мероприятий по результатам государственных испытаний ЗРК.

Главный конструктор боевой машины Иосиф Матвеевич Дризе (на фото) и его заместитель Андрей Михайлович Рожнов оказали заводу большую помощь при организации работы на полигоне, а при проведении климатических испытаний был незаменим ведущий специалист института Николай Николаевич Покрамович. Первую партию комплексов отгрузили в декабре 1971-го, а с 1972 года ЗРК «Оса» (9А33Б) был запущен в серийное производство.

Три батареи, прошедшие войсковые испытания, участвовали в параде войск на Красной площади 7 ноября 1973 года и произвели настоящий фурор. Химкинский полк, сформированный первым, более пятнадцати лет выводил на парад боевые машины 9А33Б и 9А33БМ2.

После трех одновременно проведенных в конце 1973 — начале 1974 годов модернизаций авторитет комплекса «Оса-АК» стал непререкаемым в среде военных специалистов не только Советской Армии, но и других армий мира. Комплекс стал известен как лучший зенитно-ракетный комплекс ближнего радиуса действия по своим тактико-техническим характеристикам, надежности, боевой эффективности и себестоимости.

Успешно проведенные модернизации комплекса «Оса» окрылили не только коллектив разработчиков и трудовые коллективы предприятий, участвовавших в изготовлении комплекса, они укрепили стремление Министерства обороны ежегодно разворачивать пять-шесть полков, вооруженных комплексом «Оса-АК».

В начале 1979 года комплекс «Оса-АК», доработанный для поражения низколетящих и зависающих вертолетов, был предъявлен на совместные испытания, которые прошли успешно. И в том же году комплекс с шифром «Оса-АКМ» принят на вооружение.

В 1976 году за освоение серийного производства боевой машины ЗРК «Оса» и организацию работ по ее модернизации в кратчайшие сроки большая группа рабочих, ИТР, служащих и руководители завода награждены орденами и медалями. Большая заслуга в налаживании серийного производства комплексов «Оса» — Александра Васильевича Воскресенского, возглавлявшего в то время Ижевский электромеханический завод. В 1978 году постановлением ЦК КПСС и Совета министров СССР за организацию серийного производства изделий спецтехники ему была присуждена Государственная премия.

Первые экспортные поставки ЗРК «Оса» были осуществлены в ГДР, Польшу, Болгарию, Венгрию. Обеспечить поставки на экспорт в страны Варшавского договора больших трудностей не представляло. Поставки осуществлялись с эксплуатационными надписями и документацией на русском языке. Более сложные задачи коллективу завода пришлось решать при подготовке к экспортным поставкам в развивающиеся страны, которые осуществлялись в более поздний период. В течение пяти лет была разработана и издана эксплуатационная документация на русском, английском, французском и испанском языках, а также создана система вариантного изготовления боевых машин для эксплуатации в различных климатических условиях.

Через эти испытания прошли не только боевые машины, но и все регулировщики цеха 33. Самые ответственные испытания доставались бригадирам: В.В. Карпову, А.Н. Евчуку, В.Т. Кондратьеву, Н.И. Шатеркину. Не проходили испытания и без ведущих конструкторов: В.Г. Дубовика, С.А. Постнова, В.П. Никонцева, В.А. Пономарева, В.Г. Львова, Н.М. Вылегжанина. Всеми работами специалистов ОКБ со средствами комплекса «Оса» начиная с 1977 года руководил Е.Ф. Мокрушин — заместитель начальника ОКБ. Огромный вклад в создание, разработку и производство зенитно-ракетного комплекса «Оса» внесли Иванов Л. Б., Дмитриев Г.Г., Попов В.А., Пенкин С.В., Рамильцев Б.Н., Ахатов В.А., Набоков Г.Н., Левин С.К., Закурдаев Г.А., Наговицын Г.Ф., Самарин В.А., Безумов Ю.А., Дурыманов В.А., Афанасьева Н.Ф. и многие другие замечательные специалисты. Государственную премию «За освоение и организацию серийного выпуска ЗРК «Оса» присвоили директору ИЭМЗ А.В. Воскресенскому, а также начальнику ОКБ Попову В.А. и регулировщику РЭАиП Братчикову В.Г.

Этому зенитно-ракетному комплексу особое внимание уделял Дмитрий Федорович Устинов, к тому времени министр обороны СССР. Он любил ездить по заводам и всегда брал с собой главных конструкторов. Вениамин Павлович Ефремов не без улыбки вспоминал такой эпизод: «В одну из таких поездок Дмитрий Федорович заглянул в свою «вотчину» — город Ижевск, где посетил несколько оборонных заводов. Решил посмотреть и на «Осу». У директора Ижевского электромеханического завода А.В. Воскресенского состоялось совещание, на котором министр обороны поставил вопрос об увеличении выпуска этого зенитно-ракетного комплекса для Сухопутных войск. Были намечены мероприятия по оказанию помощи заводу в его развитии, приобретении необходимого оборудования, развитии социальной сферы предприятия. После совещания гости и сопровождающие их лица пошли в цех, где им продемонстрировали серийные образцы комплекса «Оса». Я рассказал Дмитрию Федоровичу о комплексе и его достоинствах, заводчане – о технологии производства. Выслушав мой доклад, министр обороны сказал: «Вениамин Павлович, вы разместили на боевой машине четыре ракеты. Необходимо удвоить боекомплект!» Все мои возражения о невозможности размещения, дефиците веса и габаритов на автомобильной базе были жестко отвергнуты: «Это ваша забота. Об исполнении доложите!» По возвращении в Москву я связался с разработчиком ракеты — генеральным конструктором Петром Дмитриевичем Грушиным, рассказал ему о поручении Устинова. Тот выслушал и сказал: «Это серьезно, надо работать». В конце концов, была найдена возможность размещения шести ракет в транспортно-пусковых контейнерах. Боевая машина приобрела элегантный внешний вид. Я позвонил Дмитрию Федоровичу и сказал: «Мы проработали с Грушиным ваше поручение. Восемь не получилось, но хорошо размещается шесть ракет». Он немного подумал и сказал: «Ладно. Как в той русской поговорке: с паршивой овцы хоть шерсти клок». Вопрос был закрыт». За разработку этого комплекса Вениамину Павловичу Ефремову было присвоено звание Героя Социалистического Труда, он был награжден вторым орденом Ленина.

Портрет грозной «Осы»

Зенитно-ракетный комплекс «Оса» предназначен для защиты войск на марше и в подвижных видах боя, а также стратегических наземных объектов от пилотируемых и беспилотных средств воздушного нападения, летящих на малых и средних высотах.

В состав комплекса входит:

• боевая машина (БМ) 9А33БМ4;
• транспортно-заряжающая машина 9Т217БМ2 на 12 ракет;
• зенитная управляемая ракета 9М33М3;
• машина автоматизированной контрольно-испытательной подвижной станции 9В242-1;
• юстировочная машина 9В914Н;
• машина технического обслуживания 9В21ОН;
• комплект наземного оборудования 9Ф16М2.

Все боевые средства комплекса вошли в состав одной боевой машины ЗРК «Оса-АКМ» на самоходной колесной базе. Боевая машина ЗРК «Оса-АКМ» автономна и может самостоятельно обнаруживать, опознавать и обстреливать воздушные цели в любой погодной и боевой обстановке. Наиболее опасные цели могут быть обстреляны одновременно двумя ракетами.

В состав боевой машины входят пусковая установка 9П35М2, радиолокационные станции обнаружения (СОЦ) и сопровождения цели (ССЦ), система наземного радиозапросчика (НРЗ), двухканальные радиолокационные станции визирования ракет (СВР) и передачи команд (СПК), телевизионно-оптический визир. Для поиска и опознавания цели на ходу платформа, на которой расположены антенны СОЦ и НРЗ, стабилизирована относительно горизонта.

В качестве базы комплекса «Оса-АКМ» используется плавающее шасси БАЗ-5937 высокой проходимости (колесная формула 6х6). На нем установлен быстроходный дизельный двигатель БД20К300 мощностью 200,6 кВт (300 л.с.). Трансмиссия выполнена по бортовой схеме. Широкопрофильные шины имеют устройство регулирования давления. Максимальная скорость по шоссе до 80 км/ч. Движение на плаву со скоростью до 8 км/ч обеспечивают два водометных двигателя.

Система навигации, топопривязки и ориентирования комплекса автоматически определяет координаты боевой машины и осуществляет прокладку курса ее движения, а также производит взаимную привязку с другими войсковыми средствами с точностью, необходимой для обмена информацией о воздушной обстановке. Для поддержания боеготовности и достоверной оценки состояния аппаратуры комплекса «Оса-АКМ» имеется автоматическая система встроенного функционального контроля. Электропитание аппаратуры на ходу осуществляется от газотурбинного агрегата 9И120, а на стоянке — от генератора отбора мощности, работающего от ходового двигателя. Предусмотрена защита экипажа от средств массового поражения ТЗМ 9Т217БМ2 размещается на аналогичном колесном шасси.

В связи с переходом на выпуск более совершенных средств ПВО, предприятие с 1990 года не производит комплекс, однако, учитывая интересы потребителей и большой парк изделий, находящихся в эксплуатации, оказывает полный комплекс сервисных , в том числе по капитальному ремонту и модернизации находящейся в эксплуатации техники. Почти за 20 лет работы было выпущено 1791 изделие. 506 зенитно-ракетных комплексов «Оса» находятся на вооружении около 15-и стран мира. Есть они в Польше, Болгарии, Чехии, Словакии, Ливии, Алжире, Иордании и ряде других стран. В Российской армии ЗРК «Оса» стоит на вооружении ПВО Сухопутных войск, кроме того, есть дивизионы «Ос» в полках морской пехоты.

Боевое применение ЗРК «Оса»

Впервые комплекс был использован в боевых действиях в Ливане при отражении воздушных ударов израильских ВВС по сирийским войскам при этом было сбито несколько самолетов. Для борьбы с «Осой» стали использоваться самые различные приемы снижения его боеспособности. Кроме радиоэлектронного подавления, на позиции ЗРК запускались беспилотные летательные аппараты, имитирующие действия боевых самолетов. После того как был израсходован запас ЗУР, по позициям комплексов наносила удар израильская авиация. Так, в одном из боев в результате такой атаки были уничтожены три сирийских ЗРК «Оса», но четвертый смог уничтожить израильский самолет РР-4Е.

«Оса» неоднократно использовалась в боевых действиях в Анголе против ВВС Южной Африки. Так, в период 1987-1988 гг. подразделением ЗРК «Оса» были сбиты два ДПЛА и один самолет. ЗРК использовались Ливией при отражении воздушных ударов американских самолетов в апреле 1986 г.

При подготовке операции «Буря в пустыне» военные специалисты США рассматривали комплекс как одно из самых эффективных средств ПВО Ирака. Поэтому накануне самой операции подразделения спецназа многонациональных сил захватили на территории Кувейта ЗРК «Оса» вместе с расчетом и технической документацией с целью изучения и организации эффективной борьбы с ним. В ходе начавшихся боевых действий эти ЗРК стали одними из первоочередных объектов для подавления различными средствами. Однако и в такой сложной обстановке при массированном огневом и радиоэлектронном противодействии ЗРК «Оса» показал себя одним из наиболее эффективных средств ПВО, особенно в борьбе с крылатыми ракетами «Томагавк». В 1991 году во время операции «Буря в пустыне» ЗРК «Оса» сбил американскую крылатую ракету. Комплекс был настолько хорош, что спецподразделение многонациональных сил, проведя спецоперацию, проникло на территорию Кувейта и похитило его вместе с техдокументацией и иранским боевым расчётом, для дальнейшего изучения и выработки мер борьбы с ним.

Снова в строю.

Средства комплекса постоянно совершенствуются в интересах повышения эффективности обороны и снижения затрат на эксплуатацию и обеспечение боевой работы. Данные направления модернизации на протяжении последних лет широко представляются на международных выставках вооружений и военной техники. В 2015 году на международном авиасалоне «МАКС-2015» был представлен модернизированный вариант ЗРК – комплекс «Оса-АКМ1».

«Действительно, «Ос» в войсках много. И — да, конечно же, «Торы», в особенности новейших модификаций, значительно превосходят «Осу». Но говорить о том, что ЗРК «Оса» устарел, на мой взгляд, преждевременно, – сообщил журналу «Арсенал Отечества» Генеральный директор АО ИЭМЗ «Купол» Фанил Газисович Зиятдинов — Не будем забывать, что боевые машины ЗРК «Оса» также модернизируются. Их возможности растут. По сравнению с базовой моделью у модернизированной «Осы» заметно увеличена помехозащищенность, введены оптико-электронная система с тепловизионным каналом, спутниковая навигационная система. За счёт внедрения цифровой обработки сигналов, новых методов наведения, автоматизации работы боевого расчета удалось увеличить максимальную скорость поражаемых целей с 500 м/с до 700 м/с и, одновременно, решить задачу поражения малоразмерных тихоходных целей типа беспилотных летательных аппаратов. Сегодня можно говорить о том, что проведение капремонта и модернизации используемых комплексов «Оса» позволяет продлить их жизненный цикл ещё как минимум на 10 лет».

Обслуживание и модернизацию поставленной на вооружение ЗРК «Оса» можно производить на базе сервисно-технических центров, для которых была разработана техническая документация. Модернизации подлежит элементная база и электрические цепи комплекса. Обновленный ЗРК «Оса-АКМ1» получит помехоустойчивую аппаратуру, новую оптико-электронную систему с ИК-каналом и спутниковую систему связи и навигации ГЛОНАСС. Также модернизацию пройдет и система радиоуправления ЗУР 9М33М3.

Основная причина такого долголетия состоит в том, что, создавая «Осу» в 70-80-е годы прошлого столетия, гениальные конструкторы заложили в эту машину большой модернизационный потенциал, который не исчерпал себя и сегодня. И установка на пьедестале одного из самых уникальных изделий, освоенных Ижевским электромеханическим заводом, – это дань уважения послевоенному поколению, которое самоотверженным трудом создавало самые современные образцы оружия во имя укрепления обороноспособности нашей Родины, во имя мира и созидания.

Алексей Леонков
LikeLikeTweet

Серийное производство ЗРК «Оса»

Серийное производство зенитно-ракетного комплекса «Оса» было развёрнуто на 2-х предприятиях:

• Сама боевая машина производилась на Ижевском электромеханическом заводе;
• Зенитные управляемые ракеты производились на Кировском машиностроительном заводе.

До 1975 года «Оса» производилась без существенных модернизаций.

В 1975 году на вооружение Сухопутных войск СССР был принят модернизированный зенитно-ракетный комплекс «Оса-АК». Модернизация ЗРК «Оса» заключалась в следующих изменениях:

• Появилось 6 зенитных управляемых ракет модификации 9М33М2, вместо 4-х 9М33 у базовой модификации;
• Зона поражения у модернизированного комплекса тоже была увеличена. Теперь комплекс мог сбивать самолеты, скорость которых равнялась 500м/С, вместо 420 М/С у базовой модели;
• Радиоэлектронная аппаратура (большая часть её) была размещена на новой элементной базе. Это нововведение позволило уменьшить массу комплекса, снизить энергопотребление и повысить общую надёжность;
• Ракеты получили взрыватели новой конструкции, которые позволили уменьшить минимальную высоту поражения воздушных целей комплексом с 50 до 25 метров.

В целом, модернизированный зенитно-ракетный комплекс значительно превосходил по базовым характеристикам предыдущую модель.

Что входит в состав комплекса?

В состав комплекса входит:

• боевая машина 9А33Б со средствами разведки, наведения и пуска, с четырьмя зенитными управляемыми ракетами 9М33,
• транспортно-заряжающая машина 9Т217Б с восемью ЗУР,
• средства контроля и технического обслуживания.

Помимо этого, в состав боевой машины входят:

Модификация ЗРК «Оса-АКМ»

Следующая модернизации зенитно-ракетного комплекса получила название «Оса-АКМ». Данная модификация была принята на вооружение в 1980 году. Основным отличием модификации «АКМ» были повышенные возможности для борьбы с военными вертолётами. Так как, начиная с конца 1970-х годов военные вертолёты стали массово оснащаться противотанковыми ракетами, комплекс пришлось дорабатывать в соответствии с этими нюансами.

ЗРК «Оса-АКМ» мог вести эффективный огонь не только по движущимся, но и по «зависшим» в воздухе целям. Ракеты комплекса получили модернизированный взрыватель, после установки которого цели можно было поражать практически на нулевых высотах. При этом расстояние до цели не должно было быть менее 2 км. Максимальная дальность поражения составляла до 6,5 км.

Зенитный ракетный комплекс «Оса» — уничтожитель воздушных объектов на малых дистанциях

Зенитный ракетный комплекс (ЗРК) «Оса» является автоматизированным средством ПВО, предназначенным для отражения воздушных угроз на малых дальностях. Его тактико-технические характеристики способны обеспечить прикрытие от воздушных ударов танковой или мотострелковой дивизии. Ракетный комплекс может действовать как в процессе боя, так и на марше.

Создание ЗРК «Оса» в 60-х годах 20 века было обусловлено тем, что авиация, избегая огня зенитных управляемых ракет, старалась атаковать на сверхмалых высотах. В связи с этим ЗРК, которые существовали в те годы, оказались практически бесполезными. Хотя их ТТХ прекрасно подходили для борьбы с высоколетящими целями, для низколетящих целей они практически не представляли опасности.

Так как новая тактика нападения авиации распространилась по всему миру, военные ведомства многих развитых стран пытались решить задачи по проектированию новых зенитно-ракетных комплексов, которые могли бы эффективно бороться именно с низколетящими целями. Технический уровень развития даже такого мощного государства, как США, не позволял создать ЗРК, который мог бы эффективно бороться с низколетящими целями, но советские конструкторы в очередной раз совершили резкий рывок вперёд в гонке вооружений.

Модификации Оса, произведённые в других странах

Кроме вышеперечисленных модификаций, существует ещё несколько модификаций ЗРК «Оса» которые были произведены в Белоруссии и Польше.

«Оса-1Т» – это модернизированный комплекс, который был произведён в Республике Беларусь. Работы по модернизации базового комплекса были начаты в 2001 году. После того как комплекс был доработан, он был продемонстрирован в Минске и польском Кельце. В отличие от базового комплекса он обладает следующими доработками:

• Защита комплекса от помех была модернизирована, возрос радиус её действия;
• Появилась современная оптико-электронная система, основной задачей которой является сопровождение цели. Данная система сконструирована таким образом, что может функционировать в условиях полного радиоэлектронного подавления;
• Система наведения нового комплекса даёт возможность ракетам поражать цели, летящие на высоте до 7 км. Расстояние до цели может составлять до 12 км;
• Модернизированный комплекс способен поражать цели, летящие со скоростью до 700 м/с.

Общий ресурс и ремонтопригодность зенитно-ракетного комплекса были значительно увеличены.

Следующая модернизированная машина, произведённая на базе ЗРК – это Т-38 «Стилет». Она тоже производится в Белоруссии. Самым главным отличием данной модернизации является наличие двухступенчатой ракеты Т-382. Если возникнут проблемы с производством двухступенчатых ракет, комплекс может успешно пользоваться ракетами 9М33М3, которые используются в комплексе «Оса-АКМ».

Ещё одной модернизацией является польская ЗРК SA-8 Sting. Она практически ни чем не отличается от белорусской «Оса-1Т». Здесь явно прослеживается совместная с Белоруссией разработка.

Боевое использование и эксплуатация

ЗРК «Оса» состоял не только на вооружении советской армии, но и активно поставлялся на экспорт. Им были вооружены многочисленные союзники СССР в разных регионах планеты: страны Варшавского договора, Индия, Ирак, Ливия, Сирия и другие. Несмотря на то что серийное производство «Осы» уже давно прекращено, этот комплекс до сих пор стоит на вооружении сухопутных сил России, Украины, Белоруси, Польши, Сирии и других стран. Вскоре после распада СССР 18 ЗРК «Оса» были проданы Греции, которая стала первой страной НАТО, взявшей его на вооружение.

Боевое крещение комплекса состоялось в начале 80-х годов на Ближнем Востоке. Сирийцы активно использовали «Осы» для противодействия израильской авиации. В 1982 году сирийская ПВО и военно-воздушные силы, практически полностью укомплектованные советской техникой, были наголову разбиты израильтянами (операция «Медведка 19»). Несмотря на это, «Оса» показал себя на этом сложном театре боевых действий, как весьма эффективное и надежное оружие. Даже если РЛС комплекса была подавлена помехами, наличие оптического канала наведения позволяло обнаруживать и сопровождать цели. Сирийским (или советским) зенитчикам удалось сбить большое количество израильских БПЛА и истребитель-бомбардировщик F-4E.

Следующим конфликтом, в котором участвовал ЗРК «Оса», стала гражданская война в Анголе. В ходе боевых действий комплексу удалось сбить два беспилотных аппарата и один самолет-разведчик.

Во время первой кампании в Персидском заливе американцы уделяли огромное внимание нейтрализации ЗРК «Оса», которые находились на вооружении армии Саддама. Они считали этот комплекс одним из наиболее боеспособных элементов системы ПВО Ирака, особенно опасным для крылатых ракет. Чтобы поближе познакомиться с советским оружием, американский спецназ предпринял дерзкий рейд, во время которого один из комплексов был захвачен и вывезен из страны вместе с документацией и пленными зенитчиками.

ЗРК «Оса» использовались обеими сторонами во время российско-грузинской войны 2008 года. Российской армии удалось захватить пять боевых машин в качестве трофеев.

Несмотря на то что ЗРК «Оса» тяжело назвать современным видом вооружения, он продолжает активно эксплуатироваться. За многие десятилетия службы этот комплекс противовоздушной обороны зарекомендовал себя, как оружие, способное выполнять свои задачи в самых сложных условиях.

В последние годы было разработано несколько вариантов модернизации ЗРК «Оса». В 2003 году была представлена белорусская модификация комплекса под названием «Оса-1Т». Радиоэлектронное оборудование комплекса было переведено на современную элементарную базу, что уменьшило его габариты, повысило надежность и помехозащищенность. Белорусам удалось значительно повысить боевые качества ЗРК, особенно его способность работать по высокоскоростным и маневренным целям. По словам разработчиков, ЗРК «Оса-1Т» может эффективно поражать малозаметные цели, выполненные с использованием технологий «стелс».

В 2011 году начались испытания ЗРК «Стилет» — совместной разработки Украины и Белоруси, созданной на основе комплекса советского «Оса».

В 2003 году широкой общественности был представлен SA-8 Sting – вариант модернизации комплекса «Оса», разработанный польскими специалистами.

Тактико-технические характеристики ЗРК «Оса»

Основные ТТХ зенитно-ракетного комплекса «Оса» (базовой модели) имеют следующие характеристики:

• По классификации – это зенитно-ракетный комплекс;
• Его боевая масса составляет 18 000 кг;
• Экипаж включает в себя 5 человек;
• Длина корпуса комплекса составляет 9 140мм;
• Высота комплекса с опущенным радаром составляет 4 200 мм;
• Ширина корпуса составляет 2 750 мм;
• Диапазон дальности стрельбы составляет от 1 500 до 10 000 метров;
• В качестве вооружения комплекс располагает четырьмя управляемыми ракетами 9М33;
• Двигатель комплекса имеет мощность в 300 л/с. Он может развивать максимальную скорость по шоссе до 70 км/ч, и до 35 км/ч по бездорожью. Кроме того, комплекс способен передвигаться вплавь со скоростью до 10 км/ч.

Колёсная формула 6х6 позволяет комплексу без проблем передвигаться в условиях полного отсутствия дорог.

Зенитно-ракетный комплекс «Оса» и его модификации до сих пор состоят на вооружении Сухопутных войск России и ряда других стран. Хотя современные ЗРК во многом превосходят «Осу», армия не спешит полностью от них отказываться.

Боевое применение

• Боевые действия на юге Ливана в начале 1980-х годов (на стороне Сирии).
• Осенью 1981 года бойцами Полисарио (Западная Сахара) были сбиты воздушный командный пост и истребитель Марокко.
• Вооруженный конфликт в Анголе (1987-1988).
• Захват и вывоз ЗРК с территории Кувейта спецподразделением США перед операцией «Буря в пустыне».
• Боевые действия в Кувейте (со стороны Ирака).
• Вооруженный конфликт в Южной Осетии (со стороны Грузии и РФ).
• Ирано-Ираксий конфликт (со стороны Ирака).
• Гражданская война в Сирии (со стороны Национальной коалиции сирийских революционных и оппозиционных сил).

Образцы

Образцы

Новости

Политика и общество

Техника и вооружение

Силовые структуры

Сотрудничество

Наука и производство

Диверсификация предприятий ОПК

Выставки и конференции

Безопасность

Гражданская авиация

Космос

Оружие мира

История

Мнения

Политика и общество

Техника и вооружение

Силовые структуры

Сотрудничество

Наука и производство

Безопасность

Оружие мира

История

Мероприятия

MILEX — 2023

Календарь мероприятий

Архив мероприятий

Блоги

Политика и общество

Техника и вооружение

Силовые структуры

Сотрудничество

Наука и производство

Безопасность

Оружие мира

История

Вооружение

О проекте

Образцы

Участники

Добавить компанию

Каталоги ОДКБ

О проекте

Вооружение и военная техника вооруженных сил

Вооружение и техника полиции и антитеррористических служб том2

Наземные средства сил общего назначения

Изданные каталоги

Видео

Галерея

Фоторепортаж

Вооружение и военная техника

Космос

Гражданская техника

Соревнования

Учения и спецмероприятия

Мероприятия

Инфографика

Агентство

Об агентстве

Персоналии

Руководство

Продукты и услуги

Наши партнеры

Контактная информация

Условия использования фотографий

Баннеры и логотипы

Форум НСБ «Безопасная столица»

18 — 20 октября 2022 года, г. Москва

INTERPOLITEX — 2022

18 — 20 октября 2022 года, Россия, г. Москва

«Новые технологии ОПК в тушении лесных пожаров»

18 — 20 октября 2022 года, г. Москва

ИНТЕРПОЛИТЕХ: «ОХРАНА и БЕЗОПАСНОСТЬ»

Блоги

Александр Храмчихин

Китайская бронетехника выходит на мировой уровень

Усердный подражатель догоняет учителей

Евгений Ясаков

Онлайн-регистрация посетителей выставки «Интерполитех – 2022»

XXVI Международная выставка средств обеспечения безопасности государства «Интерполитех-2022» состоится в период с 18 по …

Виктор Литовкин

Из-за США мир может скатиться к риску реальной войны

Россия вывела объекты из-под ДСНВ из-за невозможности инспекций

Виктор Мураховский

Численность российской армии будет увеличена на 137 000 человек

В ее число могут войти добровольцы «именных» батальонов

Видео дня

Военная приемка. Ядерный главк

Фоторепортаж

Территория вдохновения

Интервью

Постпред РФ при ООН Василий Небензя: попытки изолировать Россию провалились

Политика и общество

Алексей Сазанов: потерю налоговых доходов мы сейчас точно не можем себе позволить

«Пионер-М» пришел в Севастополь

Игорь Краснов: у нас достаточно полномочий для защиты российских и зарубежных инвесторов

Илья Торосов: компаниям в России пора адаптироваться к текущей ситуации

Все материалы

Техника и вооружение

Специалисты Севмаша разработали специальный метод сварки труб

Разработка самолёта CR929 началась практически заново

Офшорный вертолет Ростеха совершил первый междугородный перелет

Холдинг «Росэлектроника» разработал уникальный мобильный комплекс для поиска угнанных автомобилей

Все материалы

Силовые структуры

АПЛ «Омск» и «Новосибирск» в Чукотском море выпустили ракеты по кораблям «противника»

Силы Балтийского флота вышли в море для испытания двух подлодок

Севмаш отобрал команду для VII корпоративного чемпионата профмастерства

Отряд кораблей Северного флота РФ отправился в арктический поход

Все материалы

Сотрудничество

В «Калашникове» заявили, что проект строительства завода в Венесуэле не заморожен

Постпред РФ при ООН Василий Небензя: попытки изолировать Россию провалились

Совместное предприятие России и Индии по производству автоматов АК-203 начало работу

Электробус «КАМАЗ» тестируется в Волгограде

Все материалы

Наука и производство

В Производственно-учебном центре Ростеха в Уфе получают профессию более 1000 человек

Фандоматы «РТ-Инвест» в Подмосковье собрали за год два миллиона банок и бутылок

Газовые турбины ОДК укрепят импортонезависимость газопровода «Сила Сибири»

Петрозаводскмаш приступил к отгрузке ёмкостей системы безопасности для АЭС «Руппур»

Все материалы

Диверсификация предприятий ОПК

Новикомбанк наращивает поддержку проектов по диверсификации

Объем производства концерна «Калашников» с начала 2022 года вырос в среднем на 15%

Красные «муравьи» из Коврова покорили туляков

Завод «Штамп» запустил новое производство каркасов кабин для спецтехники

Все материалы

Выставки и конференции

Открыта регистрация посетителей выставки «Интерполитех – 2022»

Новейшие разработки в сфере робототехники и искусственного интеллекта

ЦИФРОВАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ПРОИЗВОДСТВА КАК ОСНОВА СУВЕРЕНИТЕТА ТЕХНОЛОГИЙ

Добро пожаловать на форум квантовых технологий «КВАНТОТЕХ»

Все материалы

Безопасность

Ростех выпустил приложение для IP-телефонии и чатов на мобильных устройствах на «Авроре»

Александр Ефремов: в России будет оставаться больше рыбы

Михаил Лобоцкий: причина всех утечек в низком уровне оценки рисков в компаниях

ВКС России уничтожили лидера незаконного формирования «Катиба Таухид валь-Джихад» в Сирии

Все материалы

Гражданская авиация

Специалисты СибНИА провели частотные испытания самолёта МС-21

Корпорация «Иркут», авиакомпания «Аврора» и ГТЛК определили условия поставки SSJ-NEW

Аэрофлот и ОАК подписали соглашение о поставке 339 самолетов в ближайшие 7 лет

Ростех передал для «Газпромавиа» два вертолета Ми-8АМТ

Все материалы

Космос

Новый портал Роскосмоса расскажет о видимых из космоса изменениях в России и мире

Разработки Ростеха применены в иранском спутнике «Хайям»

РКС создают новое поколение сканирующих устройств для спутников серии «Метеор»

Владимир Кошлаков: Россия опередила всех в космической ядерной энергетике

Все материалы

Оружие мира

Армия Таиланда может принять на вооружение российские машины спецназа

Россия исполняет контракт на поставку в Уганду боевых вертолетов Ми-28НЭ

В Северном флоте РФ сообщили, что ответят на возрастание военной активности НАТО в Арктике

Россия усилит группировку войск на финской границе

Все материалы

История

В Тверской области открылась экспедиция «Ржев. Калининский фронт»

У Ржевского мемориала дан старт Слету часовых Постов Памяти Тверской области

Максим Ксензов: качественных военно-патриотических фильмов должно быть как можно больше

ЦАГИ – полёТу: самолет для рекордов дальности – АНТ-25

Все материалы

Выставки по безопасности

XXVI Международная выставка средств обеспечения безопасности государства «INTERPOLITEX — 2022»

Форум негосударственной сферы безопасности «Безопасная столица»

2-й Международный форум цифровой трансформации безопасности государства «ЦИФРОТЕХ»

Say Future: Moscow

Международный форум «МАШИНОСТРОЕНИЕ: СТРАТЕГИИ И ТЕХНОЛОГИИ»

Форум «Квантотех»

Третья научно-практическая конференция «Новые технологии оборонно-промышленного комплекса в тушении лесных пожаров»

Государственные органы Государственные компании Организации СМИ

МВД России

ФСБ России

МЧС России

ФСВТС России

Минобороны России

ФГУП «Рособоронэкспорт»

Голицынский пограничный институт

Ростехнологии

ФКУ «НПО «СТиС» МВД России

Союз машиностроителей

ООО «ОВК» БИЗОН»

ФГБУ «Связист»

РИА Новости

Хранитель, журнал

Национальный авиационный журнал «Крылья Родины»

ИА «Росинформбюро»

Независимая газета

Журнал RUБЕЖ

ИТАР-ТАСС

Интернет-портал по безопасности SECANDSAFE. RU

«На Страже Родины.ru». Правда о войне!

Трансивер.ру

ООО «Издательство «Безопасность труда и жизни»

Вооружен.рф

Ohrana.ru

Специализированный журнал «Безопасность»

Журнал «Мир и безопасность»

Журнал «Точка опоры»

Журнал «Новый оборонный заказ. Стратегии»

Аналитическое издание «Советник президента»

«Наука и техника» — журнал для молодежи

Издательский дом «Бедретдинов и Ко»

Военно-промышленный курьер

Ракетная техника

Журнал «Арсенал Отечества»

Новостной портал History News

Журнал «Частный охранник»

Общественная организация «Безопасное отечество»

Интернет-портал «Командир роты»

Журнал «Международная жизнь»

Журнал «Мир безопасности»

Информационный портал Оборона. Ру

ТК «Оружие»

Журнал «Национальная оборона»

Телеканал «Звезда»

Центр анализа мировой торговли оружием

Авиационно-космический журнал «Авиапанорама»

Российское информационное агентство «Ветеранские вести»

Новости

Мнения

Мероприятия

Блоги

Вооружение

Каталоги ОДКБ

Видео

Галерея

Агентство

Зенитный Ракетный Комплекс ЗРК Оса, Технические Характеристики ТТХ, Модернизация ПВО АК и АКМ

История создания

27 июля 1960 года в соответствии с постановлением Совета министров СССР № 1157—487 была начата разработка ЗРК под кодовым именем «Оса» (на стадии проработки требований проект носил название «Эллипсоид»). Работы велись тяжело, с постоянными срывами сроков. В результате к 1962 году разработка практически не вышла из стадии лабораторной экспериментальной отработки.

Головным разработчиком всего комплекса в целом был НИИ-20 ГКРЭ. Главным конструктором был назначен М. М. Косичкин. За создание ЗУР отвечал Тушинский машиностроительный завод во главе с А. В. Потопаловым. Пусковую установку разрабатывало КБ компрессорного машиностроения ГКАТ.

Наиболее сложной частью разработки являлось создание ЗУР. С поставленными сроками разработки Тушинский машиностроительный завод не справился. Поэтому 7 сентября 1964 года постановлением ЦК КПСС и СМ СССР разработчиком ЗУР было назначено ОКБ-2, а главным конструктором по направлению П. Д. Грушин.

В качестве нового срока предъявления ЗРК на испытания был установлен второй квартал 1970 года. Кроме того, новым главным конструктором «Осы» был назначен В. П. Ефремов, а его заместителем являлся И. М. Дризе. Разработка колёсного шасси для ЗРК «Оса» была поручена Брянскому автомобильному заводу.

В марте-июне 1970 года ЗРК «Оса» прошёл испытания, а с июля 1970 по февраль 1971 года проводились совместные испытания. После испытаний и отработки документации 4 октября 1971 года постановлением ЦК КПСС и СМ СССР комплекс был принят на вооружение.

Фото ЗРК ОСА-АКМ

Похожее

ЗРК С-75 Двина, Десна, Волхов. Состав. Ракеты. Далность поражения

ЗРК С-350Е Витязь. Состав. Ракеты. Дальность поражения

ЗРПК Панцирь-С1. Вооружение. Стоимость. Дальность обнаружения

ЗСУ-23-4 Шилка. Скорострельность. Вооружение. Размеры. Вес

ЗРК 2К12 КУБ. Дальность поражения. Скорость ракеты. Принцип работы

ЗСУ 2С6М Тунгуска-М. Дальность поражения. Ракеты. Состав. Размеры

ЗРК ОСА-АКМ. Дальность стрельбы. Ракеты. Состав. Размеры. Вес

ЗРК С-200 Ангара, Вега, Дубна. Дальность поражения. Состав. Принцип работы

ЗРК Бук-М1-2. Дальность обнаружения и поражения. Ракеты. Возможности

ПЗРК Верба. Дальность поражения. Ракета. Состав комплекса

ЗРК С-400 Триумф. Дальность поражения. Ракеты. Как работает

ЗРК С-300ПМУ2 Фаворит. Дальность поражения. Состав. Ракеты

ЗРК 9К331 Тор-М1. Дальность поражения. Ракета. Принцип работы

ПЗРК 9К310 Игла-1. Дальность поражения. Вес. Возможности

ЗРК С-125 Нева (Печора) Дальность и высота поражения. Ракеты

ЗРК Сосна. Вооружение. Дальность поражения. Ракеты. Состав

ЗРК 9К35 Стрела-10. Дальность поражения. Модификации. Ракеты

ЗРК С-25 Беркут. Дальность и высота поражения. Ракеты

Морской ЗРК Кинжал. Дальность поражения. Состав. Ракеты. На каких кораблях устанавливается

ЗРК 2К11 Круг. Дальность поражения. Модификации. Состав

Американский ЗРК Пэтриот. Дальность поражения. Состав. Ракеты

Зенитная установка ЗСУ-57-2. Вооружение. Размеры. Бронирование

КТПУ «Гибка» (3М-47) Дальность поражения. Ракеты. Принцип работы

ПЗРК 9К34 “Стрела-3”

«Оса-М» – корабельный зенитный ракетный комплекс

С-300В (9К81) – зенитно-ракетная система

9С482М7 (ПУ-12М7) – батарейный подвижной пункт управления

ЗРК «Авенджер» – американский мобильный зенитно-ракетный комплекс

FIM-92А Стингер – американский ПЗРК

ПЗРК 9К32 “Стрела-2”

МД-ПС – зенитно-ракетный комплекс

ЗРК М-1 «Волна» (4К90) – зенитно-ракетный комплекс корабельного базирования

ЗСУ-37 – зенитная самоходная установка

You have no rights to post comments

6.

Модификации

• 9К33М2 «Оса-АК» (1975) – модернизация 9К33М2. Введены следующие усовершенствования: новая элементная база, увеличилась надежность работы, зона поражения целей по высоте, дальности и параметру, поражает и обстреливает цели на догонных курсах со скоростью движения до 300 м/с. Ракеты располагаются в ТПК, кроме этого усовершенствован их радиовзрыватель и увеличена радиационная защита. Также возросла защищенность от радиоэлектронных помех и усовершенствованы условия автосопровождения целей в пассивных помехах. Поменялась структура счетно-решающего прибора, он стал способен наводить ракеты на цель, маневрирующую с перегрузкой до восьми единиц и перемещающуюся со скоростью до 500 м/с.
• 9К33М3 «Оса-АКМ» — модификация, способная вести борьбу с вертолетами и самолетами при прикрытии войск во всех возможных боевых действиях и при радиоэлектронном активном противодействии. Работы по модернизации стартовали осенью 1975 года. Приемо-сдаточные испытания осуществились в 1977 году, а государственные – еще через два года. В 1980 году модификация поступила на вооружение. Главные изменения следующие: произошла доработка радиовзрывателя, увеличилась территория поражения, надежность функционирования боевой машины и защита от помех. Стала меньше возможность срабатывания радиовзрывателя от земли и больше – точность наведения ракеты. Также возросла разрешающая способность индикатора кругового обзора по дальности и азимуту, плотность потока осколков и возможность коррекции зоны срабатывания радиовзрывателя. Комплекс стал способен обстреливать цели, маневрирующие с перегрузкой до восьми единиц и передвигающихся со скоростью до 500 м/с.
• 9К33-1Т «Оса-1Т»- модерницация 9К33, произведенная в Белоруссии. Работы по ней стартовали в 2001 году. Впервые продемонстрирована в Минске и Кельце (Польша). Главные изменения следующие: увеличена защита от помех, введена оптико-электронная система, предназначенная для сопровождения цели и повышающая живучесть комплекса при использовании противником радиоэлектронного полного подавления и противорадиолокационных ракет. Улучшенная система наведения на ракетах дает возможность поражать летательные аппараты на высотах до 7 км и расстояниях до 12 км, со скоростями до 700 м/с. Возросла надежность из-за перевода 80% аппаратуры на новую элементную базу. Уменьшена номенклатура запчастей и время техобслуживания. Увеличен ресурс аппаратуры. Также увеличена автоматизация боевой работы.
• T38 «Стилет» произведен в Белоруссии. В его состав входят: двухступенчатая ракета Т382, БМ Т381, юстировочная машина Т384, ТЗМ Т383, АКИПС Т386, машина техобслуживания Т385 и комплект наземного оборудования Т387. Возможно применение ракеты 9M33M3 комплекса «Оса-АКМ».
• SA-8 Sting – модернизация, произведенная в Польше. Работы по ней стартовали в 2001 году заводом вооружения № 2 в городе Грудзендз. Впервые продемонстрирована в Минске и в Кельце (Польша).

Примечания

1.  (рус.)  (неопр.) ?. army-news.ru. Дата обращения 10 декабря 2017.
2. . rbase.new-factoria.ru. Дата обращения 10 декабря 2017.
3. . vpk.name. Дата обращения 10 декабря 2017.
4. saidpvo. . Блог “Вестника ПВО” (15 февраля 2012). Дата обращения 10 декабря 2017.
5.  (рус.)  (неопр.) ?. army-news.ru. Дата обращения 10 декабря 2017.
6. . vpk.name. Дата обращения 10 декабря 2017.
7. 2017-04-12 12:28:00 Graf_kankrin Graf_kankrin 2017-04-12 12:28:00 Graf_kankrinwrote. . Дата обращения 10 декабря 2017.
8. stomaster. . С интернетом по жизни (12 сентября 2011). Дата обращения 10 декабря 2017.
9. sda1979. . sda1979 (16 июля 2014). Дата обращения 10 декабря 2017.
10. . interpolit.ru. Дата обращения 10 декабря 2017.
11. ↑
12. ↑  (недоступная ссылка). Дата обращения 12 октября 2010.
13. ↑
14. ↑
15. Имитаторы воздушных целей ИВЦ-М2 имитируют современные малоразмерные средства воздушного нападения в радиолокационном диапазоне длин волн 2-4 см, оптическом и тепловом диапазонах
16. ↑
17. The Military Balance 2016.  — P. 190.
18. The Military Balance 2016. — P. 194.
19. The Military Balance 2016. — P. 180.
20. The Military Balance 2016. — P. 320.
21. The Military Balance 2012. — P. 317.
22. The Military Balance 2016. — P. 430.
23. Azərbaycan Respublikası Müdafiə Nazirliyi. (15 мая 2017). Дата обращения 17 мая 2017.
24. The Military Balance 2016. — P. 178.
25. The Military Balance 2016. — P. 183.
26. The Military Balance 2016. — P. 82.
27. The Military Balance 2016. — P. 104.
28. The Military Balance 2016. — P. 184.
29. The Military Balance 2016. — P. 252.
30. The Military Balance 2016. — P. 254.
31. The Military Balance 2016. — P. 337.
32. The Military Balance 2016. — P. 393.
33. The Military Balance 2016. — P. 127.
34. The Military Balance 2016. — P. 354.
35. The Military Balance 2016. — P. 203.
36. The Military Balance 2016. — P. 205.
37. The Military Balance 2016. — P. 397.
38. The Military Balance 2012.  — P. 338.
39. ↑ ВАСИЛИИ Н. Я., ГУРИНОВИЧ А. Л. ЗЕНИТНЫЕ РАКЕТНЫЕ КОМПЛЕКСЫ. Справочное издание. стр. 174—182
40. ↑
41. . function.mil.ru. Дата обращения 15 апреля 2018.
42. . ИТАР ТАСС. Дата обращения 15 апреля 2018.

«Оса-М» – корабельный зенитный ракетный комплекс

Сторожевые корабли советской постройки вооружены зенитным ракетным комплексом «Оса-М». Разработка этого комплекса осуществлялась с 1960 г., испытания проводились в 1967 г., на вооружение ВМФ СССР он был принят в 1971 г. В состав комплекса входят зенитная управляемая ракета 9МЗЗ (в системе кодов НАТО имеет обозначение SA-N-4), пусковая установка ЗИФ-122, система управления 4Р-33 и устройство хранения, подачи и заряжания ракет.

Видео корабельного ЗРК “Оса-М”

https://youtube.com/watch?v=mkS3MzsrPC4

Комплекс унифицирован с ЗРК сухопутных войск 9КЗЗ «Оса» по ракете на 100% и по системам управления — на 70%.Твердотопливная зенитная управляемая ракета 9МЗЗ выполнена по аэродинамической схеме «утка». Вес ракеты — 128 кг (вес боевой части — 15 кг), длина — 3158 мм, наибольший диаметр корпуса — 206 мм, размах крыла — 650 мм. Управление ракетой в полете осуществляется двумя парами рулей по радиокомандам от системы управления. В носовой части ракеты расположены аппаратура радиоуправления и радиовизирования, автопилот, радиовзрыватель, бортовой источник электропитания и боевая часть с предохранительно-исполнительным механизмом. В хвостовой части находятся двухрежимный твердотопливный двигатель, антенны командного радиоблока и бортового ответчика, а также трассеры для сопровождения ракеты с помощью телевизионно-оптического визира.

Особенностью системы управления и ее антенного поста является то, что в их состав входит не только РЛС наведения ракеты, но и небольшая РЛС кругового обзора для обнаружения воздушных целей в ближней зоне. Благодаря этому ЗРК не требует целеуказания от РЛС общего обнаружения, хотя такая возможность не исключается. Таким образом, вследствие совмещения режимов обнаружения и захвата цели на сопровождение в одной системе удалось сократить время реакции комплекса на 6-8 секунд. Комплекс «Оса-М» оснащен двухбалочной наводящейся пусковой установкой ЗИФ-122 с устройством хранения, подачи и заряжания, рассчитанным на 20 ракет. Конструкция пусковой установки весьма необычна и не повторяется больше ни в одном зенитном ракетном комплексе.

Тактико-технические характеристик ЗРК “Оса-М”

Длина ракеты, м	3,158
Диаметр, м	0,206
Размах крыла, м	0,650
Масса ракеты, кг	128
Масса боевой части, кг	15
Тип боевой части	осколочно-фугасная
Дальность стрельбы, км	1,6-10
Высота стрельбы, м	50 (М), 10 (МА) – 6000
Скорость полета ракеты, м/с	833
Система наведения	радиокомандная
Пусковая установка	палубная наводящаяся

Фото ЗРК «Оса-М»

Похожее

ЗРК С-75 Двина, Десна, Волхов. Состав. Ракеты. Далность поражения

ЗРК С-350Е Витязь. Состав. Ракеты. Дальность поражения

ЗРПК Панцирь-С1. Вооружение. Стоимость. Дальность обнаружения

ЗСУ-23-4 Шилка. Скорострельность. Вооружение. Размеры. Вес

ЗРК 2К12 КУБ. Дальность поражения. Скорость ракеты. Принцип работы

ЗСУ 2С6М Тунгуска-М. Дальность поражения. Ракеты. Состав. Размеры

ЗРК ОСА-АКМ. Дальность стрельбы. Ракеты. Состав. Размеры. Вес

ЗРК С-200 Ангара, Вега, Дубна. Дальность поражения. Состав. Принцип работы

ЗРК Бук-М1-2. Дальность обнаружения и поражения. Ракеты. Возможности

ПЗРК Верба. Дальность поражения. Ракета. Состав комплекса

ЗРК С-400 Триумф. Дальность поражения. Ракеты. Как работает

ЗРК С-300ПМУ2 Фаворит. Дальность поражения. Состав. Ракеты

ЗРК 9К331 Тор-М1. Дальность поражения. Ракета. Принцип работы

ПЗРК 9К310 Игла-1. Дальность поражения. Вес. Возможности

ЗРК С-125 Нева (Печора) Дальность и высота поражения. Ракеты

ЗРК Сосна. Вооружение. Дальность поражения. Ракеты. Состав

ЗРК 9К35 Стрела-10. Дальность поражения. Модификации. Ракеты

ЗРК С-25 Беркут. Дальность и высота поражения. Ракеты

Морской ЗРК Кинжал. Дальность поражения. Состав. Ракеты. На каких кораблях устанавливается

ЗРК 2К11 Круг. Дальность поражения. Модификации. Состав

Американский ЗРК Пэтриот. Дальность поражения. Состав. Ракеты

Зенитная установка ЗСУ-57-2. Вооружение. Размеры. Бронирование

КТПУ «Гибка» (3М-47) Дальность поражения. Ракеты. Принцип работы

ПЗРК 9К34 “Стрела-3”

«Оса-М» – корабельный зенитный ракетный комплекс

С-300В (9К81) – зенитно-ракетная система

9С482М7 (ПУ-12М7) – батарейный подвижной пункт управления

ЗРК «Авенджер» – американский мобильный зенитно-ракетный комплекс

FIM-92А Стингер – американский ПЗРК

ПЗРК 9К32 “Стрела-2”

МД-ПС – зенитно-ракетный комплекс

ЗРК М-1 «Волна» (4К90) – зенитно-ракетный комплекс корабельного базирования

ЗСУ-37 – зенитная самоходная установка

You have no rights to post comments

Сложности при разработке ЗРК «Оса»

Разработка ЗРК «Оса» в СССР тоже продвигалась довольно медленно. Назначенные КБ и НИИ не справлялись с поставленными задачами. Одни главные конструкторы, отвечающие за разработку разных узлов, сменивались другими, но и такая мера не помогала.

Осенью 1964 г. назначили нового разработчика, которым стал ЗУР-МКБ «Факел». Тогда главным конструктором этого предприятия был Грушин. Разработка плавающего самоходного шасси тоже была передана другому предприятию – Брянскому автомобильному заводу.

Главным конструктором ЗРК стал Ефремов, директор НИЭИ Минрадиопрома СССР.

После столь масштабной перестановки, создание ЗРК «Оса» пошла куда успешнее и в 1970 году на Эмбинский полигн поступил первый прототип комплекса. Там он успешно прошел все испытания.

Осенью 1971 года ЗРК передали на вооружение армии СССР, а через год он поступил на вооружение ПВО Сухопутных войск. Общественность впервые увидела ЗРК «Оса» на военном параде, проходящем в ноябре 1975 года на Красной площади в Москве.

Описание и характеристики ЗРК «Оса»

ЗРК «Оса» способен самостоятельно следовать за мотострелковыми и танковыми дивизиями в разных погодных условиях. Благодаря уникальной конструкции шасси он получил прекрасную плавучесть и видимость. Также он отличается высокой эффективностью и имеет хорошую защиту от помех.

Состав мобильного самоходного ЗРК «Оса»:

• Заряжающая машина.
• Машина 9А33Б, оснащенная средствами наведения и пуска ракет.
• Системы разведки.
• Управляемая ракета 9М33.

Как заряжающая, так и боевая машины располагаются на плавающих шасси БАЗ-5937. Это трехосное шасси имеет отличную проходимость в условиях бездорожья и может преодолевать водные преграды. К тому же, оно оборудовано следующими устройствами:

• Навигацией.
• Генератором отбора мощности.
• Системами жизнеобеспечения.
• Системы электроснабжения.

Этот комплекс, кроме того, что способен передвигаться самостоятельно, может транспортироваться на железнодорожном транспорте или грузовых самолетах ИЛ-76. Мощный двигатель обеспечивает ЗРК «Оса» максимальную скорость до 80 километров в час по шоссе. По грунтовым дорогам комплекс передвигается со скоростью до 55 километров в час.

При необходимости, ЗРК может пылить со скоростью до 10 километров в час. В таком случае, двигатель обеспечивает работу специального водомета. Что касается шасси, то оно способно буксировать прицепы до 7 200 килограмм.

За обнаружение воздушных целей противника отвечает мощная радиолокационная станция. Она обнаруживает воздушные цели, находясь как в движении, так и на месте. К тому же, ЗРК может идентифицировать цели по принципу «свой – чужой».

Серийное производство зенитно-ракетного комплекса «Оса» проходило на двух предприятиях:

• Ижевский электромеханический завод отвечал за производство самой боевой машины.
• Кировский машиностроительный завод отвечал за производство зенитных управляемых ракет.

Стоит отметить, что до 1975 года ЗРК «Оса» производилась без серьезных модернизаций. И только в этом году на вооружение Сухопутных войск поступил модернизированный ЗРК «Оса-АК». Произошли следующие изменения:

• Вместо 4 ракет 9М33 появилось 6 ракет модификации 9М33М2.
• Увеличилась зона поражения. Теперь комплекс мог поражать самолеты, скорость которых достигала 500 метров в секунду (базовая модель могла сбивать самолеты только если их скорость не превышала 420 метров в секунду).
• Поменялось место размещения радиоэлектронной аппаратуры. Ее большую часть поместили на новой элементной базе. Благодаря такому нововведению удалось уменьшить вес комплекта, повысить общую надежность и снизить энергопотребление.
• Ракеты с новыми взрывателями. Их конструкция изменилась, что позволило уменьшить минимальную высоту поражения целей с 50 метров до 25 метров.

Как видите, модернизированный ЗРК существенно превосходил базовую модель по вышеперечисленным характеристикам.

Операторы[править]

• СССР СССР — перешли к образовавшимся после распада государствам.
• Россия Россия:
  • Сухопутные войска России — 400 9К33М3 по состоянию на 2016 год
  • Морская пехота России — 20 9К33 по состоянию на 2016 год
• Азербайджан Азербайджан — некоторое количество 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Алжир Алжир:
  • Сухопутные войска Алжира — около 48 9К33М по состоянию на 2016 год;
  • Военно-воздушные силы Алжира — некоторое количество 9К33 по состоянию на 2012 год.
• Ангола Ангола — 15 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Армения Армения — 178 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Белоруссия Белоруссия — некоторое количество 9К33, по состоянию на 2016 год.
• Болгария Болгария — 24 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Греция Греция — 38 9К33М3 по состоянию на 2016 год. Первые 20 экземпляров «Оса-АКМ» поставлены в конце 1998 года.
• Грузия Грузия — 8 9К33М2 «Оса-АК» и 6-10 9К33М3 «Оса-АКМ» по состоянию на 2016 год.
• ДНР ДНР и ЛНР ЛНР — некоторое количество 9К33, по состоянию на 2016 год
• Индия Индия:
  • Сухопутные войска Индии — более 50 9К33М2 по состоянию на 2016 год;
  • Военно-воздушные силы Индии — некоторое количество 9К33М2 по состоянию на 2016 год.
• Иордания Иордания — 48 9К33М по состоянию на 2016 год.
• Куба Куба — некоторое количество 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Ливия Ливия — некоторое количество 9К33 по состоянию на 2012 год.
• Польша Польша — 64 9К33М2 «Оса-АК» по состоянию на 2016 год.
• Сирия Сирия — некоторое количество 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Туркмения Туркмения — 40 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Украина Украина — некоторое количество 9К33 по состоянию на 2016 год.
• Эквадор Эквадор — 6 9К33 по состоянию на 2016 год.

Модификация ЗРК «Оса-АКМ»

Следующей модификацией ЗРК была «Оса-АКМ». Она поступила на вооружение в 1980 году. Главное отличие модификации заключалось в повышенным возможностям борьбы с военными самолетами. Поскольку, начиная с 1970-х гг. военные вертолеты массово оснащали противотанковыми ракетами, ЗРК пришлось доработать с учетом этих нюансов.

ЗРК «Оса-АКМ» успешно атаковал не только движущие, но и «зависшие» в воздухе цели. Ракеты получили модернизированный взрыватель, благодаря чему цели можно было уничтожать чуть ли не на нулевых высотах. При этом расстояние до воздушной цели не должно было быть меньше двух километров. Максимальная дальность поражения – до 6,5 километров.

Модификации «Оса», разработанные в других странах

Помимо перечисленных выше модификаций, существуют и другие, которые были выполнены в Польше и Белоруссии.

«Оса-1Т» – модификация, которая была создана в Беларуси. Работы по модернизации проходили начиная с 2001 года. После всех доработок комплекса, его продемонстрировали в польском Кльце и Минске. Специалисты произвели следующие доработки:

• Внедрили современную оптико-электронную систему, главная задача которой – сопровождение цели. Эта система сконструирована так, что может эксплуатироваться даже при полном радиоэлекронном подавлении.
• Модернизована защита комплекса от помех, увеличился радиус ее действия.
• Благодаря доработкам комплекс смог поражать воздушные цели, летящие на высоте до семи километров на расстоянии до двенадцати километров.
• Модернизированный комплекс может поражать цели, которые летят со скоростью до 700 метров в секунду.

Ремонтопригодность и общий ресурс зенитно-ракетного комплекса были существенно увеличены.

Следующая модернизированная машина была построена на базе зенитно-ракетного комплекса «Оса» – Т-38 «Стилет». Ее тоже разработали в Белоруссии. Основное отличие этой модернизации заключается в наличие двухступенчатой ракеты Т-382. Если с производством двухступенчатых ракет возникнут проблемы, комплекс сможет использовать ракеты модели 9М33М3, которые идут в комплекте «Оса-АКМ».

Еще одна модификация – польская SA-8 Sting. Она мало чем отличается от белорусской «Оса-1Т». Здесь прослеживается совместная разработка с Белоруссией.

Тактико-технические характеристики ЗРК «Оса» (базовой модели)

• Боевая масса – 18 000 кг.
• Длина корпуса – 9140 мм.
• Ширина корпуса – 2750 мм.
• Высота с опущенным радаром – 4200 мм.
• Экипаж – 5 человек.
• Диапазон дальности стрельбы – от 1500 до 10 000 м.
• Вооружение – 4 управляемые ракеты 9М33.
• Мощность двигателя – 300 л/с. Максимальная скорость передвижения по шоссе – до 70 км в час; по бездорожью – 35 км в час. К тому же, комплекс может передвигаться даже вплавь. Его скорость в таком случае – до 10 км в час.

Колесная формула 6х6 обеспечивает комплексу спокойное передвижение в условиях отсутствия дорог.

ЗРК «Оса» и его модификации и сегодня входят в вооружение Сухопутных войск РФ и многих других стран, и это несмотря на то, что современные ЗРК превосходят их по многим характеристикам. Пока армия не планирует от них избавляться.

Боевое применение[править]

1. На малой дальности РЛС комплекса обеспечивала высокое соотношение сигнал-шум даже в условиях помех, а в случае невозможности этого оставалась возможность работы, используя оптический визир, поэтому при применении сирийских ЗРК «Оса» в боевых действиях в южном Ливане в начале 1980-х годов израильские ВВС были вынуждены применять массовый запуск беспилотных летательных аппаратов в качестве ложных целей, с последующей атакой ударной авиации на позиции израсходовавших боекомплект ЗРК. Таким образом были уничтожены 3 комплекса, а 4-й ЗРК «Оса» сбил один израильский разведчик RF-4E, количество уничтоженных при этом БПЛА не уточняется.
2. 12 октября 1981 года бойцы Полисарио с помощью ЗРК «Оса» сбили марокканский самолёт-воздушный командный пост C-130H «Геркулес», весь экипаж погиб. На следующий день с помощью «Осы» был сбит летящий на максимальной скорости истребитель Mirage F.1.
3. В ходе военных действий в Анголе в 1987—1988 году ЗРК «Оса» сбили два дистанционно пилотируемых летательных аппарата и один пилотируемый разведчик.
4. Перед началом операции «Буря в пустыне» специальное подразделение США с использованием вертолётов проникло на территорию Кувейта, захватило и вывезло ЗРК «Оса» со всей технической документацией, заодно пленив и боевой расчёт, состоящий из иракских военнослужащих.
5. В ходе боевых действий в Кувейте иракским ЗРК «Оса» были сбиты несколько крылатых ракет «Томагавк».
6. Комплекс применялся в ходе вооружённого конфликта в Южной Осетии в августе 2008 года российской и грузинской сторонами. По некоторым данным, модернизированным комплексом «Оса-АК/АКМ» был сбит российский Ту-22М3.
7. 9К33М2 поставлялась так же в Ирак в 1984—1984 гг. и участвовала в Ирано-Иракском конфликте; поставлено 2 дивизиона по 3 батареи.
8. В ходе Гражданской войны в Сирии бойцы Национальная коалиция сирийских революционных и оппозиционных сил сбили из трофейного комплекса два вертолёта Ми-8/Ми-17 ВВС Сирии.

ЗРК Оса, тактико-технические характеристики зенитного ракетного комплекса, АМК

Зенитный ракетный комплекс (ЗРК) «Оса» является автоматизированным средством ПВО, предназначенным для отражения воздушных угроз на малых дальностях. Его тактико-технические характеристики способны обеспечить прикрытие от воздушных ударов танковой или мотострелковой дивизии. Ракетный комплекс может действовать как в процессе боя, так и на марше.

Создание ЗРК «Оса» в 60-х годах 20 века было обусловлено тем, что авиация, избегая огня зенитных управляемых ракет, старалась атаковать на сверхмалых высотах. В связи с этим ЗРК, которые существовали в те годы, оказались практически бесполезными. Хотя их ТТХ прекрасно подходили для борьбы с высоколетящими целями, для низколетящих целей они практически не представляли опасности.

Так как новая тактика нападения авиации распространилась по всему миру, военные ведомства многих развитых стран пытались решить задачи по проектированию новых зенитно-ракетных комплексов, которые могли бы эффективно бороться именно с низколетящими целями. Технический уровень развития даже такого мощного государства, как США, не позволял создать ЗРК, который мог бы эффективно бороться с низколетящими целями, но советские конструкторы в очередной раз совершили резкий рывок вперёд в гонке вооружений.

История создания ЗРК «Оса»

Согласно постановлению ЦК КПСС и Совета Министров от 27.10.1960 года, работы по созданию нового зенитно-ракетного комплекса были начаты в том же 1960 году. Ответственным за разработку был назначен НИИ-20 Государственного Комитета СССР по радиоэлектронике. Во главе процесса разработки был поставлен Тарановский, которого вскоре сменил Косичкин.

До сих пор перед советскими конструкторами никогда не ставили сложную задачу по разработке полностью автономного зенитно-ракетного комплекса. Согласно плану, новая система ЗРК должна была совместить на одной базе следующие устройства:

1. Средства обнаружения и сопровождения воздушных целей;
2. Пусковое устройство, способное к запуску зенитной управляемой ракеты;
3. Средства топографии;
4. Средства навигации;
5. Независимые источники электроснабжения.

В довершение ко всему, новый зенитно-ракетный комплекс должен был быть ещё и плавучим. После нескольких попыток разработки стало ясно, что одному НИИ-20 с подобной задачей не справиться. Именно по этой причине разработка ЗРК было доверена целому ряду НИИ и конструкторских бюро:

• НИИ-20 Госкомитета по радиоэлектронике, как уже было сказано выше, назначался ответственным за весь проект. Кроме этого, данное НИИ отвечало за разработку боевой машины;
• Конструкторское бюро №82 машиностроительного завода по авиационной технике было назначено ответственным за разработку и испытания зенитной управляемой ракетой. Главным конструктором, ответственным за ракету, стал А. Потопалов;
• Всесоюзный НИИ по электрооборудованию отвечал за разработку всей системы электропитания ЗРК;
• Самоходное шасси должен был разработать Кутаисский автомобильный завод.

Параллельно с разработкой самоходного зенитно-ракетного комплекса «Оса» разрабатывался аналогичный комплекс ЗРК «Оса-М», основным предназначением которого являлась защита кораблей военно-морского флота от низколетящих воздушных угроз.

Так как военная разведка СССР в 60-е годы успешно работала в США, советскому правительству было известно, что потенциальный соперник разрабатывает свой автономный и мобильный ЗРК на самоходном шасси. Американская новинка, известная под именем «Маулер», должна была обеспечить американские войска защитой от низколетящих целей на расстоянии 10-15 км.

В связи с этими обстоятельствами, разработка советского ЗРК началась усиленными темпами. Как показало время, паника была совершенно напрасной, так как данный американский проект с треском провалился – летом 1965 года он был окончательно свёрнут.

Трудности при разработке ЗРК «Оса»

В СССР разработка ЗРК «Оса» тоже продвигалась очень медленно. Назначенные НИИ и КБ не справлялись с поставленной задачей. Проходили постоянные замены главных конструкторов, которые отвечали за разработку различных узлов, но это мало помогало.

В сентябре 1964 года новым разработчиком был назначен ЗУР-МКБ «Факел». В то время главным конструктором «Факела» был Грушин. Разработка плавающего самоходного шасси также была передана новому предприятию, которым стал Брянский автомобильный завод.

Директор НИЭИ Минрадиопрома СССР Ефремов был назначен главным конструктором ЗРК.

После такой масштабной перестановки, разработка ЗРК «Оса» пошла более успешно и в 1970 году первый прототип ЗРК «Оса» был отправлен на Эмбинский полигон, где успешно прошёл все положенные испытания. 4 октября 1971 года комплекс был принят на вооружение армии СССР. На вооружении ПВО Сухопутных войск данный самоходный комплекс был принят в 1972 году. Общественности зенитно-ракетный комплекс «Оса» впервые был представлен во время военного парада, который проходил на Красной площади в Москве в ноябре 1975 года.

Описание ЗРК «Оса» и его основные боевые характеристики

Зенитно-ракетный комплекс «Оса» способен самостоятельно следовать за танковыми и мотострелковыми дивизиями практически в любых погодных условиях. Уникальная конструкция шасси обеспечивает ему прекрасную проходимость и плавучесть. Он имеет высокую эффективность и обладает хорошей защитой от помех. Мобильный самоходный ЗРК «Оса» включает в свой состав следующие средства:

• Машина 9А33Б, оборудованная средствами наведения и пуска ракет;
• Системы разведки;
• Заряжающая машина;
• Ракета 9М33, которая является управляемой.

Как заряжающая, так и боевая машины находятся на плавающих шасси БАЗ-5937. Данное трёхосное шасси обладает прекрасной проходимостью в условиях бездорожья и способно преодолевать водные преграды. Кроме того, оно оснащено следующими устройствами:

• Средствами электроснабжения;
• Навигацией;
• Системами жизнеобеспечения;
• Генератором отбора мощности.

Данный комплекс, помимо того, что может передвигаться своим ходом, может транспортироваться на грузовых самолётах ИЛ-76 или железнодорожном транспорте. Мощный двигатель способен обеспечить ЗРК максимальную скорость до 80 км/ч по шоссе. При этом по грунтовым дорогам комплекс способен передвигаться со скоростью до 55 км/ч.

В случае необходимости, ЗРК «Оса» способен плыть со скоростью до 10 км/ч. В данном случае, двигатель обеспечивает работоспособность специального водомёта. Само шасси может буксировать прицепы весом до 7 200 кг.

Для обнаружения воздушных целей на ракетном комплексе используется мощная радиолокационная станция. Она может обнаруживать воздушные цели, находясь как на месте, так и в движении. Кроме того, ЗРК способна идентифицировать цели по признаку «свой – чужой».

Серийное производство ЗРК «Оса»

Серийное производство зенитно-ракетного комплекса «Оса» было развёрнуто на 2-х предприятиях:

• Сама боевая машина производилась на Ижевском электромеханическом заводе;
• Зенитные управляемые ракеты производились на Кировском машиностроительном заводе.

До 1975 года «Оса» производилась без существенных модернизаций.

В 1975 году на вооружение Сухопутных войск СССР был принят модернизированный зенитно-ракетный комплекс «Оса-АК». Модернизация ЗРК «Оса» заключалась в следующих изменениях:

• Появилось 6 зенитных управляемых ракет модификации 9М33М2, вместо 4-х 9М33 у базовой модификации;
• Зона поражения у модернизированного комплекса тоже была увеличена. Теперь комплекс мог сбивать самолеты, скорость которых равнялась 500м/С, вместо 420 М/С у базовой модели;
• Радиоэлектронная аппаратура (большая часть её) была размещена на новой элементной базе. Это нововведение позволило уменьшить массу комплекса, снизить энергопотребление и повысить общую надёжность;
• Ракеты получили взрыватели новой конструкции, которые позволили уменьшить минимальную высоту поражения воздушных целей комплексом с 50 до 25 метров.

В целом, модернизированный зенитно-ракетный комплекс значительно превосходил по базовым характеристикам предыдущую модель.

Модификация ЗРК «Оса-АКМ»

Следующая модернизации зенитно-ракетного комплекса получила название «Оса-АКМ». Данная модификация была принята на вооружение в 1980 году. Основным отличием модификации «АКМ» были повышенные возможности для борьбы с военными вертолётами. Так как, начиная с конца 1970-х годов военные вертолёты стали массово оснащаться противотанковыми ракетами, комплекс пришлось дорабатывать в соответствии с этими нюансами.

ЗРК «Оса-АКМ» мог вести эффективный огонь не только по движущимся, но и по «зависшим» в воздухе целям. Ракеты комплекса получили модернизированный взрыватель, после установки которого цели можно было поражать практически на нулевых высотах. При этом расстояние до цели не должно было быть менее 2 км. Максимальная дальность поражения составляла до 6,5 км.

Модификации Оса, произведённые в других странах

Кроме вышеперечисленных модификаций, существует ещё несколько модификаций ЗРК «Оса» которые были произведены в Белоруссии и Польше.

«Оса-1Т» – это модернизированный комплекс, который был произведён в Республике Беларусь. Работы по модернизации базового комплекса были начаты в 2001 году. После того как комплекс был доработан, он был продемонстрирован в Минске и польском Кельце. В отличие от базового комплекса он обладает следующими доработками:

• Защита комплекса от помех была модернизирована, возрос радиус её действия;
• Появилась современная оптико-электронная система, основной задачей которой является сопровождение цели. Данная система сконструирована таким образом, что может функционировать в условиях полного радиоэлектронного подавления;
• Система наведения нового комплекса даёт возможность ракетам поражать цели, летящие на высоте до 7 км. Расстояние до цели может составлять до 12 км;
• Модернизированный комплекс способен поражать цели, летящие со скоростью до 700 м/с.

Общий ресурс и ремонтопригодность зенитно-ракетного комплекса были значительно увеличены.

Следующая модернизированная машина, произведённая на базе ЗРК – это Т-38 «Стилет». Она тоже производится в Белоруссии. Самым главным отличием данной модернизации является наличие двухступенчатой ракеты Т-382. Если возникнут проблемы с производством двухступенчатых ракет, комплекс может успешно пользоваться ракетами 9М33М3, которые используются в комплексе «Оса-АКМ».

Ещё одной модернизацией является польская ЗРК SA-8 Sting. Она практически ни чем не отличается от белорусской «Оса-1Т». Здесь явно прослеживается совместная с Белоруссией разработка.

Тактико-технические характеристики ЗРК «Оса»

Основные ТТХ зенитно-ракетного комплекса «Оса» (базовой модели) имеют следующие характеристики:

• По классификации – это зенитно-ракетный комплекс;
• Его боевая масса составляет 18 000 кг;
• Экипаж включает в себя 5 человек;
• Длина корпуса комплекса составляет 9 140мм;
• Высота комплекса с опущенным радаром составляет 4 200 мм;
• Ширина корпуса составляет 2 750 мм;
• Диапазон дальности стрельбы составляет от 1 500 до 10 000 метров;
• В качестве вооружения комплекс располагает четырьмя управляемыми ракетами 9М33;
• Двигатель комплекса имеет мощность в 300 л/с. Он может развивать максимальную скорость по шоссе до 70 км/ч, и до 35 км/ч по бездорожью. Кроме того, комплекс способен передвигаться вплавь со скоростью до 10 км/ч.

Колёсная формула 6х6 позволяет комплексу без проблем передвигаться в условиях полного отсутствия дорог.

Зенитно-ракетный комплекс «Оса» и его модификации до сих пор состоят на вооружении Сухопутных войск России и ряда других стран. Хотя современные ЗРК во многом превосходят «Осу», армия не спешит полностью от них отказываться.

«Оса» жалит больно: советские плавающие зенитно-ракетные комплексы

• Главная
• Статьи
• «Оса» жалит больно: советские плавающие зенитно-ракетные комплексы

Автор: Евгений Кочнев

Не так давно мы делали тест-драйв трехосного колесного тягача БАЗ-6402 для буксировки ракетных комплексов С-400 – полноприводного, однако все же недостаточно приспособленного для передвижения по бездорожью. Для ракет С-400 это не критично, так как они созданы для борьбы с авиацией противника на большой и средней высотах. А вот для зенитных систем малой дальности такие громоздкие грузовики уже не годятся. Здесь нужна более компактная техника, способная преодолеть любые преграды, в том числе и водные. Сегодняшняя статья – об уникальных трехосных плавающих машинах комплекса «Оса», созданных более 45 лет назад.

 

В советские времена БАЗ официально считался изготовителем тяжелых промышленных тракторов, но с середины 1960-х он являлся еще и достаточно крупным секретным предприятием п/я Р-6753, выпускавшим автомобили-шасси с колесной формулой 6х6 для монтажа новых видов ракетного вооружения.

Приняв за основу схему с равноудаленными мостами и бортовой трансмиссией, в СКБ БАЗ разработали два семейства плавающих машин с несущими стальными корпусами, на которых базировались различные боевые и вспомогательные системы. В свое время они негласно представляли собой высшие достижения Советского Союза и после показов на парадах вызывали на Западе замешательство, которое можно было истолковать как скрытое признание мирового приоритета мощнейшего советского ВПК.

На первом этапе в Брянске в короткий срок удалось самостоятельно разработать и организовать серийный выпуск первого семейства трехосных корпусных спецшасси серии БАЗ-5937/5939 для несения зенитного ракетного комплекса «Оса».

Семейство БАЗ-5937/5939 (1969 – 1990 гг.)

Прототип 300-сильного шасси БАЗ-937 комплекса «Оса». 1969 год (из архива БАЗ)

---

Первое семейство специальных автомобилей-шасси Брянского завода ведет историю от правительственного постановления о создании мобильного зенитно-ракетного комплекса (ЗРК) с шифром «Эллипс», который вскоре заменили на более известный код «Оса». Для повышения оперативности и мобильности все его элементы предписывалось монтировать на принципиально новых плавающих шасси, которых к тому времени ни в Советском Союзе, ни за границей не существовало.

Техническое задание на эти необычные автомобили разработали в 1961 году, и в дальнейшем одновременно на нескольких предприятиях начались длительные поиски оптимальных конструкций будущей ракетной системы и наиболее приемлемой для нее плавающей машины, занявшие еще несколько лет. После неудач, постигших эти заводы, в 1966 году было принято решение о переносе проектных работ по амфибиям в Брянск. Первыми образцами с узкой одноместной кабиной, облегченными корпусами и крайними управляемыми мостами стали заднемоторные шасси БАЗ-937 для пусковой установки, БАЗ-938 для размещения средств технического обслуживания и БАЗ-939 для транспортно-заряжающей машины (ТЗМ).

---

Опытное спецшасси с бортовой трансмиссией и одноместной кабиной (из архива БАЗ)

---

В процессе испытаний и доработок эти индексы дополнили цифрой 5, и впоследствии на серийной продукции они были изменены на БАЗ-5937, БАЗ-5938 и БАЗ-5939 соответственно. Прототипы всех трех машин построили в 1969 – 1970 годах, серийное производство началось в 1972-м.

Главной особенностью и наиболее трудоемкой частью машин серии 5937/5939 являлись первые в СССР водоизмещающие корпуса полузакрытого типа с гладким днищем, давшие свое название всей системе корпусных автомобилей.

---

Предсерийное плавающее шасси БАЗ-5937 с несущим корпусом. 1971 год (из архива автора)

---

В их состав входило более 1 000 стальных элементов, вручную сопряженных между собой сваркой и уплотненных губчатой резиной, оклеенной водонепроницаемой тканью. Для дополнительного повышения прочности их оборудовали встроенной лонжеронной рамой из стальных профилей, усилителями и ребрами жесткости. Наружная обшивка выполнялась из гофрированного металла.

---

Спецшасси БАЗ-5938 для машины технического обслуживания 9В210 (из архива Н. Щербакова)

Автомобиль БАЗ-5939 с оснащением транспортно-заряжающей машины (из архива 21 НИИЦ)

---

Готовые изделия проходили проверку на герметичность путем пролива сварных швов керосином, а затем их заполняли водой в специальной ванне. Комплектные шасси испытывали в дождевой камере и на местных водоемах. Первые выпуски оборудовали укороченными корпусами со срезанной передней частью и плоской лобовой панелью. Серийная продукция имела удлиненную остроносую переднюю часть корпуса со встроенными светомаскировочными фарами.

---

Зенитная установка «Оса» на шасси БАЗ-5937 первого выпуска. 1972 год (фото автора)

Пусковые системы «Оса» на военном параде в Москве (из архива автора)

Пусковая установка «Оса-АКМ» на остроносом шасси БАЗ-5937 (из архива ИЭМЗ)

---

Единственным предназначением автомобилей-шасси этой серии являлось несение ЗРК «Оса» малой дальности. Комплекс обеспечивал поражение низколетящих целей, передвигавшихся со скоростью до 500 м/с, на высотах от 25 м до 5 км и дальности до 10 км. В его состав входили пусковые установки (боевые машины) для старта управляемых ракет, а также мобильные средства снабжения и обслуживания. Все они обеспечивали передвижение систем ЗРК в дневное время по шоссе с максимальной скоростью 60 км/ч, ночью — до 25 км/ч, на плаву — 8 км/ч. Общей сборкой боевых машин занимался Ижевский электромеханический завод (ИЭМЗ), в настоящее время — АО Ижевский электромеханический завод «Купол», входящий в концерн «Алмаз-Антей».

Непосредственно для монтажа всех типов боевых установок ЗРК «Оса» служило серийное 7,5-тонное базовое шасси БАЗ-5937. Оно снабжалось пятиместной кабиной управления и автономной системой электроснабжения спецоборудования с приводом от маломерного 40-сильного газотурбинного агрегата.

---

Серийный автомобиль БАЗ-5937 для зенитного комплекса «Оса». 1972 год (фото автора)

---

Первые же образцы шасси послужили базой опытной боевой машины 9А33. Ее модернизированный вариант 9А33Б оснащался четырьмя открыто расположенными ракетами, единым вращавшимся антенно-пусковым комплексомом с радиолокационной станцией и антенной поиска, обнаружения и сопровождения целей с круговым обзором.

---

Прототип самоходной зенитной установки «Оса» на шасси первого выпуска (из архива ИЭМЗ)

Машина 9А33Б «Оса» с четырьмя открыто установленными ракетами (фото автора)

Установка 9А33Б «Оса» на плавающем герметичном корпусном шасси (фото автора)

---

В 1973 году появился комплекс «Оса-АК», в который входили боевые машины 9А33БМ2 с шестью ракетами в двух транспортно-пусковых контейнерах с дальностью стрельбы до 10 км, новым оборудованием наведения, улучшенной помехозащищенностью и уменьшенной массой аппаратуры. В связи с тем, что он не мог эффективно вести борьбу с боевыми вертолетами, в 1975 году началась работа по его модернизации.

---

Боевая машина 9А33БМ2 «Оса-АК» на обновленном шасси. 1975 год (из архива ИЭМЗ)

Система «Оса-АК» с шестью ракетами в герметичных контейнерах (из архива ИЭМЗ)

Полуразобранная машина «Оса-АК» для перевозки по железной дороге (из архива автора)

---

В 1977 году обновленный вариант предыдущего ЗРК «Оса-АК», способный поражать цели на высоте до 25 м, прошел первые испытания, а его доработанный вариант в сентябре-декабре 1979-го успешно преодолел цикл государственных испытаний. В 1980 году он был принят на вооружение как ЗРК «Оса-АКМ» на мобильной пусковой установке 9А33БМ3 и шестью ракетами, приспособленными для стрельбы по низколетящим целям.

---

Пусковые системы зенитно-ракетного комплекса 9А33БМ3 «Ока-АКМ» (из архива ИЭМЗ)

Запуск ракеты 9М33М3 с самоходной установки на шасси БАЗ-5937 (из архива ИЭМЗ)

Пусковая установка «Оса-АКМ» армии ЧССР в транспортном положении (из архива автора)

---

Параллельно с выпуском боевых ЗРК на шасси БАЗ-5937 в единичных экземплярах собирали мишенные комплексы с шестью ракетными имитаторами воздушных целей «Саман» и «Саман-М», созданные на основе зенитных ракет без боевой части. Такие системы применяли во время проведения учебно-тренировочных стрельб боевых расчетов ЗРК для имитации современных и перспективных воздушных целей.

---

Мишенный комплекс для запуска учебных ракет-имитаторов «Саман-М» (из архива ИЭМЗ)

---

На спецшасси БАЗ-5938 грузоподъемностью 6,6 т базировалась машина технической помощи 9В210 с двумя отделениями для экипажа из трех человек. Она служила для проведения в полевых условиях технического обслуживания и мелкого ремонта всех элементов ЗРК «Оса».

---

Шасси БАЗ-5938 для машины техобслуживания 9В210М (из архива 21 НИИЦ)

---

От других моделей внешне «техничка» отличалась повышенным расположением верхней части полностью закрытого корпуса с несколькими люками и вместительным рабочим отсеком, в котором помещалась газотурбинная установка для привода активных исполнительных агрегатов, специального оборудования и инструмента. В модернизированных комплексах эти машины носили дополнительные индексы М, М1, М2 и М3 и несущественно отличались комплектацией.

---

БАЗ-5939 с оснащением машины 9Т217 в транспортном положении (из архива автора)

---

Для размещения оборудования ТЗМ применялось спецшасси БАЗ-5939 с полезной нагрузкой 5,4 т и экипажем из трех человек, также приспособленных для работы со всеми вариантами ЗРК «Оса». Спецшасси служило для перевозки боеприпасов, перезарядки, аварийной дозаправки боевой техники и внешне отличалось открытым корпусом со сдвижной тентованной крышкой над грузовым отсеком. В отличие от базовой версии, машина снабжалась вспомогательной гидросистемой для питания узлов перегрузочного крана. Первым на этом шасси появился опытный образец ТЗМ 9Т217 с восемью ракетами для заряжания пусковой системы 9А33Б. В 1975-м в ЗРК «Оса-АК» вошел вариант 9Т217БМ для работы с транспортно-пусковыми контейнерами с тремя ракетами в каждом. С 1980 года на вооружении состояла доработанная ТЗМ 9Т217БМ2 комплекса «Оса-АКМ».

---

ТЗМ комплекса «Оса-АКМ» в развернутом состоянии с гидрокраном (из архива автора)

Перегрузка ракет из машины 9Т217БМ2 на пусковую установку (из архива автора)

---

Все шасси снабжались 300-сильным дизельным двигателем V6 танкового типа. Он являлся модификацией мотора УТД-20 для первых БМП и снабжался непосредственным впрыском топлива, жидкост­ным охлаждением и двойной системой запуска от электростартера или пневматической от баллона с газом высокого давления. От механической пятиступенчатой коробки передач крутящий момент передавался 16 карданными валами на колесные редукторы каждого борта. Независимая рычажно-торсионная подвеска обеспечивала достаточную проходимость и плавность хода. Все колеса оборудовали камерными шинами с системой регулиро­вания давления. Передвижение на плаву обеспечивали два водометных движителя, которым дружно помогали все вращавшиеся колеса машины. На суше все варианты шасси развивали максимальную скорость 70 км/ч, на плаву — 8,0 км/ч. В боевой готовности скорость на шоссе достигала 60 км/ч.

---

Форсирование пусковой установкой «Оса» водной преграды (из архива ИЭМЗ)

Машина «Оса-АКМ» перед Ижевским заводом «Купол» (из архива ИЭМЗ)

Модернизированная система 9А33БМ3 «Оса-АКМ» в боевой готовности (из архива автора)

---

Серийный выпуск комплекса «Оса» был остановлен в 1990 году, когда приток военных заказов иссяк. К этому времени он уже являлся основным колесным зенитно-ракетным средством ПВО Советской армии и поставлялся в 25 стран под наименованиями «Оса» или «Ромб».

Впоследствии на базе последнего ЗРК «Оса-АКМ» были созданы модернизированные варианты комплексов с обновленными пусковыми установками на доработанных или реконструированных шасси БАЗ-5937, выполненных в соответствии с изменившимися требованиями ведения боевых действий.

---

Транспортное шасси БАЗ-5937, реконструированное на военном заводе № 172 (фото автора)

---

В Беларуси с середины 2000-х годов производится модернизация боевой машины «Оса-АКМ», которая теперь носит собственное обозначение «9А33-1Т Оса-1Т». От своего прообраза она отличается новой системой наведения и увеличенной до 12 км дальностью поражения.

---

Белорусская модернизированная установка «Оса-1Т» (фото Д. Гладкого, Минск)

---

В России создан модернизированный вариант комплекса «Оса-АКМ» на доработанной пусковой установке 9А33БМ3-1 с новыми средствами управления, обнаружения, поражения и самозащиты, приспособленный для стрельбы по малоразмерным низколетящим целям, перемещающимся на небольших скоростях. Преемника в классе плавающих зенитных установок у «Осы» до сих пор так и не появилось.

---

Модернизированный комплекс «Оса-АКМ» (из проспекта завода «Купол»)

---

На титульной фотографии — пусковая установка зенитно-ракетного комплекса «Оса-АКМ» (фото АО ИЭМЗ «Купол»)

---

Читайте также:

---

история

 

Новые статьи

Статьи / Интересно Премия «Автомобиль года» как зеркало состояния автомобильного рынка Буквально только что, на прошлой неделе, были объявлены итоги очередного конкурса «Автомобиль года». Казалось бы, какой «автомобиль года», если весь автомобильный рынок поражен тяжелейшим кр… 251 0 1 19.09.2022

Статьи / Интересно 5 причин покупать и не покупать BMW 1 series I E81/E82/E87/E88 Задний привод, отточенная управляемость, прекрасная эргономика, море драйва и удовольствие за рулем… Кажется, что BMW 1 series предлагает все это в компактной упаковке и, что важно, за вполн… 1492 4 1 18.09.2022

Статьи / Интересно Долгожданное прощание: почему погибла Lada Xray, но об этом никто не пожалел На прошлой неделе мы официально попрощались с Lada Xray: президент АВТОВАЗа Максим Соколов заявил, что модель никогда не вернется на конвейер. Это угадывалось еще весной, когда вслед за ост… 3631 11 1 16.09.2022

Популярные тест-драйвы

Тест-драйвы / Тест-драйв Полный привод, самый мощный мотор и силы в запасе: первый тест Chery Tiggo 8 PRO MAX Появление в российской линейке Chery модели Tiggo 8 PRO MAX можно назвать знаковым для бренда. Почему? Да хотя бы потому, что это первый с 2014 года полноприводный кроссовер Chery, приехавши… 18074 13 44 29.04.2022

Тест-драйвы / Тест-драйв Мотор от Mercedes, эмблема от Renault, сборка от Dacia: тест-драйв европейского Logan 1,0 Казалось бы, что нового можно рассказать про Renault Logan второго поколения, известный каждому российскому таксисту, что называется, вдоль и поперёк? Однако конкретно в этом автомобиле есть. .. 9800 10 41 13.08.2022

Тест-драйвы / Тест-драйв Haval Dargo против Mitsubishi Outlander: собака лает, чужестранец идет В дилерском центре Haval на юге Москвы жизнь кипит: покупатели разглядывают машины, общаются с менеджерами и подписывают какие-то бумаги. Пока я ждал выдачи тестового Dargo, такой же кроссов… 9609 4 56 13.09.2022

Телескоп Webb

показывает изображение первых галактик: NPR

Обновлено 11 июля 2020 г., 18:59 по восточноевропейскому времени. Первоначально опубликовано 11 июля 2022 г. , 11:58 по восточноевропейскому времени.

Слышали обо всем

Белый дом опубликовал первое изображение коллекции снимков с космического телескопа Джеймса Уэбба во время предварительного просмотра в понедельник. Научный институт космического телескопа / НАСА, ЕКА, CSA, STScI, Webb ERO скрыть заголовок

переключить заголовок

Научный институт космического телескопа / НАСА, ЕКА, CSA, STScI, Webb ERO

Белый дом опубликовал первое изображение из коллекции изображений, сделанных космическим телескопом Джеймса Уэбба, во время предварительного просмотра в понедельник.

Научный институт космического телескопа / НАСА, ЕКА, CSA, STScI, Webb ERO

На первый взгляд, первое изображение, полученное новым космическим телескопом имени Джеймса Уэбба НАСА, может показаться не таким уж замечательным.

Но на самом деле то, что кажется крошечными точками в космосе, на самом деле является галактиками, которым миллиарды лет.

«Если вы держите песчинку на кончике пальца на расстоянии вытянутой руки, это часть Вселенной, которую вы видите — всего лишь одна маленькая точка Вселенной», — сказал администратор НАСА Билл Нельсон об изображении в понедельник. .

Более того, на этом изображении видны одни из самых первых галактик, сформировавшихся во Вселенной. По словам Нельсона, больше изображений, полученных космическим телескопом Джеймса Уэбба, должно показать, какие галактики на очень-далеком расстоянии пригодны для жизни.

Белый дом совместно с НАСА обнародовал первую из серии фотографий, сделанных телескопом с момента его запуска с Земли более шести месяцев назад.

Президент Байден назвал открытие в понедельник «историческим днем».

НАСА планировало опубликовать изображение сегодня как часть коллекции первых научных результатов, но решило, что изображение настолько драматично, что именно Байден должен показать его миру.

Космический телескоп Джеймса Уэбба стоимостью 10 миллиардов долларов является самой сложной обсерваторией из когда-либо запущенных. Он покинул Землю в декабре прошлого года. В конце января он достиг своей небесной стоянки в миллионе миль от планеты. С тех пор инженеры проверяли инструменты, выравнивали зеркала и давали телескопу остыть, чтобы его инструменты работали должным образом.

«Уэбб был построен, чтобы найти первое поколение галактик, сформировавшихся после Большого взрыва», — говорит Джейн Ригби, научный сотрудник проекта по эксплуатации телескопа. «Это основная научная цель, для которой он был создан».

Прежде чем объявить об открытии телескопа для бизнес-миссии, менеджеры хотели провести то, что они называют ранним выпуском наблюдений. Они призваны показать, что телескоп работает, и, как говорит Ригби, «предназначен для того, чтобы быть потрясающе красивым, мощным как визуально, так и с научной точки зрения».

Ожидается, что космический телескоп Джеймса Уэбба (показан на земных испытаниях) откроет некоторые из самых захватывающих видов Вселенной, которые когда-либо видели. Крис Ганн/Нортроп Грумман, НАСА скрыть заголовок

переключить заголовок

Крис Ганн/Нортроп Грумман, НАСА

Ожидается, что космический телескоп Джеймса Уэбба (показан на земных испытаниях) откроет одни из самых захватывающих видов Вселенной, которые когда-либо видели.

Крис Ганн/Нортроп Грумман, НАСА

В дополнение к изображению, содержащему самые ранние из когда-либо виденных галактик, НАСА также опубликует изображения звездного питомника, где формируются звезды, называемого туманностью Киля, туманности Южное кольцо и группы галактик, открытой в 1787 году, под названием Квинтет Стефана. Также будет проведен анализ света, исходящего от планеты-гиганта, вращающейся по орбите за пределами нашей Солнечной системы, с прозаичным названием WASP-9.6б. Ожидается, что эти дополнительные изображения появятся во вторник утром.

Взгляд в прошлое

Уэбб предназначен для сбора и анализа инфракрасного света, длина волны которого больше, чем можно увидеть человеческим глазом. Это позволит ему улавливать свет от самых ранних галактик, которые появляются в инфракрасном диапазоне.

Эти ранние галактики находятся далеко — более 13 миллиардов световых лет — и, несмотря на всю мощь телескопа Уэбба, они могут выглядеть как бледные пятна. Но эти пятна помогут астрономам лучше понять, как возникла Вселенная, какой мы ее знаем.

Одной из первых целей космического телескопа Джеймса Уэбба является скопление далеких галактик, известное как SMACS 0723. Гравитационное поле этих галактик действует как космическая линза, позволяя телескопу смотреть на гораздо более отдаленные и старые части Вселенной. STSci скрыть заголовок

переключить заголовок

STSci

Одной из первых целей космического телескопа Джеймса Уэбба является скопление далеких галактик, известное как SMACS 0723. Гравитационное поле этих галактик действует как космическая линза, позволяя телескопу смотреть на гораздо более отдаленные и старые части Вселенной.

STSci

Одним из астрономов, которые будут проводить поиск этих самых ранних галактик, является Кейтлин Кейси, астроном из Техасского университета в Остине.

Она говорит, что один из способов поиска этих тусклых галактик — это направить телескоп на один и тот же участок неба в течение ста или более часов и позволить свету этих далеких объектов проникать внутрь. Космический телескоп Хаббла показал это так называемое глубокое полевой подход может идентифицировать множество ранее невидимых галактик.

Но там, где Хаббл смог увидеть десять тысяч галактик в глубоком поле, с Уэббом «у нас будет миллион галактик», — говорит Кейси.

Помимо открытия новых галактик, Кейси хочет понять большую структуру Вселенной, на что была бы похожа Вселенная, если бы вы могли сделать шаг назад и взглянуть на нее с высоты птичьего полета.

«Если вы сильно уменьшите масштаб, вся вселенная будет выглядеть, знаете ли, чем-то вроде внутренней части губки, где есть эти маленькие нити и пустоты», — говорит Кейси. «Итак, что мы действительно хотим запечатлеть, так это эту структуру».

Еще многое предстоит увидеть

Но это только начало. Широта науки, для которой может использоваться Уэбб, ошеломляет. Например, Меган Мэнсфилд, научный сотрудник NASA Sagan в Аризонском университете, будет использовать Уэбба для изучения атмосфер планет, вращающихся вокруг звезд за пределами нашей Солнечной системы.

В частности, она хочет знать об их атмосфере — «из чего они сделаны, какова их температура». Это многое расскажет ей о самой планете и о том, способна ли она поддерживать жизнь.

Анна Ниренберг из Калифорнийского университета в Мерседе возглавляет группу, которая разработала умный способ использования нового телескопа, чтобы попытаться понять фундаментальную природу темной материи, этого невидимого вещества, которое составляет четверть Вселенной. «Вы просто не можете сделать это ни с одним другим инструментом», — говорит она. «Если все будет работать, это будет иметь большое значение».

Как и в случае с любым другим научным инструментом с новыми возможностями, никто на самом деле не знает, какие секреты Вселенной, в которой мы живем, откроет телескоп Уэбба.

ос-убийц цикад прибыли. Не путайте их с шершнями-убийцами.

Восточные осы-убийцы цикады большие и красочные, но не представляют опасности для человека.

Фотография Джоэла Сарторе, Nat Geo Photo Ark

Пожалуйста, соблюдайте авторские права. Несанкционированное использование запрещено.

Возможно, вы слышали о «шершнях-убийцах» или азиатских гигантских шершнях, которые попали в заголовки международных газет после того, как небольшое их количество было замечено на северо-западе Тихого океана в 2019 и 2020 годах. В настоящее время они обитают в дальнем северо-западном углу штата Вашингтон, в отчасти из-за целенаправленной кампании по их поиску и уничтожению их гнезд.

Несмотря на это, открытие этих агрессивных двухдюймовых насекомых, известных тем, что уничтожает целые пчелиные колонии, вызвало обеспокоенность в Соединенных Штатах, и многие люди ошибочно приняли местных ос за шершней-убийц. По словам энтомолога Джастина Шмидта из Аризонского университета, на самом деле многие люди видят безобидную местную осу с таким же свирепым именем: убийца цикад.

Имя подходит. Самки крупные, до полутора дюймов в длину, и они охотятся исключительно на цикад, которых находят, цепляются за них и впрыскивают яд. Это парализует цикаду, которую осы уносят обратно в свои подземные логовища. С середины июля цикады-убийцы вылезают из своих подземных нор и жужжат по дворам людей.

Убийцы цикад охотятся за более надежными сезонными цикадами, а не за периодическими видами, такими как Brood X, обрушившимися на восток США в мае. Хотя в Северной Америке обитает четыре вида цикад-убийц, все они похожи по внешнему виду и поведению.

Несмотря на свой крупный размер и ярко-желтую и коричневую окраску, цикады-убийцы безвредны для человека — это «нежные гиганты мира ос», — говорит Шмидт. Самцы цикад-убийц не жалят, и, в отличие от гигантских азиатских шершней, самки цикад-убийц избегают людей и редко используют свои жала. На самом деле вам придется обращаться с ними, чтобы когда-нибудь оказаться в опасности, говорит Шмидт, который получил тысячи укусов и в процессе создал индекс боли при укусе Шмидта.

Когда это случается, укус самки цикады-убийцы очень слабый, почти незаметный — он ощущается как простой укол и причиняет меньше боли, чем укус потовой пчелы, — говорит Джо Коэльо, эколог-физиолог из Университета Куинси в Иллинойсе, который изучает хищников. Для сравнения, укус азиатского гигантского шершня причиняет гораздо большую боль, сродни «уколу раскаленной иглой», как сказал в предыдущем интервью исследователь Шуничи Макино.

Но, несмотря на то, что цикады-убийцы — «большие, устрашающие на вид насекомые, у них ничего нет. Они не могут позволить себе ужалить вас, потому что называют свой собственный блеф. Удивительно, как люди боятся их только из-за внешности», — говорит Коэльо.

Анатомия охоты

Чтобы найти хорошо замаскированных цикад, самки цикад-убийц обыскивают деревья, используя свои большие глаза и острое зрение. При нападении они впрыскивают насекомым коктейль из быстродействующего яда, необратимо препятствуя движению цикады. Как это работает, никто не знает, говорит Коэльо. Но это превращает их в своего рода зомби, тем лучше для того, чтобы их кормили молодые осы. Исследование одного из бывших аспирантов Коэльо показало, что отравленные, парализованные цикады на самом деле могут жить дольше, чем обычные здоровые цикады.

Но если ей это удалось, самка теперь должна нести свою тяжелую добычу обратно в гнездо, используя свои мощные крылья, при этом удерживая цикаду средними ногами. Исследование Коэльо показывает, что восточные цикады-убийцы ( Sphecius speciosus ) на самом деле преуспевают в охоте и укрытии цикад, которые более чем на 80 процентов тяжелее их (почти в два раза больше их веса), что физически невозможно. Они делают это, объясняет Коэльо, немного «обманывая»: поднимая цикад на деревья или другие вертикальные поверхности и яростно летя к своей норе. Это можно повторять несколько раз, пока они не доберутся до своего дома, за это время они утащат цикад под землю.

Вернувшись в свою подземную камеру, самка откладывает яйцо на свою обездвиженную добычу, которая станет пищей для растущих личинок. Чтобы произвести потомство мужского пола, осам нужна только одна цикада. Но самкам, которые примерно в два раза крупнее самцов, для правильного развития требуется две цикады. Как только камера в гнезде содержит одну или две цикады, она запечатывает ее, делает еще одну и продолжает охоту.

В хороший год она может создать и заполнить более дюжины таких палат; одна оса может охотиться и убить более 30 цикад после появления примерно в середине июля и смерти примерно через шесть недель.

После того, как личинки ос питаются цикадами, они проводят зиму под землей, а затем появляются после окончательного превращения во взрослых особей в середине лета следующего года, начиная цикл заново.

Осиный утес 

Большинство цикад-убийц на самом деле являются самцами, которые каждое лето выплывают из своих нор незадолго до самок, объясняет Джон Олкок, энтомолог из Университета штата Аризона. Когда появляются самки, самцы жестоко соревнуются за спаривание с одной из них, каждый из которых размножается только один раз. В отличие от самок, самцы агрессивны и будут преследовать и жужжать животных, приближающихся к их территории, включая людей. Они даже заходят так далеко, что притворяются, что жалят, поведение, называемое псевдоукусом.

Самцы «очень громкие и заметные, и люди сходят с ума», — говорит Коэльо, особенно потому, что насекомые, кажется, предпочитают нарушенные места обитания и участки с открытым грунтом и низкой растительностью, такие как пригородные лужайки.

Тем не менее, этот вид является важным хищником в экосистеме, помогая контролировать популяции цикад . Их невероятные охотничьи способности также являются увлекательным уроком естественной истории для детей, говорит Шмидт. ( Узнать больше: Мания «шершня-убийцы» подчеркивает опасность страха перед насекомыми и пауками .)

«Так что, если у вас во дворе есть убийцы цикад, — говорит Олкок, — радуйтесь, а не бегите за спреем от ос».

Читать дальше

Эксклюзивный контент для подписчиков

Почему люди так одержимы Марсом?

Как вирусы формируют наш мир

Эпоха собачьих бегов в США подходит к концу

Узнайте, как люди представляли себе жизнь на Марсе на протяжении всей истории

Посмотрите, как новый марсоход НАСА будет исследовать красную планету

Почему люди так одержимы Марсом?

Как вирусы формируют наш мир

Эпоха собачьих бегов в США подходит к концу будет исследовать красную планету

Почему люди так одержимы Марсом?

Как вирусы формируют наш мир

Эпоха собачьих бегов в США подходит к концу

Узнайте, как люди представляли себе жизнь на Марсе на протяжении истории

2 Марсоход NASA будет исследовать красную планету

Узнать больше

Как избавиться от ос: главные советы по отпугиванию этих вредителей от вашего дома и двора

(Изображение предоставлено: Frederic Cerez/EyeEm/Getty Images)

Садоводство и т. д. Информационный бюллетень

The Home Of Outdoor Living

Спасибо, что подписались на . Вскоре вы получите электронное письмо с подтверждением.

Возникла проблема. Пожалуйста, обновите страницу и повторите попытку.

Отправляя свою информацию, вы соглашаетесь с Условиями использования (открывается в новой вкладке) и Политикой конфиденциальности (открывается в новой вкладке) и вам исполнилось 16 лет.

Нужно знать, как избавиться от ос? Хотите ли вы отпугнуть лишнего от жужжания вокруг вашей вечеринки в саду или вам нужно заняться гнездом, вы найдете здесь множество советов.

Когда становится тепло, осы выходят наружу, к большому разочарованию многих людей. Есть причина, по которой эти маленькие полосатые существа внушают страх как молодым, так и старым — их укус болезненный и часто, казалось бы, ничем не спровоцированный. У некоторых это может вызвать серьезные аллергические реакции, которые требуют немедленной медицинской помощи. Естественно, наличие всего одного или двух над головой может ослабить то, что в противном случае было бы расслабляющим настроением на свежем воздухе.

Однако, как и в нашем руководстве о том, как избавиться от муравьев, есть несколько способов удержать этих насекомых от такой неприятности. Ниже мы приводим несколько простых советов, чтобы вы могли спокойно наслаждаться своим задним двором.

Как избавиться от ос: простые советы, как держать их подальше от вашего участка

‘Осы могут беспокоить жителей, поэтому мы призываем людей принимать меры, чтобы не привлекать их, и быть настороже при любых признаках заражения», — говорит Авива (открывается в новой вкладке).

«По возможности люди должны избегать взаимодействия с осами и оставлять их в покое», — продолжают они. Видите ли, осы жалят, когда чувствуют угрозу, и, в отличие от медоносных пчел, они могут продолжать жалить, не причиняя при этом себе вреда. Более того, как поясняет BPCA (Британская ассоциация по борьбе с вредителями ), оса, попавшая в беду, испускает феромон, который призывает к поддержке ближайших членов колонии.

Тем не менее, есть несколько советов, которые помогут вам в первую очередь избавиться от них. Если вы заметили заражение, это другое дело (и мы поговорим об этом позже).

Укусы осы болезненны, но если у вас аллергия, они могут быть смертельными

(Изображение предоставлено Клаусом Шульманном/500px/Getty Images) Летом шершни встречаются почти в каждом саду, но вместо того, чтобы убегать и прятать от них еду, рассмотрите возможность использования мяты, чтобы отпугнуть их», — говорит команда GardeningExpress .

‘Опрыскайте участки дома, часто покрытые осами, растворив в воде немного масла перечной мяты, одна часть к пяти. Посадка мяты перечной в саду также отпугнет маленьких тварей, дав вам возможность спокойно поесть на свежем воздухе».

Мята не только отпугивает ос, но и полезна, если вам нужно знать, как избавиться от белок в саду. Кроме того, здорово иметь под рукой летние салаты и напитки. В нашем руководстве о том, как выращивать мяту, есть много отличных советов. 9

2. Выбирайте другие ароматические вещества используйте, если вы хотите знать, как избавиться от ос естественным путем. Например, как цитронелла, так и тимьян могут быть стратегически размещены для отпугивания ос от территории, как объясняет Брайан МакГи, менеджер по структурной борьбе с вредителями в Службах образования (открывается в новой вкладке) (SSC). Итак, подумайте о том, чтобы посадить тимьян вокруг своих идей для сидения на открытом воздухе или инвестировать в свечу с цитронеллой.

Вы также можете обратиться к эфирным маслам гвоздики, лемонграсса и герани. Их можно смешать с водой, чтобы получить репеллентный спрей, который можно применять для отпугивания ос с территории во время мероприятия, например, на пикнике или на свадьбе на открытом воздухе, — продолжает Брайан.

Попробуйте свечу с цитронеллой, чтобы отпугнуть ос

(Изображение предоставлено Мирей Рой/Moment/Getty Images)

чтобы удержать их от испорченного настроения, нужно держать еду и напитки закрытыми, насколько это возможно.

Для начала держите мусорные баки на заднем дворе плотно закрытыми и подальше от зоны отдыха. И, когда дело доходит до обедов на открытом воздухе, не оставляйте еду на открытом воздухе: накрывайте тарелки после того, как они были поданы, и сразу же убирайте пустые тарелки и остатки пищи.

Любая открытая еда привлечет ос

(Изображение предоставлено: Michael Schwalbe/EyeEm/Getty Images)

свой дом, а затем подумайте об установке москитных сеток на двери и окна, предлагает Aviva.

Они легко крепятся, недороги и позволят вам поддерживать летний ветерок, не беспокоясь о гудящих злоумышленниках. Вы всегда можете снять их снова в более прохладные месяцы.

Прикрепляемые сетки могут предотвратить проникновение ос в ваш дом

(Изображение предоставлено Ольгой Иониной/Alamy Stock Photo)

Менеджер по структурной борьбе с вредителями в SSC.

«Есть ловушки, которые можно купить для ос, но есть много самодельных ловушек, которые также могут быть очень эффективными», — говорит он.

Один из самых популярных способов сделать это своими руками — отрезать верхнюю часть пластиковой бутылки, перевернуть ее вверх дном, а затем снова прикрепить к нижней части лентой, чтобы она служила воронкой. Смажьте внутреннюю часть обеих секций, прежде чем соединить их вместе, используя масло, чтобы осы не вылезли наружу. Затем в сосуд насыпают приманку, чтобы заманить насекомых. Брайан рекомендует белки, такие как мясо для обеда, или сладости, такие как мед, или желе и джемы. «Добавьте немного уксуса, чтобы пчелы не попадали в ловушки», — добавляет он.

Затем вы можете повесить ловушку на дереве или заборе сада (на безопасном расстоянии от зоны отдыха), аккуратно проделав отверстия в верхней части и прикрепив веревку.

Ловушки могут пригодиться, если вам нужно знать, как избавиться от пчел-плотников.

Вы можете купить ловушки в Интернете или в магазине, или сделать их самостоятельно

(Изображение предоставлено garfotos/Alamy Stock Photo)

большая проблема, чем нечетная одна или две, то вам нужно будет использовать другой подход при решении вопроса о том, как избавиться от ос.

Помните, что массово эти насекомые могут быть очень опасны, и вам никогда не следует иметь дело с осиным гнездом, если вы думаете, что у вас может быть аллергия на укусы, советует BPCA. Таким образом, как говорит Aviva, самым безопасным и разумным способом действий было бы обратиться в профессиональную компанию по борьбе с вредителями или в вашу страховую компанию, если у вас есть подходящее покрытие. Они смогут лечить и уничтожать ос.

Если вы уверены, что сможете справиться с заражением самостоятельно, вам следует обратиться к имеющимся в продаже инсектицидам. Они могут быть эффективны при работе с небольшими гнездами ранней весной, говорит BPCA, однако они вряд ли помогут с большим укоренившимся гнездом — для этого вам нужно обратиться к профессионалам.

Если у вас большие проблемы с осами, лучше вызвать профессионалов

(Изображение предоставлено laurentiu iordache/Alamy Stock Photo)

«Безопасность должна стоять на первом месте при уничтожении ос, — говорит Брайан МакГи из SSC. «Средства индивидуальной защиты (СИЗ) для этой задачи могут включать защитную одежду, такую ​​как хлопковый комбинезон, перчатки, защитные очки/очки/маску для лица, шапку/капюшон/вуаль и даже защитную обувь.

«Предметы, необходимые для работы, могут включать в себя лестницы, тряпки, удлинители, скребки, шпатели, пистолеты для герметиков, аппликаторы пены, головки для удаления паутины, мешки для мусора и специальные адаптеры для удлинителей аэрозольных столбов», — продолжает он. «Иногда для доступа к местам, где осы решили построить гнезда, необходимы электроинструменты, такие как дрели или пилы. Вам даже могут понадобиться водяные шланги с распылителями на концах или мойки высокого давления, чтобы удалить некоторые типы гнезд».

Аэрозоли являются наиболее часто используемым продуктом для удаления ос, говорит Брайан. К преимуществам такого подхода можно отнести быструю доставку — некоторые из этих продуктов могут быть практически мгновенными. Более того, эти продукты часто можно наносить с расстояния до 25 футов и более с помощью удлинительной штанги и аэрозольного удлинительного адаптера, что обеспечивает еще большую защиту. «Недостатки заключаются в том, что они могут быть грязными и могут дрейфовать в нецелевые районы, когда играет роль ветер, — добавляет Брайан, — и они могут быть плохим выбором для ос в трещинах или пустотах».

• Нужны дополнительные советы по отпугиванию вредителей? Наших руководств о том, как избавиться от тли и как избавиться от слизней в саду, много.

Даже одна или две осы могут разрушить расслабляющую атмосферу

(Изображение предоставлено: James Harris/EyeEm/Getty Images) узнать, как избавиться от ос в больших масштабах. «Это отличный выбор для обработки пустот, таких как стены», — говорит Брайан МакГи из SSC. «Они не обеспечивают быстрого нокдауна аэрозоля, но обладают высокой остаточной эффективностью.

‘Одним из моих фаворитов является DeltaDust — несколько струй этой водостойкой пыли из сильфонной тряпки в трещину или пустоту могут обеспечить превосходный контроль, который может быть эффективен до года’.

Не забывайте, что химические вещества, содержащиеся как в аэрозолях, так и в инсектицидной пыли, могут оказывать неблагоприятное воздействие как на полезных опылителей, так и на ос. Как говорит Авива, «убедитесь, что любые методы борьбы предназначены только для борьбы с заражением осами и не наносят вреда другим насекомым». Держите их подальше от детей и домашних животных. Говоря об этом, наши руководства о том, как спроектировать сад, подходящий для детей, и о самых ядовитых растениях для собак полны полезных советов, как сделать ваших близких счастливыми и безопасными.

Инсектицидная пыль и аэрозоли могут быть эффективными средствами для избавления от ос, но будьте очень осторожны при их использовании

(Изображение предоставлено: Шарон Вос-Арнольд/Moment/Getty Images) осиное гнездо?

Если вы не совсем уверены, что ищете, когда дело доходит до обнаружения осиного гнезда, Авива объясняет:

1. Остерегайтесь роящихся насекомых дома в летние месяцы, но большее количество или рой указывают на то, что где-то поблизости может быть гнездо», — говорит Авива. Чтобы определить местонахождение гнезда, внимательно следите за траекторией полета ос, возвращающихся к вашему участку, саду, гаражу или даже сараю. Это легче заметить в летние месяцы, так как осы гораздо активнее.
2. Прислушайтесь к жужжанию  ‘Осы очень громко жужжат, строя свои гнезда, – объясняет Авива. «Часто вы сможете услышать признаки активности». Гнездо не видно? Громкий непрерывный шум может указывать на то, что кто-то спрятан на чердаке или вне поля зрения на участке.
3. Следите за физическими структурами  Осиные гнезда обычно коричневого или серого цвета и могут напоминать мяч для регби или воздушный шар, говорит Авива. Закрученный узор, как правило, виден снаружи гнезда, а точка входа обычно видна внизу.

Рекомендуется регулярно проверять свое имущество, чтобы убедиться, что все трещины и щели в вашем доме или сарае закрыты, добавляет Авива. Это поможет предотвратить проникновение ос и создание гнезда.

• Если вы имеете дело с более крупными злоумышленниками, чем осы, вам может пригодиться наше руководство о том, как избавиться от скунсов в вашем дворе.

Осиное гнездо коричневого или серого цвета

(Изображение предоставлено: Johner Images/Getty Images)

Что делать после обработки осиного гнезда?

Если вы справились с испытанием на наличие ос самостоятельно, вам нужно выполнить несколько работ по очистке, как советует Aviva:

1. нецелевые животные, такие как птицы, от воздействия, и удалите гнездо.
2. Удаление гнезда может быть таким же простым, как сбивание бумажного гнезда рукой в ​​перчатке, или может быть связано с выполнением строительных работ по ремонту карнизов, чтобы предотвратить проникновение ос.
3. Всегда герметизируйте все отверстия, через которые осы могут получить доступ к конструкции, чтобы предотвратить заражение в будущем. Здесь на помощь могут прийти скребки, удлинители, шпатели, пистолеты для герметиков, монтажная пена и даже мойки высокого давления.

«В заключение, берегите себя», — добавляют они. Если в какой-то момент вы почувствуете, что задача слишком сложна для выполнения самостоятельно, позвоните квалифицированному и уважаемому специалисту по борьбе с вредителями в вашем регионе.

Сад всегда был большой частью жизни Холли, когда она росла, как и окружающий Новый Лес, где она жила. С тех пор ее любовь к природе только возросла. Она была хранителем земельного участка, профессиональным садовником и ботаническим иллюстратором – ее страстью являются растения.

Тирозиновое фосфорилирование WIP высвобождает связанный WASP и нарушает сборку подосом в макрофагах | Journal of Cell Science

Пропустить пункт назначения

ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ СТАТЬЯ| 15 января 2015 г.

Винита Виджаякумар,

Джеймс Монипенни,

Син Джуди Чен,

Лаура М. Мачески,

Серхио Лилла,

Адриан Дж. Трэшер,

Инес М. Антон,

Иоланда Калле,

Гарет Э. Джонс

Информация об авторе и статье

*

Текущий адрес: Факультет естественных наук, Университет Рохэмптона, Лондон, SW15 4JD, Великобритания.

‡

Эти авторы внесли одинаковый вклад в эту работу

§Автор для корреспонденции ([email protected])

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Полученный: 10 апр 2014

Принято: 07 ноя 2014

Интернет номер: 1477-9137

Номер печати: 0021-9533

© 2015 г. Опубликовано The Company of Biologist Ltd. /licenses/by/3.0), что разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что оригинальная работа правильно указана.

J Cell Sci (2015) 128 (2): 251–265.

https://doi.org/10.1242/jcs.154880

История статьи

Получено:

10 апреля 2014 г.

Принято:

7 ноября 2014 г.

• Разделенный экран
• Просмотры
  • Содержание артикула
  • Рисунки и таблицы
  • Видео
  • Аудио
  • Дополнительные данные
  • Экспертная оценка
• PDF ПДФ+СИ
• Значок версии статьи Версии
  • Версия записи 15 января 2015 г.
  • Принятая рукопись 01 января 2014 г.
• Делиться
  • MailTo
  • Твиттер
  • LinkedIn
• Инструменты

  • Получить разрешения

  • Иконка Цитировать Цитировать

• Поиск по сайту

Citation

Винита Виджаякумар, Джеймс Монипенни, Син Джуди Чен, Лаура М. Мачески, Серджио Лилла, Адриан Дж. Трэшер, Инес М. Антон, Иоланда Калле, Гарет Э. Джонс; Тирозиновое фосфорилирование WIP высвобождает связанный WASP и нарушает сборку подосом в макрофагах. J Cell Sci 15 января 2015 г.; 128 (2): 251–265. doi: https://doi.org/10.1242/jcs.154880

Скачать файл цитаты:

• Ris (Zotero)
• Менеджер ссылок
• EasyBib
• Подставки для книг
• Менделей
• Бумаги
• Конечная примечание
• RefWorks
• Бибтекс

панель инструментов поиска

Расширенный поиск

Подосомы представляют собой интегринсодержащие адгезивные структуры, обычно обнаруживаемые в мигрирующих лейкоцитах моноцитарной линии. Актиновая цитоскелетная организация подосом основана на WASP- и Arp2/3-опосредованном механизме. WASP также связывается со вторым белком, WIP (также известным как WIPF1), и они совместно локализуются в ядрах подосом. Здесь мы впервые сообщаем, что WIP может фосфорилироваться по остаткам тирозина и что тирозиновое фосфорилирование WIP является триггером для высвобождения WASP из комплекса WIP-WASP. Используя подход нокдауна вместе с экспрессией фосфомиметиков WIP, мы показываем, что в отсутствие связывания WIP-WASP клеточный WASP быстро деградирует, что приводит к разрушению подосом и неспособности клеток деградировать нижележащий матрикс. В отсутствие фосфорилирования тирозина комплекс WIP-WASP остается интактным, а время жизни подосом увеличивается. Скрининг киназ-кандидатов и анализы на основе ингибиторов идентифицировали тирозинкиназу Брутона (Btk) как регулятор фосфорилирования тирозина WIP. Мы пришли к выводу, что тирозиновое фосфорилирование WIP является важным регулятором стабильности WASP и действует как фактор, способствующий нуклеации актина.

Ключевые слова:

Незавершенное производство, WIPF1, фосфорилирование тирозина, подосоме, актиновый цитоскелет, Макрофаги, Деградация матрикса

Адгезия и миграция клеток, происходящих из моноцитов, регулируются богатыми актином интегринсодержащими структурами, называемыми подосомами (Calle et al. , 2006; Linder and Aepfelbacher, 2003). Быстрое образование и оборот подосом во время миграции зависит от действия белка синдрома Вискотта-Олдрича (WASP) (Calle et al., 2004b; Calle et al., 2004a), ключевого регулятора Arp2/3-зависимых de novo полимеризация актина (Millard et al., 2004). В клетках WASP связан с белком, взаимодействующим с WASP (WIP, также известным как WIPF1) (Stewart et al., 1999; Ramesh et al., 1997), многофункциональным адаптером, участвующим в широком спектре клеточных функций, включая клеточные функции. адгезию, миграцию и хемотаксис, активацию и пролиферацию Т-клеток и внутриклеточную подвижность патогенов (Anton and Jones, 2006; Antón et al., 2007; Moreau et al., 2000). WIP функционирует посредством связывания как с глобулярным, так и с филаментным актином (Martinez-Quiles et al., 2001) и несколькими регуляторами динамики актина (Antón et al., 19).98). WIP также может связываться и регулировать функцию фактора, способствующего нуклеации актина, кортактина (Kinley et al. , 2003; Bañón-Rodríguez et al., 2011). В клетках гемопоэтического происхождения WIP является важным регулятором WASP, экспрессия которого ограничена клетками этой линии. WASP незаменим для нормальной функции лейкоцитов, и его значение подчеркивается при врожденном заболевании, синдроме Вискотта-Олдрича, при котором миссенс-мутации в гене WAS приводят к тяжелому иммунодефициту (Derry et al., 19).94; Окс и Трэшер, 2006 г.; Трэшер и Бернс, 2010).

WIP регулирует уровни экспрессии WASP путем связывания и защиты WASP от деградации, опосредованной кальпаином и/или протеасомами (Blundell et al., 2009; Chou et al., 2006; de la Fuente et al., 2007; Macpherson et al. ., 2012). В условиях покоя большинство WASP образует комплекс с WIP, и любой несвязанный WASP быстро подвергается деградации (Tsuboi, 2007; Konno et al., 2007; Macpherson et al., 2012). Учитывая решающую роль WASP в функционировании иммунных клеток, неудивительно, что мутации в WASP, которые нарушают или отменяют связывание WIP, приводят к иммунологическим нарушениям различной степени тяжести (Kim et al. , 2004; Stewart et al., 19).99). WIP-нулевые дендритные клетки мыши демонстрируют дефекты полярности, хемотаксиса и организации цитоскелета (Bañón-Rodríguez et al., 2011; Chou et al., 2006), фенотипы напоминают фенотипы, обнаруженные для WASP-нулевых дендритных клеток (Burns et al., 2001; Calle et al., 2004a) и макрофаги (Jones et al., 2002; Zicha et al., 1998). Важно отметить, что WIP и WASP необходимы для сборки и оборота подосом, богатых актином адгезий, участвующих в инвазии и ремоделировании матрикса профессиональных мигрирующих клеток, таких как макрофаги, дендритные клетки и остеокласты (Calle et al., 2004b; Chabadel et al. , 2007). Макрофаги и дендритные клетки пациентов с СВО не могут образовывать подосомы, и это, вероятно, является основным фактором, способствующим нарушению переноса и иммунного надзора за этими клетками, что характерно для этого заболевания (Bouma et al., 2009).; Бернс и др., 2004 г.; Джонс и др., 2002 г.; Трэшер, 2002).

Хотя способность WIP защищать WASP от протеолитической деградации жизненно важна для функции WASP при формировании подосом, также было показано, что WIP вносит непосредственный вклад в регуляцию этих структур, направляя WASP в места сборки подосом (Chou et al. , 2006). Таким образом, механизмы, которые контролируют взаимодействие WIP-WASP, имеют решающее значение для регуляции функции подосом и, следовательно, нормальной биологии лейкоцитов, поскольку они влияют как на локализацию, так и на обмен WASP. Однако природа регуляторных механизмов, контролирующих функцию WIP, остается неясной. Фосфорилирование представляет собой сильного кандидата на регуляцию функции WIP, поскольку исследования показали серин/треониновое фосфорилирование WIP по ряду остатков (Dong et al., 2007; Krzewski et al., 2006; Sasahara et al., 2002; Shu et al. др., 2004). Из них только S488 был основой любого функционального исследования (Dong et al., 2007; Krzewski et al., 2006; Sasahara et al., 2002), при этом сообщалось, что он фосфорилируется PKCθ-зависимым образом в ответ на к активации Т-клеточного рецептора (Sasahara et al., 2002). S488 находится непосредственно ниже WASP-связывающего домена (WBD) WIP (аминокислоты 451–485) (Volkman et al., 2002; Zettl and Way, 2002), и первоначально предполагалось, что фосфорилирование этого остатка приводит к диссоциации комплекс WIP-WASP (Sasahara et al. , 2002). Однако последующие исследования как на клетках Jurkat (Dong et al., 2007), так и на линии естественных клеток-киллеров YTS (Krzewski et al., 2006) показали, что WIP и WASP могут оставаться связанными вместе после фосфорилирования этого остатка, а функциональная значение этого события фосфорилирования было рассмотрено только недавно (Fried et al., 2014).

В этом исследовании мы приводим доказательства тирозинового фосфорилирования WIP как механизма нарушения ассоциации WIP-WASP. Мы демонстрируем, что фосфомиметические, но не нефосфорилируемые мутации остатков тирозина в WBD WIP отменяют связывание WASP, не могут защитить WASP от деградации и имеют дефекты в их способности восстанавливать образование подосом и их свойства деградации матрикса при экспрессии в клетках с нокдауном WIP. Наоборот, экспрессия мутантов дикого типа и нефосфорилируемых мутантов в клетках с нокдауном WIP приводит к восстановлению подосом и деградации матрикса. Однозначное подтверждение фосфорилирования остатков тирозина в WBD WIP было получено с помощью масс-спектроскопии. Скрининг тирозинкиназ-кандидатов и последующие анализы низкомолекулярных ингибиторов и киназ идентифицировали тирозинкиназу Брутона (Btk) как эффектор фосфорилирования тирозина WIP. Взятые вместе, наши результаты предоставляют доказательства фосфорилирования тирозина WIP как механизма регуляции ассоциации WIP-WASP и функции подосом в клетках моноцитарной линии.

Предполагаемые сайты серин/треонинового фосфорилирования в WIP не регулируют ассоциацию WIP-WASP

В ряде исследований сообщалось о серин/треониновом фосфорилировании WIP по остаткам, которые лежат внутри или рядом с NCK- и WASP-связывающими доменами (рис. . 1A, желтые остатки). NCK является вездесущей адаптерной молекулой, которая, как известно, способствует активации N-WASP-WASP и высвобождению ее автоингибируемой конформации (Rohatgi et al., 2001). PKCθ-зависимое фосфорилирование S488 WIP в ответ на активацию Т-клеточного рецептора было продемонстрировано в Т-клетках Jurkat (Dong et al. , 2007), но все больше данных указывает на то, что это не связано с разрушением комплекса WIP-WASP. как предполагалось ранее (Sasahara et al., 2002). В моноцитарной клеточной линии THP-1 мы демонстрируем, что WASP связан как с нефосфорилируемыми, так и с фосфомиметическими вариантами S488, предполагая, что фосфорилирование этого остатка не связано с диссоциацией комплекса WIP-WASP в моноцитарных клетках (рис.   1B). Мы также решили проверить способность других ранее подозреваемых фосфорилируемых остатков серина/треонина. Экспрессия двух конструкций WIP, которые придают либо нефосфорилируемые, либо фосфомиметические мутации для пяти остатков серина/треонина (S340, S342, S344, T345 и S350), ранее идентифицированных как фосфорилированные в протеомных скринингах (Shu et al., 2004), также была способна к иммунопреципитации. ОСА. Эти результаты предполагают, что серин/треониновое фосфорилирование WIP и, в частности, фосфорилирование S488, которое находится близко к WBD WIP, не нарушает взаимодействие WIP-WASP.

Рис. 1.

Увеличить Загрузить слайд

Доказательства тирозинового фосфорилирования WIP. (A) Схема человеческого WIP, изображающая как известные, так и предполагаемые сайты фосфорилирования и их положение по отношению к функциональным доменам. Также показаны аминокислотные последовательности, представляющие области функционального значения, подчеркивая близость соответствующих сайтов фосфорилирования. Остатки серина/треонина отмечены желтым цветом, а остатки тирозина – зеленым. (B) Вестерн-блоты из анализов иммунопреципитации, изучающие важность предполагаемых сайтов фосфорилирования серина / треонина WIP в определении связывания WASP. Варианты WIP-EGFP, кодирующие фосфомиметические серин/треониновые (серин в аспарагиновую кислоту) и нефосфорилируемые мутации (серин в аланин), были экспрессированы в клетках THP-1 с использованием лентивирусной трансдукции генов. Экзогенно экспрессированный белок затем подвергали иммунопреципитации (IP) с антителом против GFP для определения количества связанного эндогенного WASP. WIP дикого типа и WIP без С-концевого WBD (ΔWBD) были включены в качестве положительного и отрицательного контроля соответственно. (C) Вестерн-блоты из анализов иммунопреципитации, чтобы определить, представляют ли тирозиновые остатки WIP мишени для фосфорилирования. Слитые белки WIP-EGFP со всеми или отдельными остатками тирозина, замененными нефосфорилируемым миметиком фенилаланином, иммунопреципитировали из лизатов THP-1 после предварительной обработки клеток перванадатом. Иммунопреципитированные варианты WIP дикого типа и нефосфорилируемые варианты затем исследовали на предмет фосфорилирования тирозина с помощью вестерн-блоттинга. (D) Вестерн-блоты из анализов иммунопреципитации, изучающие важность остатков тирозина WIP в определении связывания WASP. Слияния WIP-EGFP, содержащие нефосфорилируемые (левая панель) и фосфомиметические (правая панель) мутации тирозина, иммунопреципитировали из лизатов THP-1, а связывание WASP впоследствии оценивали, как в B.

Рис. 1.

Увеличить Загрузить слайд

Доказательства тирозинового фосфорилирования WIP. (A) Схема человеческого WIP, изображающая как известные, так и предполагаемые сайты фосфорилирования и их положение по отношению к функциональным доменам. Также показаны аминокислотные последовательности, представляющие области функционального значения, подчеркивая близость соответствующих сайтов фосфорилирования. Остатки серина/треонина отмечены желтым цветом, а остатки тирозина – зеленым. (B) Вестерн-блоты из анализов иммунопреципитации, изучающие важность предполагаемых сайтов фосфорилирования серина / треонина WIP в определении связывания WASP. Варианты WIP-EGFP, кодирующие фосфомиметические серин/треониновые (серин в аспарагиновую кислоту) и нефосфорилируемые мутации (серин в аланин), были экспрессированы в клетках THP-1 с использованием лентивирусной трансдукции генов. Экзогенно экспрессированный белок затем подвергали иммунопреципитации (IP) с антителом против GFP для определения количества связанного эндогенного WASP. WIP дикого типа и WIP без С-концевого WBD (ΔWBD) были включены в качестве положительного и отрицательного контроля соответственно. (C) Вестерн-блоты из анализов иммунопреципитации, чтобы определить, представляют ли тирозиновые остатки WIP мишени для фосфорилирования. Слитые белки WIP-EGFP со всеми или отдельными остатками тирозина, замененными нефосфорилируемым миметиком фенилаланином, иммунопреципитировали из лизатов THP-1 после предварительной обработки клеток перванадатом. Иммунопреципитированные варианты WIP дикого типа и нефосфорилируемые варианты затем исследовали на предмет фосфорилирования тирозина с помощью вестерн-блоттинга. (D) Вестерн-блоты из анализов иммунопреципитации, изучающие важность остатков тирозина WIP в определении связывания WASP. Слияния WIP-EGFP, содержащие нефосфорилируемые (левая панель) и фосфомиметические (правая панель) мутации тирозина, иммунопреципитировали из лизатов THP-1, а связывание WASP впоследствии оценивали, как в B.

Доказательства фосфорилирования остатков тирозина в пределах WBD WIP в клетках THP-1

Хотя о сериновом фосфорилировании WIP сообщалось, в настоящее время ничего не известно о потенциальной роли фосфорилирования тирозина в регуляции функции WIP. WIP человека содержит три тирозиновых остатка, Y455, Y468 и Y475, которые расположены в непосредственной близости друг от друга либо внутри, либо рядом с функционально важными областями внутри WBD WIP (рис.   1A, зеленые остатки).

Чтобы определить, является ли WIP фосфорилированным по тирозину, меченные EGFP версии WIP дикого типа [WIP(WT)], нефосфорилируемые мутанты WIP Y455F, Y468F и Y475F, а также тройной нефосфорилируемый мутант Y455F/Y468F/Y475F (Y455/ 468/475F) стабильно экспрессировались в клетках THP-1 после лентивирусной трансдукции. В качестве отрицательного контроля также были включены клетки, экспрессирующие либо EGFP, либо укороченный мутант WIP, лишенный остатков 450–503 [WIP(ΔWBD)–EGFP], включающих WBD и, следовательно, все остатки тирозина. Слитые белки EGFP иммунопреципитировали из лизатов TGFβ1-дифференцированных клеток THP-1, предварительно обработанных перванадатом, с использованием антитела против GFP. Полоса фосфотирозина, соответствующая размеру слитого белка WIP-EGFP, четко наблюдалась для клеток, экспрессирующих белок дикого типа (рис.   1C). Однако интенсивность этой полосы была значительно снижена для клеток, экспрессирующих либо тройной нефосфорилируемый мутант Y455/468/475F, либо одиночный мутант Y455F, и была такой же интенсивности, как и у отрицательного контроля WIP(ΔWBD)-EGFP. Интенсивность соответствующей полосы для мутантов Y468F и Y475F также была снижена по сравнению с таковой для контроля дикого типа, но не до такой степени, которая наблюдалась для тройных нефосфорилируемых мутантов Y455F или Y455/468/475F. Эти результаты показывают, что WIP может быть фосфорилирован по нескольким остаткам тирозина, и привели нас к программе открытия с использованием масс-спектроскопии.

Триптический гидролизат обработанного перванадатом клеточного лизата THP-1, экспрессирующего WIP(WT)–EGFP, очищали с помощью гранул GFP-TRAP-A, готовили и анализировали с помощью масс-спектрометрии в условиях, описанных в материалах и методах. Последовательность слитого белка WIP-EGFP была идентифицирована с 73 уникальными пептидами, что составляет 88% охвата последовательностей: среди них также были обнаружены пять уникальных фосфопептидов. Все идентифицированные фосфопептиды были отнесены к последовательности «члена семейства белков, взаимодействующих с WAS / WASL 1» (WIPF1; код UniProt O43516) и представлены в таблице 1. Каждый сайт фосфорилирования WIP был подтвержден вручную с учетом результатов Mascot и Andromeda. О фосфорилировании остатков S234, S342, Y468 и Y455 не сообщается в базах данных сайтов фосфорилирования Uniprot, Phosida или Phospho.elm. В нашем исследовании было обнаружено, что два из трех остатков тирозина, присутствующих в последовательности WIP, фосфорилированы. Часть последовательности, содержащая Y475, включена в триптический пептид слишком мала, чтобы ее можно было обнаружить в условиях, выбранных для анализа. Однако был обнаружен пептид, содержащий остатки 474–481, содержащие одно неправильное расщепление трипсином на К478, но не было убедительных доказательств существования фосфорилированной формы этого пептида. Эти результаты показывают, что клеточный WIP фосфорилирован по Y455 и Y468, что можно легко обнаружить in situ с помощью масс-спектрометрии.

Таблица 1.

Идентификация двух сайтов фосфорилирования тирозина в WBD WIP человека

Сайты фосфорилирования в WIP-EGFP, идентифицированные поисковыми системами Mascot и Andromeda по данным, полученным в линейной ионной ловушке (CID) и/или выше энергетическая диссоциация столкновения (HCD). Фосфорилированные аминокислоты выделены жирным подчеркнутым шрифтом. Часть последовательности, содержащая Y475, включена в триптический пептид слишком мала, чтобы ее можно было обнаружить в условиях, выбранных для анализа. Однако был обнаружен пептид (474–481), содержащий одно неправильное расщепление трипсина на К478, но не было никаких доказательств фосфорилированной формы этого пептида. Начало, конец и положение фосфата пептида соответствуют данным, указанным для члена семейства 1 белка, взаимодействующего с WAS/WASL (код UniProt O43516). Rt, время удерживания.

View Large

Тирозиновые мутанты WIP с дефицитом связывания WASP вызывают дефекты как сборки подосом, так и функционирования в клетках THP-1

EGFP иммунопреципитировали из лизатов THP-1, а количество ассоциированных WASP затем определяли вестерн-блоттингом. Нефосфорилируемые варианты WIP Y455F, Y468F и Y475F, а также тройной нефосфорилируемый вариант Y455/468/475F прочно связывались с WASP и могли иммунопреципитировать WASP в той же степени, что и белок дикого типа (рис. 1D, слева). Клетки, экспрессирующие мутант WIP(ΔWBD)-EGFP, обеспечивали отрицательный контроль, демонстрируя, что в отсутствие WBD WIP WASP не обнаруживается в иммунопреципитатах. В отличие от результатов, полученных для нефосфорилируемых мутантов, WASP не обнаруживался в иммунопреципитатах клеток, экспрессирующих EGFP-меченный тройной фосфомиметический мутант WIP Y455E/Y468E/Y475E (Y455/468/475E), и в следовых количествах в клетках, экспрессирующих WIP(Y468E). )–мутант EGFP, что указывает на то, что эти мутации в WIP нарушают связывание WASP (рис.   1D, справа). В соответствии с этими выводами уровни эндогенного WASP были повышены в клетках, сверхэкспрессирующих WIP, но не в клетках, экспрессирующих фосфомиметические мутанты Y455/468/475E или Y468E или укороченный мутант WIP(ΔWBD)–EGFP или контроль EGFP с дефицитом связывания WASP, что указывает на то, что эти фосфомиметические мутанты были менее эффективны в обеспечении защитного эффекта от протеолитической деградации эндогенных WASP.

Чтобы определить роль фосфорилирования WIP в формировании подосом, мы использовали модель TGFβ1-зависимой дифференцировки клеток THP-1 в макрофаги, как описано ранее (Monypenny et al., 2011) (дополнительный материал, рис. S1; дополнительный материал). Фильм 1). Опосредованная лентивирусами доставка короткой шпилечной РНК (shRNA) использовалась для создания стабильных клеточных линий THP-1, истощенных WIP (дополнительный материал, рис. S2). Из пяти отдельных лентивирусных векторов кшРНК, специфичных для WIP, оцененных в этом исследовании, было обнаружено, что два значительно снижают уровни WIP в клетках THP-1 (дополнительный материал, рис. S2A). Последующая селекция клонов, экспрессирующих кшРНК THP-1, которые продемонстрировали чрезвычайно эффективный нокдаун WIP (относительная экспрессия ~20% от контроля), позволила получить стабильные клеточные линии THP-1, в которых эндогенные уровни WIP были сильно истощены (дополнительный материал, рис. S2A). , правая панель). Как показано в других миелоидных клетках, потеря экспрессии WIP привела к значительному сокращению как количества клеток, образующих подосомы (дополнительный материал, рис. S2B), так и количества подосом, наблюдаемых на клетку (дополнительный материал, рис. S2C). Более того, когда в нокдаунных клетках наблюдалось очень мало «подосомоподобных» структур, они были маленькими и гораздо менее отчетливыми, чем у контрольных клеток (дополнительный материал, рис. S2C), и не могли разрушать внеклеточный матрикс (дополнительный материал, рис. S2D, Е). Экспрессия устойчивого к нокдауну варианта WIP(WT)-EGFP в клетках THP-1 с нокдауном WIP приводила к восстановлению подосом в этих клетках, подтверждая, что потеря образования подосом может быть напрямую связана с потерей эндогенной экспрессии WIP (сравните дополнительные материал Фильмы 2 и 3).

В дополнение к белку дикого типа, устойчивые к нокдауну варианты фосфомутантов Y468E, Y455/468E, Y455/468/475E и Y455/468/475F WIP [WIP(WT)–EGFP ^RES , WIP(Y468E )–EGFP ^RES , WIP(Y455/468E)–EGFP ^RES , WIP(Y455/468/475E)–EGFP ^RES и WIP(Y455/468/475F)–EGFP ^RES соответственно] также генерируется и экспрессируется в клетках THP-1 с нокдауном WIP посредством доставки генов, опосредованной лентивирусами. Затем была оценена способность белка дикого типа и различных мутантов как связывать, так и восстанавливать эндогенные уровни WASP в клетках THP-1 (рис. 2А). Устойчивый к нокдауну белок дикого типа и только EGFP обеспечивали положительный и отрицательный контроль соответственно. Спасательные эксперименты показали, что, хотя устойчивый к нокдауну белок дикого типа и нефосфорилируемый мутант Y455/468/475F WIP были способны как связывать, так и восстанавливать эндогенный WASP до уровня, сходного с уровнем, обнаруженным для контрольных клеток, одиночный Y468E, двойной Y455/468E и тройные Y455/468/475E фосфомиметические мутанты WIP были дефектны в связывании WASP, а также в их способности восстанавливать эндогенные уровни WASP. Мы также изучили динамику подосом в клетках, экспрессирующих WIP дикого типа или WIP Y468F, в качестве считывания клеток способности нефосфорилируемых мутантов WIP сохранять связывание WASP (рис.   2A, B). Оба типа клеток генерировали подосомы, как и предсказывалось на основании данных на рис.   2, но их поведение заметно различалось. Рис.   3A и дополнительный материал. Фильмы 4 и 5 показывают, что клетки WIP Y468F, по-видимому, имеют заметно больше подосом, чем клетки, экспрессирующие WIP дикого типа. Мы количественно оценили это с помощью фильмов с живыми клетками, как описано в Материалах и методах, чтобы показать, что время жизни отдельных подосом увеличивается в клетках WIP Y468F (рис.   3B-D), наблюдение, которое мы подтвердили с тройным нефосфорилируемым мутантом (не показано) . Таким образом, наблюдается прямая корреляция между вызванным мутацией сохранением связывания WIP-WASP и увеличенной стабильностью времени жизни подосом.

Рис. 2.

Увеличить Загрузить слайд

Спасение эндогенных WASP и последующее формирование подосом с помощью фосфомутантных вариантов WIP. (A) Вестерн-блоты, демонстрирующие количество эндогенного WASP, иммунопреципитированного устойчивым к нокдауну контролем WIP-EGFP, а также фосфомиметические и нефосфорилируемые варианты, повторно экспрессированные в клетках THP-1 с нокдауном WIP. (B) Процент контрольных и нокдаунных WIP THP-1, образующих подосомы после реэкспрессии устойчивых к нокдауну WIP-EGFP контрольных и фосфомиметических вариантов. NTC, контрольная кшРНК. Данные средние ± стандартная ошибка среднего. (C) Графики в виде прямоугольников и усов, суммирующие количество подосом для тех клеток, которые, как было обнаружено, образуют подосомы в B. Прямоугольник представляет 25–75-й процентили, и указана медиана. Усы показывают 10–90-й процентиль. Также указываются выбросы. ** Р <0,01; *** Р <0,001; ns, не значимо (тест Стьюдента t ).

Рис. 2.

Увеличить Загрузить слайд

Спасение эндогенных WASP и последующее образование подосом с помощью фосфомутантных вариантов WIP. (A) Вестерн-блоты, демонстрирующие количество эндогенного WASP, иммунопреципитированного устойчивым к нокдауну контролем WIP-EGFP, а также фосфомиметические и нефосфорилируемые варианты, повторно экспрессированные в клетках THP-1 с нокдауном WIP. (B) Процент контрольных и нокдаунных WIP THP-1, образующих подосомы после реэкспрессии устойчивых к нокдауну WIP-EGFP контрольных и фосфомиметических вариантов. NTC, контрольная кшРНК. Данные средние ± стандартная ошибка среднего. (C) Графики в виде прямоугольников и усов, суммирующие количество подосом для тех клеток, которые, как было обнаружено, образуют подосомы в B. Прямоугольник представляет 25–75-й процентили, и указана медиана. Усы показывают 10–90-й процентиль. Также указываются выбросы. ** Р <0,01; *** Р <0,001; ns, не значимо (тест Стьюдента t ).

Рис. 3.

Увеличить Загрузить слайд

Ингибирование фосфорилирования тирозина WIP повышает стабильность подосом в THP-1. (A) Экспрессия WIP(Y468F)-EGFP приводит к повышенной стабильности подосом в THP-1 по сравнению с контролем дикого типа. Белые стрелки на верхней панели выделяют область образования новых подосом с течением времени в клетке THP-1, экспрессирующей WIP(WT)-EGFP, тогда как пустая стрелка выделяет область, в которой одновременно происходит разборка подосом. Подосомы в клетках, экспрессирующих WIP(Y468F)-EGFP (нижняя панель), остаются более стабильными с течением времени. (B) Диаграммы Box-and-Whisker индекса оборота адгезии подосом. Прямоугольник представляет 25–75-й процентили с указанием медианы. Усы показывают 10–90-й процентиль. Также указываются выбросы. *** P <0,005 (критерий Манна–Уитни). (C) Композиты для анализа общего оборота адгезии. Области пикселей светло-серого цвета представляют динамические спайки, тогда как области пикселей темно-серого и черного цвета представляют собой все более стабильные спайки. (D) Перекрытие с использованием нашего метода псевдоцвета для анализа оборота спаек серии из трех изображений, сделанных с интервалом 5  минут, показанных на A. Спайки, выделенные красным цветом, представляют спайки, которые разрушились после первого кадра временного цикла, тогда как зеленые или синие спайки, которые были разрушены. пространственно отличные от красных спайки образовались бы на втором и третьем кадре соответственно. Стабильные спайки без пространственной транслокации показаны белым или розовым цветом. Все изображения представлены в том же масштабе, что и на рис. 4.

Рис. 3.

Увеличить Загрузить слайд

Ингибирование фосфорилирования тирозина WIP повышает стабильность подосом в THP-1. (A) Экспрессия WIP(Y468F)-EGFP приводит к повышенной стабильности подосом в THP-1 по сравнению с контролем дикого типа. Белые стрелки на верхней панели выделяют область образования новых подосом с течением времени в клетке THP-1, экспрессирующей WIP(WT)-EGFP, тогда как пустая стрелка выделяет область, в которой одновременно происходит разборка подосом. Подосомы в клетках, экспрессирующих WIP(Y468F)-EGFP (нижняя панель), остаются более стабильными с течением времени. (B) Диаграммы Box-and-Whisker индекса оборота адгезии подосом. Прямоугольник представляет 25–75-й процентили с указанием медианы. Усы показывают 10–90-й процентиль. Также указываются выбросы. *** P <0,005 (критерий Манна–Уитни). (C) Композиты для анализа общего оборота адгезии. Области пикселей светло-серого цвета представляют динамические спайки, тогда как области пикселей темно-серого и черного цвета представляют собой все более стабильные спайки. (D) Перекрытие с использованием нашего метода псевдоцвета для анализа оборота спаек серии из трех изображений, сделанных с интервалом 5  минут, показанных на A. Спайки, выделенные красным цветом, представляют спайки, которые разрушились после первого кадра временного цикла, тогда как зеленые или синие спайки, которые были разрушены. пространственно отличные от красных спайки образовались бы на втором и третьем кадре соответственно. Стабильные спайки без пространственной транслокации показаны белым или розовым цветом. Все изображения представлены в том же масштабе, что и на рис. 4.

Интересно, что тройной мутант Y455/468/475E был менее эффективен в связывании WASP, чем двойной Y455/468E, что указывает на то, что фосфорилирование остатка Y475 влияет на взаимодействие WIP-WASP и может играть эндогенную роль, хотя данные масс-спектрометрии были не удалось подтвердить фосфорилирование этого остатка (рис. 2А; таблица 1). Последующие эксперименты были сосредоточены на одиночных Y468E и тройных фосфомиметических мутантах Y455/468/475E, поскольку они продемонстрировали наиболее выраженные эффекты.

Дальнейшие эксперименты по спасению показали, что фосфомиметические мутанты были дефектны в своей способности восстанавливать подосомы в клетках THP-1 (рис. 2B,C). Как количество клеток, образующих подосомы, так и количество подосом, наблюдаемых на клетку, были значительно снижены в клетках с нокдауном WIP, экспрессирующих тройные и одиночные (Y468E) фосфомиметические мутанты тирозина, по сравнению с клетками с нокдауном WIP, экспрессирующими белок дикого типа. Рис. 2Б,С). Тройной мутант Y455/468/475E демонстрировал больший дефект в своей способности восстанавливать подосомы, чем одиночный мутант Y468E, что соответствует остаточной способности этого мутанта связываться с WASP (рис. 1D). Это различие было еще более выраженным, когда наблюдался потенциал разрушения матрикса клеток, экспрессирующих эти мутанты. Количественный анализ деградации матрикса показал, что хотя клетки с нокдауном WIP, экспрессирующие единственный фосфомиметический мутант Y468E, действительно проявляли значительно сниженную способность к деградации матрикса, клетки, экспрессирующие тройной фосфомиметический мутант Y455/468/475E, были полностью лишены какой-либо функции, разрушающей матрикс (рис. . 4А–С).

Рис. 4.

Посмотреть большойСкачать слайд

Оценка способности форм WIP дикого типа и фосфорных мутантов восстанавливать образование подосом и функции в клетках с нокдауном WIP. (A) Широкоугольные изображения фиксированных клеток THP-1 с нокдауном WIP, повторно экспрессирующих либо устойчивый к нокдауну WIP(WT)-EGFP, либо тройной фосфомиметический мутант WIP (Y455/468/475E)-EGFP. Дополнительное окрашивание винкулином демонстрирует спасение подосом в клетках, повторно экспрессирующих WIP дикого типа, но не тройной тирозиновый фосфомиметический мутант. Вставки (желтые прямоугольники) увеличены, чтобы выделить винкулиновые кольца подосом с WIP в ядре в случае экспрессии белка дикого типа и структуры, подобные фокальной адгезии, без какой-либо значительной колокализации WIP в случае экспрессии тройного тирозинового фосфомиметического мутанта. (B) Статистическая оценка процента клеток THP-1 с нокдауном WIP, разрушающих желатиновую матрицу, меченную TRITC, после экспрессии указанных конструкций. Данные средние ± стандартная ошибка среднего. * Р <0,05, *** Р <0,001. ( C ) Репрезентативные конфокальные изображения из анализов деградации желатина, использованных для статистического анализа, обобщенного в B. Анализы желатина были выполнены для оценки способности клеток THP-1 с нокдауном WIP разлагать нижележащий TRITC-меченый желатиновый матрикс после повторной экспрессии указаны устойчивые к нокдауну конструкции. Шкала баров: 5 мкм.

Рис. 4.

Посмотреть большойСкачать слайд

Оценка способности форм WIP дикого типа и фосфомутантных форм восстанавливать образование подосом и функцию клеток с нокдауном WIP. (A) Широкоугольные изображения фиксированных клеток THP-1 с нокдауном WIP, повторно экспрессирующих либо устойчивый к нокдауну WIP(WT)-EGFP, либо тройной фосфомиметический мутант WIP (Y455/468/475E)-EGFP. Дополнительное окрашивание винкулином демонстрирует спасение подосом в клетках, повторно экспрессирующих WIP дикого типа, но не тройной тирозиновый фосфомиметический мутант. Вставки (желтые прямоугольники) увеличены, чтобы выделить винкулиновые кольца подосом с WIP в ядре в случае экспрессии белка дикого типа и структуры, подобные фокальной адгезии, без какой-либо значительной колокализации WIP в случае экспрессии тройного тирозинового фосфомиметического мутанта. (B) Статистическая оценка процента клеток THP-1 с нокдауном WIP, разрушающих желатиновую матрицу, меченную TRITC, после экспрессии указанных конструкций. Данные средние ± стандартная ошибка среднего. * Р <0,05, *** Р <0,001. ( C ) Репрезентативные конфокальные изображения из анализов деградации желатина, использованных для статистического анализа, обобщенного в B. Анализы желатина были выполнены для оценки способности клеток THP-1 с нокдауном WIP разлагать нижележащий TRITC-меченый желатиновый матрикс после повторной экспрессии указаны устойчивые к нокдауну конструкции. Шкала баров: 5 мкм.

Киназы, которые регулируют фосфорилирование тирозина WIP

Для идентификации предполагаемых киназ, ответственных за фосфорилирование тирозина WIP, службе профилирования киназ Merck Millipore было предложено выполнить in vitro скрининг кандидатных тирозинкиназ с использованием бакуловирус-экспрессированного рекомбинантного His-меченого WIP человека в качестве субстрата (рис. 5А). Хотя ряд протестированных киназ продемонстрировал некоторую степень сигнала выше фона, значительная фосфорилирующая активность наблюдалась для Lck, Hck, Lyn (все члены семейства Src) и для Btk, киназы семейства Tec. Хотя Lck (лимфоцит-специфическая протеинтирозинкиназа) не экспрессируется в THP-1 и других моноцитарных клетках (это также подтверждено для клеток THP-1, используемых в этом исследовании; данные не представлены), как Lyn, так и Hck высоко экспрессируются в THP-1. 1 клетки (наши данные, не показаны). Таким образом, Btk и эти две киназы семейства Src представляют собой наиболее вероятных кандидатов для регуляции фосфорилирования тирозина WIP на месте . Для дальнейшего изучения селективности действия тирозинкиназы на WIP мы провели исследования с нокдауном на клетках THP-1. Уровни как Hck, так и Lyn были успешно снижены ниже 15% от контрольных уровней в одиночных нокдаун-клонах (рис.   5B). Эти клетки были способны пролиферировать и делиться без видимых дефектов, и при индуцировании TGFβ1 они нормально собирали подосомы (данные не показаны). Кроме того, анализ вестерн-блоттинга совершенно отчетливо показал, что, несмотря на нокдаун киназы, уровни измеренного фосфорилирования тирозина WIP не уменьшились по сравнению с контролем (рис.   5C). Таким образом, нокдаун ни Hck, ни Lyn не имел заметного фенотипа. Напротив, несколько попыток получить клетки из культур с нокдауном Btk потерпели неудачу; клетки не пролиферировали и быстро наступала гибель клеток. Летальность нокдауна Btk делает подход недоступным для измерения степени фосфорилирования WIP с помощью вестерн-блоттинга.

Рис. 5.

Посмотреть большойСкачать слайд

Киназы семейства Tec, участвующие в фосфорилировании WIP. (A) Анализ киназы in vitro с использованием His ₆ –WIP (человек, полная длина) был выполнен компанией Merck Millipore в соответствии со стандартными протоколами для KinaseProfiler™. На гистограмме представлены данные киназного скрининга. Было показано, что ряд протестированных киназ имеет некоторую степень сигнала выше фона, что указывает на фосфорилирование WIP. Самые высокие ответы были измерены для киназы семейства Tec Btk, за которой следовали Lyn и Lck. Анализы проводили в двух повторностях с кислотными бланками в качестве отрицательного контроля. Данные средние ± стандартное отклонение. (B) Оценка эффективности пяти неперекрывающихся кшРНК Hck и Lyn. Клетки THP-1 трансдуцировали лентивирусом, подвергали селекции пуромицином и, наконец, анализировали на эндогенную экспрессию Hck и Lyn. В качестве контроля загрузки использовали β-тубулин. (C) Иммунопреципитацию (IP) проводили в истощенных по Hck и Lyn клетках, сверхэкспрессирующих WIP-EGFP, с использованием антитела против GFP для оценки уровня фосфорилирования WIP. Мембраны блоттировали антителом против фосфорилированного тирозина (pTyrosine, 4G10) и антителом против EGFP.

Рис. 5.

Посмотреть большойСкачать слайд

Киназы семейства Tec, участвующие в фосфорилировании WIP. (A) Анализ киназы in vitro с использованием His ₆ –WIP (человек, полная длина) был выполнен компанией Merck Millipore в соответствии со стандартными протоколами для KinaseProfiler™. На гистограмме представлены данные киназного скрининга. Было показано, что ряд протестированных киназ имеет некоторую степень сигнала выше фона, что указывает на фосфорилирование WIP. Самые высокие ответы были измерены для киназы семейства Tec Btk, за которой следовали Lyn и Lck. Анализы проводили в двух повторностях с кислотными бланками в качестве отрицательного контроля. Данные средние ± стандартное отклонение. (B) Оценка эффективности пяти неперекрывающихся кшРНК Hck и Lyn. Клетки THP-1 трансдуцировали лентивирусом, подвергали селекции пуромицином и, наконец, анализировали на эндогенную экспрессию Hck и Lyn. В качестве контроля загрузки использовали β-тубулин. (C) Иммунопреципитацию (IP) проводили в истощенных по Hck и Lyn клетках, сверхэкспрессирующих WIP-EGFP, с использованием антитела против GFP для оценки уровня фосфорилирования WIP. Мембраны блоттировали антителом против фосфорилированного тирозина (pTyrosine, 4G10) и антителом против EGFP.

Таким образом, мы выбрали второй подход, основанный на исследованиях фармакологических ингибиторов. Ингибирование киназ семейства Src с помощью PP2 (рис.   6A) или двойного ингибитора киназы c-Abl/Src дазатиниба (рис.   6B) блокировало фосфорилирование WIP. В отличие от обработки клеток PP3 (аналог PP2, используемый в качестве отрицательного контроля для PP2) или иматинибом (STI-571), ингибитором киназы Abl, который не был идентифицирован как киназа-кандидат в результате скрининга Merck in vitro , не влиял на фосфорилирование тирозина WIP (рис.   6A, C). Эти данные указывают на роль Lyn и/или Hck, исключая Btk, поскольку это не Src-киназа. Однако поиск в литературе выявил недавние данные о том, что PP2 скорее более неразборчив, чем принято считать, и также действует как хороший ингибитор Btk (Brandvold et al., 2012). Сходным образом, хотя дазатиниб в первую очередь блокирует киназы c-Abl и Src, он также может блокировать Btk (Hantschel et al., 2008). Чтобы проверить действие Btk напрямую, клетки THP-1, экспрессирующие WIP(WT)-EGFP, обрабатывали перванадатом и либо контролем ДМСО, либо повышающими концентрациями высокоспецифичного ингибитора Btk PCI-32765 (Ponader et al., 2012) перед лизисом клеток. и последующую иммунопреципитацию WIP-EGFP для оценки фосфорилирования тирозина. Ингибирование Btk, по-видимому, оказывало полное ингибирующее действие на тирозиновое фосфорилирование WIP при всех фармакологически значимых (Ponader et al., 2012; Tai et al., 2012) протестированных концентрациях PCI-32765, демонстрируя, что эта киназа является ключевым медиатором WIP. фосфорилирование в этих клетках (рис. 6D). Чтобы подтвердить данные об ингибиторах, мы использовали антитело против фосфорилированного Y468, чтобы подтвердить фосфорилирование Btk на очищенных His-меченых WIP дикого типа. При добавлении активного Btk наблюдался четкий сигнал (рис.   6E). Аномальная полоса также была видна над сигналом WIP, который мы идентифицируем как исходящий от самого His-Btk (дополнительный материал, рис. S3). Когда мы провели аналогичный анализ WIP, полученного из клеток, мы обнаружили, что WIP-GFP, но не только GFP или помеченный GFP тройной нефосфорилируемый мутант WIP Y455/468/475F, может быть фосфорилирован Btk (дополнительный материал рис. S4). Наконец, мы изучили влияние PCI-32765 на клетки THP-1, экспрессирующие WIP дикого типа, обработанные стандартным способом для образования подосом (рис.   6F). Формирование подосом сильно не пострадало, но количество подосом на клетку увеличилось после обработки PCI-32765. Эти данные коррелируют с устойчивым функционированием комплексов WIP-WASP в отсутствие опосредованной фосфорилированием диссоциации, индуцированной Btk.

Рис. 6.

Посмотреть большойСкачать слайд

Идентификация Btk как мощной киназы для фосфорилирования тирозина WIP. Ингибирование фосфорилирования тирозина WIP-EGFP. Лизаты общего белка получали из клеток THP-1, стабильно трансфицированных WIP-EGFP дикого типа и обработанных (A) PP2 или PP3, (B) дазатинибом, (C) STI-571 или (D) PCI-32765. в концентрации, указанной на блотах, в течение 2 ч перед обработкой перванадатом в течение 30 мин. Во всех случаях WIP-EGFP подвергали иммунопреципитации (IP) из клеточных лизатов с использованием антитела против EGFP, а мембраны затем блотировали антителом против фосфорилированного тирозина (pTyrosine, 4G10), антителом против EGFP и антителом против β-тубулина. (Э) Анализ киназы in vitro. Вестерн-блот-анализ рекомбинантного His-WIP, предварительно инкубированного со смолой, а затем обработанного рекомбинантным His-меченым активным Btk или без него. Мембраны блоттировали антителом WIP и поликлональным антителом pY468. Положения His-меченых WIP, Btk и фосфорилированных WIP указаны справа на панелях. (F) Влияние обработки PCI на стабильность подосом в клетках THP-1. Слева, широкопольные флуоресцентные изображения TGFβ-дифференцированных клеток WIP(WT)–EGFP, экспрессирующих THP-1, обработанных либо PCI (1  мкМ), либо контролем носителя ДМСО. Справа: обработка PCI-32765 (PCI) увеличивает среднее количество подосом в THP-1 по сравнению с контрольными клетками, обработанными носителем ДМСО. Данные средние ± стандартная ошибка среднего. ** P <0,01 (тест Стьюдента t ). Шкала баров: 20 мкм.

Рис. 6.

Посмотреть большойСкачать слайд

Идентификация Btk как мощной киназы для фосфорилирования тирозина WIP. Ингибирование фосфорилирования тирозина WIP-EGFP. Лизаты общего белка получали из клеток THP-1, стабильно трансфицированных WIP-EGFP дикого типа и обработанных (A) PP2 или PP3, (B) дазатинибом, (C) STI-571 или (D) PCI-32765. в концентрации, указанной на блотах, в течение 2 ч перед обработкой перванадатом в течение 30 мин. Во всех случаях WIP-EGFP подвергали иммунопреципитации (IP) из клеточных лизатов с использованием антитела против EGFP, а мембраны затем блотировали антителом против фосфорилированного тирозина (pTyrosine, 4G10), антителом против EGFP и антителом против β-тубулина. (Э) Анализ киназы in vitro. Вестерн-блот-анализ рекомбинантного His-WIP, предварительно инкубированного со смолой, а затем обработанного рекомбинантным His-меченым активным Btk или без него. Мембраны блоттировали антителом WIP и поликлональным антителом pY468. Положения His-меченых WIP, Btk и фосфорилированных WIP указаны справа на панелях. (F) Влияние обработки PCI на стабильность подосом в клетках THP-1. Слева, широкопольные флуоресцентные изображения TGFβ-дифференцированных клеток WIP(WT)–EGFP, экспрессирующих THP-1, обработанных либо PCI (1  мкМ), либо контролем носителя ДМСО. Справа: обработка PCI-32765 (PCI) увеличивает среднее количество подосом в THP-1 по сравнению с контрольными клетками, обработанными носителем ДМСО. Данные средние ± стандартная ошибка среднего. ** P <0,01 (тест Стьюдента t ). Шкала баров: 20 мкм.

До сих пор имелось мало доказательств механизма, объясняющего необходимость отделения WIP от WASP, необходимого для облегчения деградации WASP (Chou et al., 2006; de la Fuente et al., 2007; Konno et al. ., 2007). Фосфорилирование остатков серина/треонина, сгруппированных в функциональных доменах WIP, подвергалось некоторому анализу, но роль этих фосфосайтов не была ясна. В частности, изначально предполагалось, что фосфорилирование S488 с помощью PKCθ приводит к диссоциации комплекса WIP-WASP (Sasahara et al., 2002). Однако последующие исследования как на клетках Jurkat (Dong et al., 2007), так и на линии естественных клеток-киллеров YTS (Krzewski et al., 2006) продемонстрировали, что WIP и WASP остаются связанными вместе после фосфорилирования этого остатка. Здесь мы показываем, что изменение статуса фосфорилирования S488 не оказывает заметного влияния на отделение WIP от WASP. Известно, что WIP и, в частности, С-концевой домен, охватывающий WBD и остаток S488, представляет собой внутренне неупорядоченный белок (Haba et al., 2013), поэтому возможно, что фосфорилирование S488 приведет к тонкому сдвигу связь между WIP и WASP. Недавняя работа с использованием методологии трехцветного FRET продемонстрировала, что события серинового фосфорилирования могут модифицировать пространственное взаимодействие взаимодействующих доменов WIP-WASP, не вызывая полного разделения белков (Fried et al., 2014). Мы также провели скрининг других идентифицированных остатков серина/треонина-кандидатов 9.0117 in silico в качестве потенциальных мишеней фосфорилирования (Shu et al., 2004) и во всех случаях не обнаруживали влияния на ассоциацию WIP-WASP (рис. 1).

В отличие от отрицательных результатов по остаткам серина и треонина, мы впервые демонстрируем тирозиновое фосфорилирование WIP. WIP человека содержит три остатка тирозина, которые расположены исключительно внутри WBD, внутри или рядом с последовательностями, которые, как известно, важны для ассоциации WIP-WASP (Volkman et al. , 2002; Zettl and Way, 2002; Peterson et al., 2007). Y455 находится между двумя фенилаланиновыми остатками, идентифицированными как критические для связывания WIP с повсеместно экспрессируемым N-WASP и, таким образом, предположительно также для связывания гемопоэтически специфичных WASP (Zettl and Way, 2002; Peterson et al., 2007). Остаток Y468 находится непосредственно ниже мотива DLPPEP, богатого пролином (остатки 461–467), который, как постулируется, непосредственно взаимодействует с доменом EVh2 N-WASP и WASP. Домен EVh2 (также называемый доменом Wh2) участвует в ремоделировании актина посредством его связывания с богатыми пролином областями его белков-партнеров-мишеней. Наиболее хорошо охарактеризованные партнеры по связыванию домена EVh2 являются членами семейства белков verprolin. К ним относятся WIP, CR16 и WICH/WIRE (белок, гомологичный WIP и CR16/родственный белок WIP) (Antón et al., 2007). Остаток Y475 находится непосредственно перед консервативным мотивом PSKxxR (остатки 476–481), который, как полагают, взаимодействует с кислотными остатками в домене N-WASP/WASP EVh2 (Volkman et al. , 2002). Наша начальная 9Анализ 0117 in silico идентифицировал Y468 как предполагаемую мишень для рецепторных тирозинкиназ, и, учитывая важность положения этого и других остатков тирозина по отношению к важным субдоменам в WBD WIP, мы решили выяснить, представляют ли они мишени для фосфорилирования. .

Масс-спектрометрия показала, что Y455 и Y468 фосфорилируются на WIP-EGFP WT человека, экспрессированном и впоследствии выделенном из миелоидных клеток человека. Что касается тирозина 475, то технические ограничения не позволяют нам с достаточной уверенностью подтвердить его состояние фосфорилирования. Фосфомиметические мутации трех остатков тирозина полностью устраняют взаимодействие WIP-WASP, в то время как единственный фосфомиметический мутант центрального остатка Y468 сильно нарушает это взаимодействие. Используя нашу модель THP-1, в которой TGFβ1-индуцированная дифференцировка приводит к клеточной адгезии, продукции подосом и связанной с этим деградации матрикса (Monypenny et al. , 2011), мы демонстрируем роль этих сайтов фосфорилирования тирозина в регуляции функции подосом. Нокдаун эндогенного WIP в THP-1 ингибирует как образование подосом, так и функцию в этих клетках способом, напоминающим данные по WIP-нулевым дендритным клеткам мышей (Chou et al., 2006). Реэкспрессия устойчивых к нокдауну WIP дикого типа приводит к эффективному восстановлению функциональных подосом. Экспрессия тройного тирозинового фосфомиметического мутанта WIP приводит лишь к минимальному спасению сильно дезорганизованных структур, которые также лишены каких-либо функций деградации матрикса. Следовательно, мы предполагаем, что тирозиновое фосфорилирование WIP обеспечивает новый механизм регуляции ассоциации WIP-WASP и, таким образом, оборота и функции подосом в лейкоцитах.

До сих пор механизмы, которые напрямую контролируют ассоциацию WIP-WASP, оставались неуловимыми. Роль фосфорилирования WASP в регуляции динамики цитоскелета, образования подосом, функции и поведения клеток была в центре внимания в последние годы, и в настоящее время идентифицирован ряд сайтов фосфорилирования, которые влияют на функцию и оборот WASP. Например, тирозин 291 (293 у мышей) WASP, по-видимому, регулирует как обмен белка, так и его способность индуцировать Arp2/3-зависимую полимеризацию актина (Blundell et al., 2009).; Macpherson et al., 2012), в то время как конститутивное фосфорилирование WASP по серинам 483 и 484, по-видимому, необходимо для ассоциации Arp2/3 (Cory et al., 2003). Фосфомиметический мутант тирозина 291 усиливает WASP-опосредованную полимеризацию актина по сравнению с белком дикого типа в анализе in vitro с шариками, в то время как уровни филаментозного актина в покое повышены в клетках, экспрессирующих этот мутант, по сравнению с белком дикого типа. Однако мышиные нокаут-модели также показывают, что фосфомиметик Y293 WASP экспрессируется на гораздо более низких уровнях, чем белок дикого типа, и это наблюдение можно частично обратить вспять за счет ингибирования кальпаина (Macpherson et al., 2012) и/или протеасомы (Blundell et al., 2009), предполагая, что фосфорилирование этот сайт также нацелен на деградацию WASP. Однако фосфомиметические версии WASP Y291 связывались с WIP с той же аффинностью, что и нормальный WASP (Blundell et al., 2009; Macpherson et al., 2012), что указывает на то, что неустановленный механизм регулирует полную диссоциацию WIP от WASP и полную диссоциацию последнего. деградация. Следовательно, по-видимому, существует сложный механизм, уравновешивающий активацию WASP с ее последующей деградацией. Ранее сообщалось, что WIP защищает WASP от деградации (Tsuboi, 2007; Reicher et al., 2012; Chou et al., 2006; de la Fuente et al., 2007). оба нарушают ассоциацию WIP-WASP и приводят к истощению эндогенных уровней WASP, фосфорилирование тирозина WIP обеспечивает еще один механизм для регуляции WASP-зависимых перестроек цитоскелета. Наша текущая и предыдущая работа предполагает, что WIP может образовывать комплексы с фосфорилированными активными WASP (Tsuboi and Meerloo, 2007; de la Fuente et al., 2007; Macpherson et al., 2012; Tsuboi, 2007), что позволяет ему управлять Arp2/3- зависимые события полимеризации актина, будучи защищенными от механизма деградации (Watanabe et al. , 2013). В этом последнем случае WIP фосфорилирование тирозина, таким образом, обеспечивает сигнал для полного высвобождения активного WASP, что приводит к его последующему разрушению как через кальпаин, так и через убиквитин-протеасомные пути и, следовательно, к прекращению опосредованной Arp2/3 генерации актиновых филаментов. Соответственно, быстрое разрушение подосом, необходимое для быстро мигрирующих макрофагов и дендритных клеток (Calle et al., 2008; Macpherson et al., 2012), будет опосредовано фосфорилированием тирозина WIP.

Хорошо известно, что представители киназ семейства Src и, в частности, Hck, могут оказывать существенное влияние на морфологию и движения лейкоцитов как в двумерной, так и в трехмерной среде (Suen et al., 1999; Guiet et al. и др., 2008; Cougoule и др., 2010). Hck также может активировать WASP посредством фосфорилирования Y291, что приводит к связыванию Arp2/3 и сборке актиновых филаментов (Cory et al., 2002). Hck также был идентифицирован как мишень WIP, но только посредством скрининга лигандов домена Hck Sh4 (Scott et al. , 2002). Основываясь на этих и др. сообщениях, было бы утилитарно ожидать, что Hck будет ключевой киназой, регулирующей формирование подосом посредством пути WIP-WASP. Наши результаты как исследования ингибитора Src PP2, так и нашего скрининга киназы указывали на этот вывод, пока не были сбиты с толку обнаружением того, что клетки с нокдауном Hck (и Lyn) все еще могут генерировать нормальные подосомы и демонстрируют контрольные уровни фосфорилирования тирозина WIP. Только повторная проверка результатов скрининга киназ и эксперименты с ингибиторами, описанные выше, позволили нам обнаружить, что киназа семейства Tec Btk, по-видимому, является наиболее значимой киназой, контролирующей уровни фосфорилирования тирозина WIP. Мы подтвердили, что Btk действительно может фосфорилировать Y468 генерируемого бакуловирусом человеческого WIP, меченного His (рис.   6E), но это труднее продемонстрировать в клеточных экстрактах, где WIP будет очищаться вместе с клеточным WASP (дополнительный материал, рис. S4). . Мы пришли к выводу, что связывание WIP-WASP в нашем клеточном экстракте часто бывает настолько сильным, что мы не можем нарушить взаимодействие в достаточной степени, чтобы позволить Btk получить доступ к остаткам тирозина. Вполне может быть, что более ранние события, которые, как сообщается, тонко перестраивают конформацию WIP-WASP (Fried et al., 2014), необходимы для раскрытия Y468 для действия Btk. 9Было показано, что 0005

Btk непосредственно связывается с WASP и фосфорилирует его (Guinamar et al., 1998). Мутации Btk-null были зарегистрированы у мышей (XID) и у людей с Х-сцепленной агаммаглобулинемией (XLA). В обоих случаях наблюдались серьезные недостатки в развитии и функционировании В-клеток. Было показано, что в остеокластах, полученных от пациентов с XLA человека, формирование кольца на основе подосом, необходимого для эффективной резорбции кальцинированного матрикса, нарушено (Danks et al., 2011). Точно так же такие же эффекты наблюдаются при обработке остеокластов фармакологическими ингибиторами Btk, как in vitro и in vivo (Tai et al. , 2012). Кроме того, было показано, что комплекс WIP-WASP-Btk необходим для активации сигнального комплекса TLR4 в LPS-стимулированных макрофагах (Sakuma et al., 2012). Основываясь на предыдущих сообщениях и настоящих данных, мы предполагаем, что Btk может индуцировать активацию WASP, а также облегчает его последующую инактивацию посредством фосфорилирования WIP.

В совокупности эти данные показывают, что тирозиновое фосфорилирование WIP обеспечивает новый механизм регуляции диссоциации WIP-WASP и последующей деградации WASP (рис.  7). Общее значение этих результатов может также распространяться на взаимодействия WIP-N-WASP, которые происходят повсеместно (Antón et al., 2007), на регулируемую миграцию клеток (Bañón-Rodríguez et al., 2013) и, в частности, на процесс образование invadopodia в некоторых метастатических карциномах (García et al., 2012; Yu et al., 2012).

Рис. 7.

Посмотреть в большом размереСкачать слайд

Путь к регулированию WASP. Модель последовательности, посредством которой WASP быстро активируется, а затем инактивируется в зонах сборки ядра подосомы. WASP изначально находится в конформации аутоингибируемой шпильки, но при этом тесно связан с WIP. После активации WASP посредством связывания Cdc42 и др. агентов (Thrasher, 2002), Arp2/3 связывается с освобожденным С-концевым доменом VCA, где он облегчает сборку актиновых филаментов, чтобы инициировать формирование ядра подосомы (Calle et al., 2008). Тирозинового фосфорилирования WIP в WBD достаточно, чтобы разрушить физическую связь WIP и WASP, делая WASP уязвимым для деградации через кальпаин (Chou et al., 2006; Macpherson et al., 2012) и/или убиквитиновые пути (Blundell et al. ., 2009; Райхер и др., 2012). Полученный массив дендритных филаментов затем будет уязвим для растворения под действием кофилина или может быть стабилизирован заменой WASP кортактином.

Рис. 7.

Посмотреть в большом размереСкачать слайд

Путь к регулированию WASP. Модель последовательности, посредством которой WASP быстро активируется, а затем инактивируется в зонах сборки ядра подосомы. WASP изначально находится в конформации аутоингибируемой шпильки, но при этом тесно связан с WIP. После активации WASP посредством связывания Cdc42 и др. агентов (Thrasher, 2002), Arp2/3 связывается с освобожденным С-концевым доменом VCA, где он облегчает сборку актиновых филаментов, чтобы инициировать формирование ядра подосомы (Calle et al., 2008). Тирозинового фосфорилирования WIP в WBD достаточно, чтобы разрушить физическую ассоциацию WIP и WASP, делая WASP уязвимым для деградации через кальпаин (Chou et al., 2006; Macpherson et al., 2012) и/или пути убиквитина (Blundell et al. ., 2009; Райхер и др., 2012). Полученный массив дендритных филаментов затем будет уязвим для растворения под действием кофилина или может быть стабилизирован заменой WASP кортактином.

Идентификация Btk в качестве ключевого медиатора фосфорилирования тирозина WIP в клетках THP-1 дает важные новые данные о регуляторных путях, лежащих выше WIP-WASP, и, следовательно, о формировании подосом в миелоидных клетках и его клиническом значении (Tai и др. , 2012). Будущая работа будет направлена ​​на обнаружение вышестоящего сигнального каскада, ведущего к активации Btk, с акцентом на пространственный контекст разрушения подосом. Также было бы информативно узнать что-нибудь о фосфатазе(ах), регулирующей Btk в этом контексте, учитывая, что конститутивное фосфорилирование WIP сильно препятствует активности WASP, необходимой для инициации и сборки подосом.

Клеточная культура

Клетки THP-1 (моноцитарная клеточная линия человека) были приобретены в банке клеток АТСС. Клетки поддерживали в виде суспензионных культур в RPMI с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Чтобы вызвать образование подосом, клетки высевали в культуральную среду с добавлением 1 нг/мл рекомбинантного TGFβ1 человека (R&D Systems) либо на покровные стекла, либо на 60-мм чашки для культур тканей, покрытые 10 мкг/мл бычьего фибронектина (Sigma). Затем клетки оставляли на 24  часа для прикрепления и образования подосом перед последующими экспериментами.

Генерация лентивирусных векторов

кДНК, кодирующая человеческий WIP дикого типа, амплифицировали с помощью ПЦР из матричной плазмиды pcDNA3/hWIP и субклонировали в вектор pCR-BLUNT (Invitrogen) с последующими нефосфорилируемыми и фосфомиметическими мутациями для соответствующих тирозина, серина и треонина остатки были включены с использованием набора для направленного мутагенеза QuikChange XL (Stratagene). С-концевые слияния EGFP WIP и различных мутантов WIP были созданы с помощью промежуточной стадии субклонирования, а затем полная конструкция слияния WIP-EGFP была вставлена ​​в сайт множественного клонирования лентивирусного вектора переноса pHR’SINcPPT-SFFV (pLNT/Sffv). Укороченный мутант ΔWBD WIP, лишенный остатков 450–503 (WASP-связывающий домен), был создан с помощью ПЦР с использованием той же процедуры промежуточного субклонирования. Затем лентивирусные конструкции секвенировали и впоследствии использовали для получения вируса (см. ниже). Для экспериментов по спасению в кодирующую последовательность человеческого WIP-EGFP и связанных с ним фосфомутантов вводили три отдельные молчащие мутации с одним основанием, чтобы придать устойчивость к shRNA-опосредованному нокдауну после экспрессии в клеточных линиях THP-1 WIP-нокдаун. Эти мутации, находящиеся в последовательности WIP человека, на которую нацелен лентивирусный вектор кшРНК Sigma Mission NM_003387.3-266s1c1 (# 266), были введены одновременно посредством сайт-направленного мутагенеза с использованием одного праймера (5′-GAAGTGCACCAATACTGGATAAGCCGAAAGGAGCTGGTGCTGGAG-3′), в результате чего в следующих нуклеотидных изменениях: 180 п.н., C на A; п.н. 183, от А до G; и п.н. 186, от Т до G.

Укороченная конструкция mCherry-talin была получена с помощью ПЦР и последующего субклонирования следующим образом: ПЦР использовали для амплификации кДНК, кодирующей остатки 1975–2541 человеческого талина, из матричной плазмиды (подарок Maddy Parsons, King’s College London, UK) и клонировали через вектор pCR-BLUNT в MCS вектора pLNT/Sffv-mCherry-MCS, генерируя лентивирусную экспрессионную конструкцию mCherry-talin (1975–2541).

Трансдукция гена лентивируса

Псевдотипированный лентивирус VSV-G, кодирующий флуоресцентные слитые конструкции или кшРНК, был упакован в HEK-293Т клетки. Упаковывающие клетки временно трансфицировали вспомогательными плазмидами pCMVΔR8.91 и pMD.G вместе с заданным вектором переноса: либо pLNT/Sffv, кодирующим флуоресцентные слитые белки, либо pLKO.puro, кодирующим shРНК. Супернатанты, содержащие лентивирус, собирали через 48 часов, фильтровали через фильтр 0,45 мкм и хранили при -80°C для будущего использования. Клетки THP-1 инкубировали с супернатантами лентивирусов в 12-луночных планшетах в течение 24 часов, а затем тщательно промывали перед размножением культур. В случае лентивируса, кодирующего кшРНК, клетки переносили в среду с добавлением 1 мкг/мл пуромицина через 56 ч после инфицирования, чтобы обеспечить отбор только тех клеток, которые успешно включили лентивирусную ДНК. Лентивирусные векторы, кодирующие кшРНК, были получены из банка плазмидной ДНК кшРНК Mission® (Sigma). Идентификаторы клонов для WIP-специфических кшРНК лентивирусных плазмид, использованных в этом исследовании, были NM_003387.3-266s1c1 (#266), NM_003387.3-1388s1c1 (#1388), NM_003387.3-151s1c1 (#151), NM_003387.3-676s1c1 (#1388). #676) и NM_003387.3-1430s1c1 (#1430). Идентификаторы клонов для Hck-специфических кшРНК. Использовались лентивирусные плазмиды: NM_002110.2-417s21c1, NM_002110.2-1735s21c1, NM_002110.2-19.30s21c1, NM_002110.2-1352s21c1, NM_002110.2-1285s21c1. Используемые лентивирусные идентификаторы клонов для Lyn-специфических кшРНК: NM_002350.2-2863s21c1, NM_002350.2-341s21c1, NM_002350.2-318s21c1, NM_002350.2-889s21c1, NM_002350.2-1570s21c1. Нецелевая контрольная плазмида pLKO.puro (NTC) была подарена Ester Martin (Addgene; ID 1864).

Иммунопреципитация и вестерн-блоттинг

Для исследований иммунопреципитации клетки THP-1 высевали на чашки, покрытые фибронектином, в присутствии TGFβ1 на 24  часа для индуцирования дифференцировки и образования подосом, как описано выше. Затем клетки лизировали в 1 мл ледяного лизирующего буфера, содержащего 150 мМ NaCl, 1% Triton X-100, 50 мМ Tris-HCl pH 7,5, 1 мМ ЭДТА, 100 мМ NaVO 9.0796 4 , 50  мМ NaF и смесь ингибитора протеазы (Roche). Лизаты очищали центрифугированием, предварительно очищали в течение 30 мин с помощью IgG-агарозных шариков, а затем инкубировали с первичными антителами в течение 60 мин при 4°C с вращением. Затем антитело захватывали добавлением агарозных шариков с белком A/G (Alpha Diagnostic) с последующей дополнительной инкубацией в течение 60  мин с вращением при 4°C. Наконец, шарики промывали один раз лизирующим буфером, а затем три раза промывочным буфером (лизирующий буфер, содержащий 500 мМ NaCl) перед повторным суспендированием шариков в буфере для образцов. В тех случаях, когда анализировали тирозиновое фосфорилирование иммунопреципитатов, клетки предварительно обрабатывали 12 мкМ перванадата в течение 20 минут перед лизисом.

После обработки образцы для анализа фосфокартирования инкубировали с гранулами GFP-TRAP-A (ChromoTek, Martinsried, Германия) в течение 2 ч на роторе при 4°C. GFP или слитые белки GFP подвергали центрифугированию при 3000 g в течение 2 мин при 4°C. Гранулы затем трижды промывали с использованием лизирующего буфера для иммунопреципитации перед быстрой заморозкой.

Антитела, использованные для иммунопреципитации и вестерн-блоттинга, были следующими. Козий поликлональный анти-WIP (G-20) и мышиный моноклональный анти-WASP (Clone B-9) были из компании Santa Cruz Biotechnology. Кроличьи поликлональные и мышиные моноклональные анти-EGFP были получены от MBL (№ 598) и Roche (№ 11-814-460-001) соответственно. Мышиные моноклональные антитела против GAPDH (клон 6C5) и фосфотирозина (4G10 Platinum) были получены от Millipore. Для обнаружения фосфотирозина в иммуноблотах 100 мМ NaVO ₄ включали на этапах блокирования мембраны и первичных и вторичных инкубационных антител.

Для количественного определения белковых полос в иммуноблотах изображения обрабатывались в ImageJ следующим образом. Изображения были инвертированы, обработаны для вычитания фона с использованием настроек ImageJ по умолчанию, а интегрированная функция плотности затем использовалась для количественной оценки интенсивности полосы белка. Белковые полосы затем нормализовали к полосам соответствующих им контролей загрузки GAPDH. Уровень нормализованной экспрессии белка для каждой дорожки блота выражали в процентах от уровня для контрольной дорожки кшРНК NTC.

Визуализация живых клеток

Исследования с широким полем зрения проводились с использованием широкопольного инвертированного микроскопа Olympus IX81, оснащенного камерой для окружающей среды, в которой точно поддерживалась температура 37°C. Все изображения проводились с использованием объектива 100×, числовой апертурой 1,4 и колес фильтров возбуждения и эмиссии (Sutter), оснащенных фильтрами, оптимизированными для эпифлуоресценции EGFP и mCherry. Получение изображения контролировалось программным обеспечением обработки изображений Metamorph (Universal Imaging). Для наблюдения за оборотом подосом в течение 30 минут проводилась цейтраферная визуализация с флуоресцентными изображениями, полученными с 30-секундными интервалами.

Анализ обновления адгезии

Обмен подосом в клетках THP-1, экспрессирующих конструкции EGFP, выполняли путем визуализации сигнала GFP с использованием инвертированного эпифлуоресцентного микроскопа IX71 Olympus, и изображения получали каждые 30 с. Микрофотографии обрабатывали с использованием Adobe Photoshop® версии 7.0, чтобы установить пороговое значение ядер подосом в клетках. Чтобы проанализировать постоянство пространственной локализации ядер подосом, были использованы пять изображений интерференционно-отражательной микроскопии (IRM), сделанных с интервалом 5 мин. Каждое изображение обрабатывалось порогом для получения белых спаек на черном фоне, а затем инвертировалось как черные спайки на белом фоне. Затем значение черного каждого изображения делили на пять, чтобы получить темно-серый цвет, соответствующий спайкам (т. е. 256/5 по шкале от 1 до 256). Затем изображения были наложены друг на друга с помощью функции «разница» в Adobe Photoshop. Таким образом, мы получили составное изображение с пятью соответствующими уровнями серого. Самый светлый уровень серого соответствует пикселям, которые присутствовали на одном из пяти изображений (точки слипания существуют менее 5 минут), а самый темный уровень серого соответствует пикселям, которые присутствовали на пяти из пяти изображений (т. е. точки слипания существуют в течение 20 минут). ). Таким образом, области пикселей светло-серого цвета представляют динамические спайки, тогда как области пикселей темно-серого и черного цвета представляют собой все более стабильные спайки в течение выбранного временного хода измерения. Используя записные книжки Mathematica™ 5.2 (Macpherson et al., 2012), мы смогли количественно определить процент пикселей, соответствующих каждому уровню серого на изображении, что позволило нам рассчитать индекс оборота, разделив процент пикселей, присутствующих в одном или двух кадрах, на процент пикселей, присутствующих в четырех или пяти кадрах (Macpherson et al. , 2012). Таким образом, было получено соотношение нестабильной адгезии к стабильной адгезии в каждой живой клетке. Более высокое значение индекса оборота представляет собой более динамичную адгезию клеток. Критерий Манна-Уитни использовали для оценки значимости экспериментальных результатов.

Иммуноцитохимия

Клетки THP-1 высевали на покровные стекла, покрытые фибронектином (10 мкг/мл) в питательной среде с добавлением 1 нг/мл TGFβ1, и культивировали в течение 24 часов. Затем клетки фиксировали 3,7% параформальдегидом, пермеабилизировали 0,01% Triton X-100 и блокировали 3% BSA в PBS перед инкубацией с первичными антителами. Нитевидный актин окрашивали с использованием фаллоидина, конъюгированного с Alexa-Fluor-465 (Molecular Probes), который был включен на этапе инкубации с первичным антителом. Винкулин метили с использованием мышиного моноклонального клона hVIN-1 (Sigma) и ослиного антимышиного вторичного антитела, конъюгированного с Alexa-Fluor-568 (Molecular Probes). Покровные стекла помещали на предметные стекла с использованием Prolong Gold (Invitrogen) и визуализировали с помощью инвертированного конфокального микроскопа Zeiss LSM 510 с объективом Plan Fluor 63×.

Подсчет подосом

Для количественного определения клеток с подосомами или без них или количества подосом на клетку оценивали как минимум три повторных анализа с подсчетом минимум 40 клеток в фиксированных препаратах из каждого эксперимента. ImageJ использовался для подсчета и теста Стьюдента t , выполненного на полученных комбинированных наборах данных. Клетка считалась содержащей подосомы, если она содержала более одной идентифицируемой структуры.

Анализ разложения матрицы

Приготовление флуоресцентного желатина

2 мг/мл желатина растворяли в растворе, содержащем 61 мМ NaCl и 50 мМ боргидрата натрия (Na ₂ B ₄ O ₇ ) (Sigma-p3H ) Aldrich), а затем инкубировали при 37°C в течение 1 ч. После растворения добавляли 2 мг родамина (Sigma-Aldrich) и перемешивали в течение 2 ч в темноте. Затем эту смесь подвергали диализу в течение ночи при комнатной температуре в PBS в полной темноте. Диализ повторяли в течение 2 дней с двумя заменами буфера в день. После добавления 2% (мас./об.) сахарозы проводили быстрое центрифугирование для удаления нерастворимого материала, и небольшие аликвоты хранили в темноте при 4°С.

Приготовление покровных стекол, покрытых флуоресцентным желатином

Перед нанесением покровные стекла диаметром 13 мм стерилизовали в 70% этаноле в течение 30  мин при комнатной температуре и промывали 99% этанолом. Высушенные на воздухе покровные стекла затем покрывали теплым желатином, конъюгированным с родамином, используя около 200 мкл на круглые покровные стекла диаметром 13 мм для покрытия поверхности в течение 5  мин. Каждое покровное стекло переворачивали на 200 мкл 0,5% охлажденного льдом глутарового альдегида в PBS на подложке из парафильма. После 15 мин в темноте при комнатной температуре каждое покровное стекло затем переносили в многолуночную чашку стороной с покрытием вверх и осторожно трижды промывали PBS. Затем покровные стекла инкубировали с 1 мл боргидрида натрия (5 мг/мл) в PBS в течение 3 мин при комнатной температуре и трижды промывали PBS. Наконец, покровные стекла снова стерилизовали в 70% этаноле в течение 5 мин, сушили в течение 10–15 мин под стерильным колпаком, а затем гасили в полной среде в течение 1 ч при 37°C.

Процедура

2×10 ^{5 Клетки} культивировали на покрытых желатином покровных стеклах и стимулировали 1 нг/мл человеческого рекомбинантного TGFβ в течение 15–24 часов, затем фиксировали в 3,7% PFA и обрабатывали для иммунофлуоресценции, как описано выше. Для количественной оценки деградации матрикса клетки визуализировали с помощью инвертированного конфокального микроскопа Zeiss LSM 510. Были визуализированы пять случайных полей при 100-кратном увеличении (объектив Plan fluor). Для каждого экспериментального условия подсчитывали клетки, демонстрирующие деградацию желатина непосредственно под клеткой. Процент клеток, демонстрирующих активность деградации желатина, рассчитывали как показатель функциональности подосом. Показанные данные представляют собой среднее значение трех отдельных экспериментов, сравниваемых с использованием шкалы Стьюдента 9.0117 т -тест.

Масс-спектрометрия

Подготовка образцов

Для анализа фосфокартирования 10 ⁷ клеток THP-1, сверхэкспрессирующих WIP-EGFP, высевали на покрытые фибронектином чашки в присутствии 1 нг/мл TGFβ в течение 24  часов. Клетки предварительно обрабатывали 12 мкМ перванадата в течение 20 минут перед лизисом для ингибирования эндогенных фосфатаз. Для проведения анализа сайтов фосфорилирования на выделенном белке эндогенные фосфатазы необходимо было поддерживать в неактивном состоянии перед очисткой с помощью иммунопреципитации. Образцы после обработки лизировали с использованием 1 мл лизирующего буфера: 150 мМ NaCl, 50 мМ Трис-HCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ЭГТА, 10 мМ β-глицерофосфата натрия, 50 мМ NaF, 5 мМ пирофосфата натрия, 1 мМ NaOV. , 1× Triton X-100, таблетка ингибитора протеиназы, 0,27 М сахарозы, 1  мМ ДТТ. Лизаты инкубировали с 15 мкл гранул GFP-TRAP-A (ChromoTek, Martinsried, Германия) в течение 2 ч на роторе при 4°C. GFP или слитые белки GFP подвергали центрифугированию при 3000  г на 2 мин при 4°C. Затем шарики промывали три раза с использованием лизирующего буфера для иммунопреципитации перед быстрой заморозкой.

Протеолитическое расщепление белков «в геле»

Иммунопреципитированный WIP-EGFP элюировали из гранул с использованием 1% SDS, разделяли в гелях SDS-PAGE и визуализировали коллоидным кумасси синим. Полосу, содержащую слитый белок WIP-EGFP, вырезали из геля и расщепляли трипсином.

Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия

Полученный триптический гидролизат разделяли с помощью наноразмерной жидкостной хроматографии с обращенной фазой C18 [EASY-nLC II (Thermo Fisher Scientific)] в сочетании с масс-спектрометром Orbitrap Velos с линейной ловушкой Quadrupole (LTQ) (Thermo Fisher Scientific). Образцы загружали на предварительную колонку (C-18 Biosphere 5 мкм, 120–200 мкм × 0,2 см) для обессоливания, а затем элюировали со скоростью 0,6 мкл/мин в аналитическую колонку (C-18 Biosphere). 5 мкм, 120 Å–100 мкм×15 см).

Элюирующие растворы пептидов распыляли электрораспылением в масс-спектрометр с помощью ионного источника наноэлектрораспыления. Масс-спектрометр работал в режиме положительных ионов и использовался в режиме сбора данных в зависимости от данных. Полное сканирование (FT-MS) было получено с разрешением 30 000 в диапазоне масс 350–2000  а.е.м., и для фрагментации были выбраны десять наиболее интенсивных ионов с использованием обоих доступных режимов фрагментации: линейная ионная ловушка (CID) и столкновение с более высокой энергией. диссоциация (HCD) в двух разных приобретениях.

Для улучшения фрагментации фосфопептидов в режиме CID был включен «алгоритм многоэтапной активации» в программе Xcalibur. Спектры фрагментации в HCD были получены в анализаторе FTMS с разрешением 7500 в центроидном режиме. Используемая нормализованная энергия столкновения составляла 35 как для методов многостадийной активации CID, так и для методов HCD. Функция «блокировка массы» (блокировка массы = 445,120036 Да) была включена для режимов сканирования МС и МС/МС HCD.

Анализ данных

Необработанные данные, полученные от HCD и многоэтапной активации CID, были обработаны и объединены с помощью Raw2MSN, а все образцы MS/MS были проанализированы с использованием Mascot (Matrix Science, Лондон, Великобритания; версия 2.3.02) с запросом к базе данных SwissProt (выпуск 2011_11, выбран на Homo sapiens , 20249 записей) с использованием пищеварительного фермента трипсина и с учетом двух ошибочных расщеплений.

Mascot был найден с допуском по массе фрагментного иона 0,5 Да и допуском исходного иона 10 млн. Йодоацетамидное производное цистеина указано в Mascot как фиксированная модификация. Окисление метионина и фосфорилирование серина, треонина и тирозина указаны в Mascot в качестве вариабельных модификаций.

Scaffold (версия 3.1.2, Proteome Software Inc., Портленд, Орегон) использовали для проверки идентификации пептидов и белков на основе МС/МС. Идентификация пептидов была принята, если она могла быть установлена ​​при более чем 9Вероятность 5,0%, как определено алгоритмом Peptide Prophet, в результате чего коэффициент ложного обнаружения пептида (FDR) составляет 0,7%. Дополнительную обработку данных проводили с помощью программы Maxquant/Andromeda (версия 1.2.0.18). Поисковая система была вынуждена учитывать немеченые пептиды, установив значение множественности равным 1. Фиксированные и вариабельные модификации, фермент и количество неправильных расщеплений были выбраны ранее для Mascot. FDR пептида, белка и сайта были установлены на уровне 0,01; пептиды, идентифицированные менее чем с шестью аминокислотными остатками, не были включены в результаты.

Анализ профиля киназы

Анализ киназы проводили с использованием сервиса FlexLab компании Merck Millipore на основе протоколов, подробно описанных на http://www. millipore.com/techpublications/tech2/pf3036.

Анализы ингибиторов

Клетки THP-1 высевали на чашки диаметром 60 мм, покрытые фибронектином, с плотностью 5×10 ⁶ клеток/мл и обрабатывали 2 нг/мл TGFβ в течение 15–24 часов. Подосомообразующие клетки обрабатывали в течение 2 часов указанными концентрациями следующих ингибиторов: PP2 (Tocris Bioscience), PP3 (Tocris Bioscience), дазатиниб (Selleckchem.com), PCI-32765 (Selleckchem.com) и STI-571 (Selleckchem.com). .com). Затем клетки обрабатывали 12 мкМ перванадата в течение 30 минут перед лизисом. Клетки промывали охлажденным льдом PBS и лизировали, используя 1 мл буфера для лизиса, дополненного фторидом натрия, пирофосфатом натрия, ортованадатом натрия и глицерофосфатом натрия. Предварительно очищенные лизаты инкубировали с 15 мкл гранул GFP-TRAP-A (ChromoTek, Martinsried, Германия) в течение 2 ч на роторе при 4°C. EGFP или слитые белки EGFP подвергали иммунопреципитации, а гранулы впоследствии собирали центрифугированием при 3000×9. 0410 г на 2 мин при 4°C. Гранулы затем трижды промывали с использованием лизирующего буфера для иммунопреципитации перед нанесением на полиакриламидные гели. Затем нитроцеллюлозную мембрану исследовали с помощью антител против фосфорилированного тирозина 4G10 (Millipore), против β-тубулина (Sigma-Aldrich) и против EGFP (Roche).

In vitro Анализ фосфорилирования Btk

Аликвоты 3  мкг очищенного рекомбинантного His-WIP (Merck-Millipore) инкубировали со смолой Ni-NTA (Qiagen) в промывочном буфере (50 мМ Tris-HCl pH 8,0, 150  мМ NaCl, 25 мМ имидазола, pH 8,0, 0,1% Triton X-100) в течение 1 ч при 4°C с вращением. Смолу промывали три раза в промывочном буфере и один раз в киназном буфере (25 мМ MOPS pH 7,2, 12,5 мМ глицерин-2-фосфат, 25 мМ MgCl2, 5 мМ EGTA, 0,25 мМ DTT, 100 мкМ АТФ). Затем смолу инкубировали с 20 мкл киназного буфера, содержащего 100 нг His-меченого активного Btk (Sigma), в течение 1,5 ч при 30°C. Смолу трижды промывали в промывочном буфере перед кипячением с ФСБ и подвергали вестерн-блоттингу.

Для анализа фосфорилирования Btk с использованием сверхэкспрессированных EGFP-меченных белков из клеток THP-1 иммунопреципитацию проводили с использованием гранул GFP-TRAP-A. Пять миллионов клеток THP-1, содержащих сверхэкспрессированный EGFP, меченный EGFP WIP (WT) или WIP(Y455/468/475F), дважды промывали PBSA при 4°C и ресуспендировали в 0,7 мл буфера для лизиса культуральных клеток (50 мМ Трис-HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1 мМ Na ₃ VO ₄ , 50 мМ NaF, 5% глицерин, 1% Тритон Х-100, 1× ингибиторы протеазы). Клетки разрушали энергичным пипетированием и полученный клеточный лизат очищали от ядер и мембран центрифугированием при 16 100°С.0410 г на 10 мин при 4°C. Осветленные клеточные лизаты затем инкубировали с гранулами GFP-TFAP-A в течение 1  часа при 4°C с вращением. Гранулы промывали три раза в буфере для лизиса клеток и один раз в киназном буфере (25 мМ MOPS pH 7,2, 12,5 мМ глицерин-2-фосфат, 25 мМ MgCl ₂ , 5 мМ EGTA, 0,25 мМ DTT, 100 мкМ АТФ) перед инкубировали с 20 мкл киназного буфера, содержащего 20 нг His-меченого активного Btk, в течение 30 мин при 30°C. Затем гранулы трижды промывали в буфере для лизиса клеток перед кипячением с конечным буфером для образцов (FSB; 60 мМ Tris-HCl, pH 6,8, 2% SDS, 10% глицерина, 5% β-меркаптоэтанола, 0,01% бромфенолового синего и 1 мМ Na). ₃ VO ₄ ) и подвергали вестерн-блоттингу.

Кроличье поликлональное антитело pY468, которое использовалось в этих анализах, было создано против пептида PEP[pY]VQTTKSYPSKC человеческого WIP с помощью службы GenScript.

Мы благодарим Марка Доддинга (Randall Division) и Джайлза Кори (Exeter University) за советы по биохимии киназ.

Вклад авторов

I.M.A., Y.C. и Г.Э.Дж. задумал проект; В.В., Дж.М. и X.J.C. проводил эксперименты по клеточной и молекулярной биологии; Л.М.М. и С.Л. выполнил масс-спектрометрию; Дж.М., А.Дж.Т., И.М.А., Ю.К. и Г.Э.Дж. написал рукопись.

Финансирование

J.M. финансировался The Wellcome Trust [номер гранта 080373]; X.J.C. Советом по медицинским исследованиям [номер гранта G1100041]; и В. В. Европейским союзом [FP7/2007-2013 по соглашению о гранте № 505 237946]. Л.М.М. и С.Л. финансируются Cancer Research UK; А.Дж.Т. является главным научным сотрудником Wellcome Trust; И.М.А. является получателем гранта MINECO [номер гранта SAF2013-45937-R]. Депонирован в ЧВК для немедленного освобождения.

Антон

 

И. М.

,

Джонс

 

Г. Е.

(

2006

).

WIP: многофункциональный белок, участвующий в регуляции актинового цитоскелета.

 

Евро. Дж. Клеточная биология.

 

85

,

295

–

304

.

https://doi. org/10.1016/j.ejcb.2005.08.004

Антон

 

I. M.

,

Lu

 

W.

,

Mayer

 

B. J.

,

Ramesh

 

N.

,

Geha

 

R. S.

(

1998

).

Белок, взаимодействующий с белком синдрома Вискотта-Олдрича (WIP), связывается с адаптерным белком Nck.

 

J. Biol. хим.

 

273

,

20992

–

20995

.

https://doi.org/10.1074/jbc.273.33.20992

Antón

 

I. M.

,

Jones

 

G. E.

,

Wandosell

 

F.

,

Геха

 

Р.

,

Рамеш

 

Н.

(

2007

).

Белок, взаимодействующий с WASP (WIP): участие в полимеризации и многое другое.

 

Trends Cell Biol.

 

17

,

555

–

562

.

https://doi.org/10.1016/j.tcb.2007.08.005

Bañón-Rodríguez

I.

,

Monypnenn0002 Ragazzini

 

C.

,

Franco

 

A.

,

Calle

 

Y.

,

Jones

 

G. E.

,

Antón

 

И. М.

(

2011

).

Кортактин-связывающий домен WIP необходим для образования подосом и деградации внеклеточного матрикса мышиными дендритными клетками.

 

Евро. Дж. Клеточная биология.

 

90

,

213

–

223

.

https://doi.org/10.1016/j.ejcb.2010.09.001

Banon-Rodriguez

 

I.

,

Saez de Guinoa

 

J.

,

Bernardini

А.

,

Рагаццини

 

C.

,

Fernandez

 

E.

,

Carrasco

 

Y. R.

,

Jones

 

G. E.

,

Wandosell

 

F.

,

Антон

 

И. М.

(

2013

).

WIP регулирует персистенцию клеточной миграции и образование складок как при мезенхимальном, так и при амебоидном способах подвижности.

 

PLoS ONE

 

8

,

e70364

.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0070364

Blundell

M. P.

,

Bouma

G.

,

G.

,

G.

,

G.

.

Стоит

 

А.

,

Calle

 

Y.

,

Cowell

 

L. A.

,

Westerberg

 

L. S.

,

Moulding

 

D. A.

,

Mirando

 

S.

,

Kinnon

 

C.

2009

).

Фосфорилирование WASp является ключевым регулятором активности и стабильности in vivo.

 

Проц. Натл. акад. науч. США

 

106

,

15738

–

15743

.

https://doi.org/10.1073/pnas.0

6106

Bouma

 

G.

,

Burns

 

S. O.

,

Thrasher

 

A. J.

(

2009

).

Синдром Вискотта-Олдрича: Иммунодефицит в результате миграции дефектных клеток и нарушения активации иммуностимулятора.

 

Иммунобиология

 

214

,

778

–

795

790

https://doi.org/10.1016/j.imbio.2009.06.009

Brandvold

 

K. R.

,

Steffey

 

M. E.

,

Fox

 

C. C.

,

Soellner

 

M. B.

(

2012

).

Разработка высокоселективного ингибитора киназы c-Src.

 

ACS Chem. биол.

 

7

,

1393

–

1398

.

https://doi.org/10.1021/cb300172e

Burns

S.

,

THRASHER

A. J.

,

9005 2.0016

M. P.

,

Machesky

L.

,

Jones

G. E.

(

2001

).

Конфигурация цитоскелета дендритных клеток человека с помощью Rho GTPases, белка WAS и дифференцировки.

 

Кровь

 

98

,

1142

–

1149

5

https://doi. org/10.1182/blood.V98.4.1142

Burns

 

S.

,

Hardy

 

S. J.

,

Buddle

 

J.

,

Yong

 

K. L.

,

Jones

 

G. E.

,

Thrasher

 

A. J.

( 16 0 0 0 900 09 0 ).

Созревание ДК связано с изменениями подвижных характеристик и адгезии.

 

Cell Motil. Цитоскелет

 

57

,

118

–

132

.

https://doi.org/10.1002/cm.10163

Calle

 

Y.

,

Chou

 

H. C.

,

Thrasher

 

A. J.

,

Jones

 

Г. Е.

(

2004a

).

Белок синдрома Вискотта-Олдрича и динамика цитоскелета дендритных клеток.

 

Дж. Патол.

 

204

,

460

–

469

.

https://doi.org/10.1002/path.1651

Calle

Y.

,

Jones

G. E.

,

Jager0005

 

C.

,

Fuller

 

K.

,

Blundell

 

M. P.

,

Chow

 

J.

,

Chambers

 

Т.

,

Трэшер

 

А. Дж.

(

2004b

).

Дефицит WASp у мышей приводит к неспособности формировать зоны уплотнения остеокластов и дефектам резорбции кости.

 

Кровь

 

103

,

3552

–

3561

6 .

https://doi.org/10.1182/blood-2003-04-1259

Calle

 

Y.

,

Burns

 

S.

,

Thrasher

 

A. J.

,

Джонс

 

Г. Э.

(

2006

).

Лейкоцитарная подосома.

 

Евро. Дж. Клеточная биология.

 

85

,

151

–

157

.

https://doi.org/10.1016/j.ejcb.2005.09.003

Calle

 

Y.

,

Antón

 

I. M.

,

Thrasher

 

A. J.

,

Джонс

 

GE

(

2008

).

WASP и WIP регулируют подосомы в мигрирующих лейкоцитах.

 

J. Microsc.

 

231

,

494

–

505

.

https://doi.org/10.1111/j.1365-2818.2008.02062.x

Шабадель

 

А.

,

Баньон-Родригес

 

I.

,

Cluet

 

D.

,

Rudkin

 

B. B.

,

Wehrle-Haller

 

B.

,

Genot

E.

,

Jurdic

P.

,

Anton

I. М.0002 Ф.

(

2007

).

Интегрин CD44 и бета3 образует в остеокластах два функционально различных домена на основе актина.

 

Мол. биол. Ячейка

 

18

,

4899

–

4910

.

https://doi.org/10.1091/mbc.E07-04-0378

Чжоу

 

H.C.

,

Антон

 

I. M.

,

Holt

 

M. R.

,

Curcio

 

C.

,

Lanzardo

 

S.

,

Worth

 

A.

,

Burns

S.

,

THRASHER

A. J.

,

Jones

G. E.

0016,

Calle

 

Y.

(

2006

).

WIP регулирует стабильность и локализацию WASP в подосомах в мигрирующих дендритных клетках.

 

Курс. биол.

 

16

,

2337

–

2344

.

https://doi.org/10.1016/j.cub.2006.10.037

Кори

 

Г. О.

,

GARG

R.

,

Cramer

R.

,

Ridley

A. J.

(

.

Фосфорилирование тирозина 291 усиливает способность WASp стимулировать полимеризацию актина и образование филоподия. Белок синдрома Вискотта-Олдрича.

 

J. Biol. хим.

 

277

,

45115

–

45121

.

https://doi.org/10.1074/jbc.M203346200

Cory

 

G. O.

,

Cramer

 

R.

,

Blanchoin

 

L.

,

Ридли

 

Эй Джей

(

2003

).

Фосфорилирование домена WASP-VCA увеличивает его сродство к комплексу Arp2/3 и усиливает полимеризацию актина с помощью WASP.

 

Мол. Ячейка

 

11

,

1229

–

1239

.

https://doi.org/10.1016/S1097-2765(03)00172-2

Cougoule

 

C.

,

Le Cabec

 

V.

,

Poincloux

 

Р.

,

Аль Саати

 

Т.

,

Mège

 

J. L.

,

Tabouret

 

G.

,

Lowell

 

C. A.

,

Laviolette-Malirat

 

N.

,

Маридонно-Парини

 

I.

(

2010

).

Трехмерная миграция макрофагов требует Hck для организации подосом и протеолиза внеклеточного матрикса.

 

Кровь

 

115

,

1444

–

1452

5 .

https://doi.org/10.1182/blood-2009-04-218735.

,

Хорвуд

 

Н. Дж.

(

2011

).

Повышенная продукция цитокинов восстанавливает резорбцию кости остеокластами с дефицитом Btk человека.

 

Дж. Костяной шахтер. Рез.

 

26

,

182

–

192

.

https://doi.org/10.1002/jbmr.210

де ла Фуэнте

 

М. А.

,

Сасахара

  09 05

0005

Calamito

 

M.

,

Antón

 

I. M.

,

Elkhal

 

A.

,

Gallego

 

M. D.

,

Suresh

K.

,

Siminovitch

K.

,

OCHS

H. D.

,

Anderson

H. D.

,

H. D.

,

0005

 

К. С.

<и др. (

2007

).

WIP является шапероном для белка синдрома Вискотта-Олдрича (WASP).

 

Проц. Натл. акад. науч. США

 

104

,

926

–

931

.

https://doi.org/10.1073/pnas.0610275104

Дерри

 

Дж. М.

,

Охс

 

H.D.

,

Francke

 

U.

(

1994 5 ).

Выделение нового гена, мутировавшего при синдроме Вискотта-Олдрича.

 

Ячейка

 

78

,

635

–

644 5 9.

https://doi.org/10.1016/0092-8674(94)-2

Донг

 

X.

,

Patino-Lopez

G.

,

Candotti

F.

,

Shaw

S.

(2

555595959 2009 2009 2009 2009 2009 2009 2009 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 9000 .

.

Структурно-функциональный анализ роли WIP в активации NFAT, стимулируемой Т-клеточным рецептором: доказательства того, что диссоциация WIP-WASP не требуется и что окончание WIP Nh3 является ингибирующим.

 

J. Biol. хим.

 

282

,

30303

–

30310

.

https://doi.org/10.1074/jbc.M704972200

Fried

 

S.

,

Reicher

 

B.

,

Pauker

 

M. H.

,

Элиягу

 

С.

,

Маталон

 

O.

,

Noy

 

E.

,

Chill

 

J.

,

Barda-Saad

 

M.

(

2014

) .

Трехцветный FRET-анализ выявляет конформационные изменения в актин-регулирующем комплексе WIP-WASp.

 

Науч. Сигнал.

 

7

,

ра60

.

https://doi.org/10.1126/scisignal.2005198

García

 

E.

,

Jones

 

G. E.

,

Machesky

 

L. M.

,

Antón

 

И. М.

(

2012

).

WIP: белки, взаимодействующие с WASP, в инвадоподиях и подосомах.

 

Евро. Дж. Клеточная биология.

 

91

,

869

–

877

.

https://doi.org/10.1016/j.ejcb.2012.06.002

Guiet

R.

,

POINCLOUX

.

,

6

,

6

,

6

,

6

.

,

Маруа

 

Л.

,

Лабрусс

 

A.

,

LE CABEC

V.

,

Maridonneau-Parini

I.

(

2008

).

Изоформы киназы гемопоэтических клеток (Hck) и функции фагоцитов – от передачи сигналов и реорганизации актина до миграции и фагоцитоза.

 

Евро. Дж. Клеточная биология.

 

87

,

527

–

542

.

https://doi.org/10.1016/j.ejcb.2008.03.008

Guinamard

R.

,

Assenström

P.

,

P.

,

P.

,

P.

,

P.

,

P.

,

P.

.

,

Chavrier

P.

,

Guillemot

J. C.

(

1998

).

Тирозиновое фосфорилирование белка синдрома Вискотта-Олдрича с помощью Lyn и Btk регулируется CDC42.

 

Письмо FEBS.

 

434

,

431

–

436

.

https://doi.org/10.1016/S0014-5793(98)01016-3

HABA

N. Y.

,

Gross

R.

,

95.

,

.

,

959

955 955

955

955

955

.

.

,

Шейк

 

Х.

,

Zidek

L.

,

Barda-SAAD

M.

,

Chill

J. H.

(

2013

).

ЯМР определяет переходную структуру и динамику в неупорядоченном С-концевом домене белка, взаимодействующего с WASp.

 

Биофиз. J.

 

105

,

481

–

493

.

https://doi.org/10.1016/j.bpj.2013.05.046

Hantschel

 

O.

,

Rix

 

U.

,

Superti-Furga

 

Г.

(

2008

).

Целевой спектр ингибиторов BCR-ABL иматиниб, нилотиниб и дазатиниб.

 

Лейк. Лимфома

 

49

,

615

–

619

.

https://doi.org/10.1080/104281

8

Jones

 

G. E.

,

Zicha

 

D.

,

Dunn

 

G. A.

,

Blundell

М.

,

Трэшер

 

А.

(

2002

).

Восстановление подосом и хемотаксиса в макрофагах синдрома Вискотта-Олдрича после индуцированной экспрессии WASp.

 

Междунар. Дж. Биохим. Клеточная биол.

 

34

,

806

–

815

.

https://doi.org/10.1016/S1357-2725(01)00162-5

Ким

 

М. К.

,

Ким

90 С.

  90

5

,

Kim

 

D. S.

,

Choi

 

I. H.

,

Moon

 

T.

,

Yoon

 

C. N.

,

Шин

 

Дж. С.

(

2004

).

Две новые мутации синдрома Вискотта-Олдрича: молекулярное предсказание взаимодействия мутировавшего WASP L101P с белком, взаимодействующим с WASP, путем молекулярного моделирования.

 

Биохим. Биофиз. Acta

 

1690

,

134

–

140

.

https://doi.org/10.1016/j.bbadis.2004.06.007

Kinley

 

A. W.

,

Weed

 

S. A.

,

Weaver

 

A. M.

,

Каргинов

 

А. В.

,

Bissonette

E.

,

Cooper

J. A.

,

Parsons

.

Кортактин взаимодействует с WIP, регулируя активацию Arp2/3 и выпячивание мембраны.

 

Курс. биол.

 

13

,

384

–

393

.

https://doi.org/10.1016/S0960-9822(03)00107-6

Konno

 

A.

,

Kirby

 

M.

,

Anderson

 

S. A.

,

Schwartzberg

P. L.

,

Candotti

F.

(

2007

).

Экспрессия белка синдрома Вискотта-Олдрича (WASP) зависит от белка, взаимодействующего с WASP (WIP).

 

Междунар. Иммунол.

 

19

,

185

–

192

.

https://doi.org/10.1093/intimm/dxl135

Krzewski

 

K.

,

Chen

 

X.

,

Orange

 

J. S.

,

Стромингер

 

Дж. Л.

(

2006

).

Формирование многобелкового комплекса, содержащего WIP-, WASp-, актин- и миозин IIA, в активированных NK-клетках и его изменение с помощью ингибирующей передачи сигналов KIR.

 

J. Cell Biol.

 

173

,

121

–

132

.

https://doi.org/10.1083/jcb.200509076

Linder

 

С.

,

Эпфельбахер

 

М.

(

2003

).

Подосомы: очаги адгезии инвазивных клеток.

 

Trends Cell Biol.

 

13

,

376

–

385

.

https://doi.org/10.1016/S0962-8924(03)00128-4

Макферсон

 

Л.

,

Монипенни

 

J.

,

Blundell

 

M. P.

,

Cory

 

G. O.

,

Tomé-García

 

J.

,

Thrasher

 

A. J.

,

Jones

G. E.

,

Calle

Y.

(

2012

).

Тирозиновое фосфорилирование WASP способствует кальпаин-опосредованной разборке подосом.

 

Гематологический

 

97

,

687

–

695

691

691

https://doi.org/10.3324/haematol.2011.048868

Martinez-Quiles

 

N.

,

Rohatgi

 

R.

,

Antón

 

I. M.

,

Medina

 

M.

,

Saville

 

S. P.

,

Miki

 

H.

,

Yamaguchi

 

H.

,

Takeawa

T.

,

Hartwig

J. H.

,

GEHA

R.

2001

).

WIP регулирует опосредованную N-WASP полимеризацию актина и образование филоподия.

 

Нац. Клеточная биол.

 

3

,

484

–

491

.

https://doi.org/10.1038/35074551

Millard

T. H.

,

Sharp

S. J.

,

Machesky

S. J.0005

 

Л. М.

(

2004

).

Передача сигналов сборке актина через белки семейства WASP (белок синдрома Вискотта-Олдрича) и комплекс Arp2/3.

 

Биохим. Дж.

 

380

,

1

–

17

.

https://doi.org/10.1042/BJ20040176

Монипенни

 

Дж.

,

Chou

 

H. C.

,

Bañón-Rodríguez

 

I.

,

Thrasher

 

A. J.

,

Antón

 

I. M.

,

Jones

 

G. E.

,

Calle

 

Y.

(

2011

5 ).

Роль WASP в клеточной полярности и подосомальной динамике миелоидных клеток.

 

Евро. Дж. Клеточная биология.

 

90

,

198

–

204

.

https://doi.org/10.1016/j.ejcb.2010.05.009

Moreau

V.

,

Frischknecht

F.

,

F.

,

F.

,

F.

,

F.

.

,

Винчентелли

 

Р.

,

RABUT

G.

,

Стюарт

D.

,

Way

M.

(

9000 2000

M.

(

9000 2000

M.

(

9000 2000

M.

9

(

9000 2000

M.

(

9000 2009

M.

(

9595

M.

.

Комплекс N-WASP и WIP объединяет сигнальные каскады, которые приводят к полимеризации актина.

 

Нац. Клеточная биол.

 

2

,

441

–

448

.

https://doi.org/10.1038/35017080

OCHS

H. D.

,

THRASHER

A. J.

(

2006 90056).

Синдром Вискотта-Олдрича.

 

J. Allergy Clin. Иммунол.

 

117

,

725

–

738

.

 

https://doi.org/10.1016/j.jaci.2006.02.005

Peterson

 

F. C.

,

Deng

 

Q.

,

Zettl

 

M.

,

Prehoda

 

K. E.

,

Lim

W. A. ​​

,

Way

M.

,

Volkman

B. F.

(

2007

B. F.

(

2007

B. F.

(

2007

B. F.

(

2007

B. F.

.0016).

Для функционального взаимодействия с N-WASP необходимы множественные мотивы узнавания белков, взаимодействующих с WASP.

 

J. Biol. хим.

 

282

,

8446

–

8453

.

https://doi.org/10.1074/jbc.m609

0

Ponader

S.

,

Chen

S.

,

S.

,

0002 Buggy

 

J. J.

,

Balakrishnan

 

K.

,

Gandhi

 

V.

,

Wierda

 

W. G.

,

Keating

M. J.

,

O’Brien

S.

,

ChioRazzi

N.

,

Burger

0005

 

Дж. А.

(

2012

).

Ингибитор тирозинкиназы Bruton PCI-32765 препятствует выживанию клеток хронического лимфоцитарного лейкоза и перемещению тканей in vitro и in vivo.

 

Кровь

 

119

,

1182

–

1189

.

https://doi.org/10.1182/blood-2011-10-386417

Рамеш

 

N.

,

Antón

I. M.

,

Hartwig

J. H.

,

GEHA

. S.

(000

. S.

(9000 9000

9000. S.

(9000 9000

. S.

(9000 9000

. S.

(9000 9000

9000. S. 9005

(9000 9000

9000. S. 9005

(9000

9000. S.

.

WIP, белок, связанный с белком синдрома Вискотта-Олдрича, индуцирует полимеризацию и перераспределение актина в лимфоидных клетках.

 

Проц. Натл. акад. науч. США

 

94

,

14671

–

14676

.

https://doi.org/10.1073/pnas.94.26.14671

Reicher

 

B.

,

Joseph

 

N.

,

David

 

A.

,

Паукер

 

М. Х.

,

Перл

 

О.

,

2 Барда0005

 

М.

(

2012

).

Зависимая от убиквитилирования негативная регуляция WASp необходима для динамики актинового цитоскелета.

 

Мол. Клетка. биол.

 

32

,

3153

–

3163

.

https://doi.org/10.1128/MCB.00161-12

Рохатги

 

Р.

,

Ноллау

 

P.

,

Ho

 

H. Y.

,

Kirschner

 

M. W.

,

Mayer

 

B. J.

(

2001

).

Nck и фосфатидилинозитол 4,5-бисфосфат синергически активируют полимеризацию актина посредством пути N-WASP-Arp2/3.

 

J. Biol. хим.

 

276

,

26448

–

26452

.

https://doi.org/10.1074/jbc.M103856200

Sakuma

 

C.

,

Sato

 

M.

,

Takenouchi

 

T.

,

Тиба

 

Дж.

,

Китани

 

Х.

(

20120005

).

Критическая роль N-концевого домена WASP и Btk в индуцированном ЛПС воспалительном ответе в макрофагах.

 

PLoS ONE

 

7

,

e30351

.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0030351

Sasahara

 

Y.

,

Rachid

 

R.

,

Byrne

 

M. J.

,

de la Fuente

 

M. A.

,

Abraham

 

R. T.

,

Ramesh

 

N.

,

Geha

 

R. S.

(

2002

).

Механизм привлечения WASP к иммунологическому синапсу и его активации после лигирования TCR.

 

Мол. Ячейка

 

10

,

1269

–

1281

.

https://doi.org/10.1016/S1097-2765(02)00728-1

Scott

 

M. P.

,

Zappacosta

 

F.

,

Kim

 

E. Y.

,

Аннан

 

Р. С.

,

Миллер

 

В. Т.

(

2002

).

Идентификация новых лигандов домена Sh4 для киназы семейства Src Hck. Белок синдрома Вискотта-Олдрича (WASP), белок, взаимодействующий с WASP (WIP), и ELMO1.

 

J. Biol. хим.

 

277

,

28238

–

28246

.

https://doi.org/10.1074/jbc.M202783200

Шу

 

H.

,

Chen

 

S.

,

Bi

 

Q.

,

Mumby

 

M.

,

Brekken

 

Д. Л.

(

2004

).

Идентификация фосфопротеинов и сайтов их фосфорилирования в клеточной линии В-лимфомы WEHI-231.

 

Мол. Клетка. Протеомика

 

3

,

279

–

286

.

https://doi.org/10.1074/mcp.D300003-MCP200

Stewart

 

D. M.

,

Tian

 

L.

,

Nelson

 

D. L.

(

1999

).

Мутации, вызывающие синдром Вискотта-Олдрича, нарушают взаимодействие белка синдрома Вискотта-Олдрича (WASP) с взаимодействующим с WASP белком.

 

J. Immunol.

 

162

,

5019

–

5024

.

Suen

 

P. W.

,

Ilic

 

D.

,

Caveggion

 

E.

,

Berton

 

G.

,

Damsky

 

К. Х.

,

Лоуэлл

 

Ц. А.

(

1999

).

Нарушение опосредованной интегрином передачи сигнала, изменение структуры цитоскелета и снижение подвижности макрофагов с дефицитом Hck/Fgr.

 

J. Cell Sci.

 

112

,

4067

–

4078

.

Тай

 

Ю. Т.

,

Чанг

 

B. Y.

,

Kong

 

S. Y.

,

Fulciniti

 

M.

,

Yang

 

G.

,

Calle

 

Y.

,

Hu

 

Y.

,

Lin

 

J.

,

Zhao

 

J. J.

,

Cagnetta

 

A.

2012

).

Ингибирование тирозинкиназы Брутона является новой терапевтической стратегией, нацеленной на опухоль в микроокружении костного мозга при множественной миеломе.

 

Кровь

 

120

,

1877

–

1887

.

https://doi. org/10.1182/blood-2011-12-396853

Трэшер

 

А. Дж.

(

2002

).

WASp в организации и функционировании иммунной системы.

 

Нац. Преподобный Иммунол.

 

2

,

635

–

646

.

https://doi.org/10.1038/nri884

Thrasher

 

A.J.

,

Бернс

 

S0 O.0016 (

2010

).

WASP: ключевой иммунологический многозадачный прибор.

 

Нац. Преподобный Иммунол.

 

10

,

182

–

192

.

https://doi.org/10.1038/nri2724

Цубои

 

С.

(

2007

).

Потребность в комплексе белка синдрома Вискотта-Олдрича (WASP) с белком, взаимодействующим с WASP, для образования подосом в макрофагах.

 

J. Immunol.

 

178

,

2987

–

2995

.

https://doi.org/10.4049/jimmunol.178.5.2987

TSUBOI

S.

,

Meerloo

J.

(

2009

).

Белок синдрома Вискотта-Олдрича является ключевым регулятором образования фагоцитарной чаши в макрофагах.

 

J. Biol. хим.

 

282

,

34194

–

34203

.

https://doi.org/10.1074/jbc.M705999200

Volkman

 

B. F.

,

Prehoda

 

K. E.

,

Scott

 

J. A.

,

Peterson

 

Ф. К.

,

Лим

 

В. А.

(

2002

).

Структура комплекса домен N-WASP EVh2-WIP: понимание молекулярной основы синдрома Вискотта-Олдрича.

 

Ячейка

 

111

,

565

–

576

5 .

https://doi.org/10.1016/S0092-8674(02)01076-0

Ватанабе

 

Y.

,

Sasahara

 

Y.

,

Ramesh

 

N.

,

Massaad

 

M. J.

,

Yeng Looi

 

C .

,

Kumaki

S.

,

Kure

S.

,

Geha

R.

,

R.

,

R.

,

R.

,

R.

,

.0005

Цучия

 

С.

(

2013

).

Лигирование Т-клеточного рецептора вызывает деградацию белка при синдроме Вискотта-Олдрича и подавление сборки F-актина.

 

J. Allergy Clin. Иммунол.

 

132

,

648

–

655.e1

.

https://doi.org/10.1016/j.jaci.2013.03.046

Ю

 

X.

,

Zech

 

T.

,

McDonald

 

L.

,

Gonzalez

 

E. G.

,

Li

 

A

,

MacPherson

I.

,

Schwarz

J. P.

,

Spence

H.

0016,

Futó

 

K.

,

Timpson

 

P.

2012

).

N-WASP координирует доставку и опосредованный F-актином захват MT1-MMP на инвазивных ложноногах.

 

J. Cell Biol.

 

199

,

527

–

544

.

https://doi.org/10.1083/jcb.201203025

Zettl

 

М.

,

Путь

 

М.

( 06 09 0 2 ).

Домены Wh2 и EVh2 членов семейства WASP и Ena/VASP связывают различные мотивы последовательностей.

 

Курс. биол.

 

12

,

1617

–

1622

.

https://doi.org/10.1016/S0960-9822(02)01112-0

Zicha

 

D.

,

Allen

 

W. E.

,

Brickell

 

P. M.

,

Kinnon

 

C.

,

Dunn

G. A.

,

Jones

G. E.

,

THRASHER

A. J.

(

1998

A. J.

(

1998

A. J.

(

1998

0005

).

Хемотаксис макрофагов отменяется при синдроме Вискотта-Олдрича.

 

Бр. Дж. Гематол.

 

101

,

659

–

665

.

https://doi.org/10.1046/j.1365-2141.1998.00767.x

Дополнительная информация

Дополнительный материал — файл в формате pdf

Нацеливание саракатиниба на члена киназы семейства Src Fyn с помощью ослабленного фиброза печени in vitro и in vivo

Введение

Фиброз печени является глобальной проблемой здравоохранения и критическим процессом при заболеваниях печени, а также основным фактором риска развития цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы ¹ . Прогрессирование и разрешение фиброза представляет собой сложный процесс, включающий взаимодействие между паренхиматозными и непаренхиматозными клетками. Хроническая гибель гепатоцитов и воспаление, вызванное вирусной инфекцией, чрезмерным употреблением алкоголя и неалкогольным стеатогепатитом, рассматриваются как триггерные события фиброза печени ^2,3 . Широко известно, что активированные звездчатые клетки печени (ЗКП) играют ключевую роль в развитии фиброза печени. В ответ на повреждение печени ГСК подвергаются процессу активации, который приобретает миофибробластоподобный фенотип с повышенной пролиферацией клеток, синтезом избыточного внеклеточного матрикса (ВКМ), секрецией провоспалительных цитокинов и способностью мигрировать и сокращаться ⁴ . Несколько цитокинов имеют решающее значение для активации HSC, одним из наиболее важных цитокинов является TGF-β 9.0686 3 . TGF-β индуцирует активацию нижестоящих молекул, таких как передача сигналов SMAD, ERK, AKT, и способствует переходу покоящегося фенотипа в миофибробластоподобный фенотип в HSCs ⁵ . Таким образом, нацеливание на передачу сигналов TGF-β является очень эффективной стратегией для терапии фиброза печени ⁶ .

Семейство киназ Src представляет собой семейство нерецепторных тирозинкиназ, которые играют ключевую роль в регуляции передачи сигнала. Члены киназ семейства Src (SFK), включая Src, Yes, Fyn, Fgr и т. д. ⁷ . Ранее мы и другие показали, что TGF-β индуцирует активацию SFK, включая Src и Fyn ^8,9,10,11,12 . SFKs, особенно Fyn, считались важными для биологической активности TGF-β, о чем свидетельствует отсутствие Fyn, деполимеризация кортикального актинового кольца и миграция в тучных клетках ⁹ . Кроме того, блокада Fyn с помощью siRNA снижала способность TGF-β подавлять экспрессию E-cadherin в клетках рака легкого A549 ¹⁰ . Сообщалось, что SFK играют важную роль в фиброзе легких, почечном фиброзе и системном склерозе ^8,12,13,14 . Блокада SFK, таких как Src и Fyn, была связана со снижением продукции ECM в фибробластах и ​​улучшением фиброза тканей ^8,12,13 . В совокупности активация SFK факторами выше по течению, такими как TGF-β, имеет решающее значение для фиброза легких и почек. Однако то, как SFK способствуют активации HSCs и развитию фиброза печени, остается неясным.

Саракатиниб (AZD0530) представляет собой пероральный биодоступный анилин-хиназолин, который, как было показано, является мощным ингибитором двойной киназы SFK/Abl. Саракатиниб ингибировал активацию Src и рост клеток рака предстательной железы in vitro и в модели ксенотрансплантата мыши in vivo ¹⁵ . Хотя клиническое исследование фазы II не показало положительного эффекта против рака предстательной железы у пациентов ¹⁶ , клиническое исследование фазы I подтвердило осуществимость и переносимость лечения саракатинибом у пациентов ¹⁷ . Наше предыдущее исследование показало, что саракатиниб блокирует TGF-β-индуцированную активацию киназы Src дозозависимым образом и снижает продукцию ECM в фибробластах легких. Саракатиниб также ослаблял тяжесть фиброза легких в модели фиброза легких мышей с блеомицином 9.0686 8 . Однако неизвестно, может ли Саракатиниб помочь при фиброзе печени.

В этом исследовании мы исследовали роль Fyn, одного из SFK, который высоко экспрессируется в HSCs и активируется в фиброзной печени, в развитии фиброза печени. Мы также оценили антифиброзную активность in vitro и in vivo ингибитора SFK саракатиниба, безопасность которого была доказана в клинических испытаниях.

Материалы и методы

Материалы

Саракатиниб (CAS: 379231-04-6) был приобретен у Selleck Chemicals (США). TGF-β (CAT. 240-B-010-RND) был приобретен у R&D Systems. Самцы мышей C57BL/6 были приобретены в компании Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. Мыши C57BL/6 с нокаутом Fyn (самцы, 8 недель) были приобретены в лаборатории Jackson.

Набор пациентов

Три образца нормальной ткани и три образца ткани с фиброзом печени были получены из отделения гепатобилиарной хирургии Пятого медицинского центра больницы общего профиля НОАК (Пекин, Китай). От пациентов было получено информированное согласие в письменной форме. Этот протокол исследования был одобрен комитетом по обзору Пятого медицинского центра больницы общего профиля НОАК (2014046D).

Гистологические и иммуногистохимические исследования

Образцы печени фиксировали формалином, заливали парафином и делали срезы, а также подвергали стандартной окраске H&E, Masson и Sirius red. Антитело для иммуногистохимического окрашивания фосфо-Fyn (P-Fyn Y416) было приобретено у Cell Signaling Technology (#6943).

Культура клеток

Иммортализованные линии HSC человека (LX-2) и крысы (HSC-T6) использовали в соответствии с предыдущими отчетами ^18,19 . Клеточная линия LX-2 была любезно предоставлена ​​профессором Лиин Ли. Клетка HSC-T6 была приобретена у Bio Tech Co., Ltd (№ CL-0116). Первичные HSC мыши выделяли в соответствии с процедурами, описанными ранее ²⁰ . Клетки и первичные HSC мыши в DMEM (Hyclone, США), и все они были дополнены 10% (об./об.) FBS, 100 единиц/мл пенициллина G, 100 мкг/мл сульфата стрептомицина и 2 мМ l-глютамина. Все клетки культивировали во влажном инкубаторе при 37 °C в атмосфере 5% (об./об.) CO ₂ в воздухе.

Обработка TGF-β

Для индукции TGF-β, HSC были лишены сыворотки в течение 4 часов, а затем обработаны саракатинибом в течение 4 часов с последующей стимуляцией рекомбинантным человеческим TGF-β 10 нг/мл в течение 20 минут.

Ко-иммунопреципитация

Для экспериментов по ко-иммунопреципитации экстракты цельных клеток готовили в лизирующем буфере (Cell Signaling) с комплексом ингибиторов протеазы (Roche Diagnostics) и затем подвергали иммунопреципитации антителами против семейства Src (фосфор Y416) (CST, #6943 S), иммобилизованный на протеине A/G PLUS-агарозе (Santa Cruz Biotechnology). Иммунопреципитаты разделяли с помощью 10% SDS-PAGE и иммуноблотинга с антителами, перечисленными ниже, против Fyn (CST, #4023 T), против Src (CST, #2123 T), против Lyn (CST, #2796 T), анти-Lck (Santa Cruz Biotechnology) и анти-Hck (CST, #14643 S) антитела соответственно.

Вестерн-блоттинг

Для вестерн-блоттинга после денатурации образцы помещали в узкие лунки 10% SDS-PAGE, а затем гель анализировали для разделения белков. Белки влажно переносили на мембрану из ПВДФ, и мембрану блокировали инкубацией с 5% обезжиренным молоком при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем мембрану инкубировали с первичными антителами при 4°С в течение ночи. После слива первых антител мембрану трижды кратко промывали буфером TBST по 15 мин каждый раз, а затем добавляли вторичное антитело в соответствующем разведении. После осторожного покачивания в течение 2 ч мембрану снова промывали, как и раньше. Антитела, используемые для вестерн-блоттинга, включают: анти-FAK (Thermo, #PA5-17591), анти-p-FAK(397) (Invitrogen, #700255), анти-N-WASP (R&D, #AF3854), анти-p-N-WASP (256) (abcam, #ab23395), анти-α-SMA (abcam, #ab5694), анти-коллаген I (abcam, #ab138492), анти-p-Fyn(530) (GeneTax, #GTX3215), анти-ERK1/2 (Санта-Крус, #SC-514302), анти- p-ERK 1/2 (Санта-Крус, #SC-136521), анти-p-Akt (Санта-Крус, #SC-271966) и анти-Akt (Санта-Крус, #SC-5298).

Выделение и культивирование первичных ГСК мыши

Первичные гепатоциты мыши выделяли из печени мыши в соответствии с предыдущим протоколом ²¹ . Вкратце, печень мышей сначала перфузировали in situ через воротную вену сбалансированным солевым раствором Хэнка (HBSS) с добавлением 0,5 мМ EGTA и 25 мМ HEPES при 37 °C. Затем буфер заменили 0,1% раствором коллагеназы в HBSS (содержащим 4 мМ CaCl ₂ и 0,8 мМ MgSO ₄ ). Через несколько минут перфузии печень быстро вырезали из полости тела и распределяли в холодном HBSS. Полученную клеточную суспензию фильтровали через стерильный нейлоновый фильтр для клеток с размером пор 70 мм (Falcon; BD Biosciences) и центрифугировали три раза при 30 g в течение 4 мин. Осадки суспендировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки плюс 10% лошадиной сыворотки для первичной культуры гепатоцитов.

Фиброз печени, индуцированный CCl

₄

Самцов мышей C57BL/6 в возрасте 6–8 недель приобретали с одобрения Институционального комитета по этике. Каждая экспериментальная группа состояла из трех мышей. Это исследование на животных получило одобрение комитета Пятого медицинского центра больницы общего профиля НОАК. Для исследования фиброза печени, индуцированного CCl ₄ , все экспериментальные группы с фиброзом получали 40% CCl ₄ внутрибрюшинно. инъекции (2 мл/кг/масса тела, растворенные в 100 мкл оливкового масла) три раза в неделю. Фиброз печени индуцировали CCl ₄ введение в течение 10 недель. Группе лечения вводили CCl ₄ в течение 4 недель, а затем ежедневно вводили саракатиниб (15 или 40 мг/кг) вместе с инъекцией CCl ₄ в течение еще 6 недель, тогда как контрольные мыши получали только оливковое масло в течение 10 недель. .

Влияние саракатиниба на пролиферацию клеток

Жизнеспособность клеток оценивали с помощью набора для подсчета нерадиоактивных клеток (CCK-8, Dojindo, Kamimashiki-gun, Kumamoto, Japan) в соответствии с инструкциями производителя. Первичные мышиные HSC, HSCT6 и LX-2 высевали в 96-луночный планшет с плотностью 3000 клеток на лунку, через каждые 24 часа в каждую лунку добавляли реагент CCK-8 и планшеты инкубировали еще 1 час при 37 °C. Жизнеспособность клеток измеряли по поглощению при 450 нм с помощью спектрофотометра Elx800™ (BioTek, Winooski, VT, USA).

Анализ миграции HSC

Миграционные свойства клеток HSC оценивали с помощью анализа заживления ран. Клетки высевали с плотностью 8 × 10 ⁵ клеток/лунку в шестилуночный планшет и позволяли достичь слияния. Затем слой клеток соскабливали тонкой иглой, чтобы создать рану диаметром ~ 1500 мкм. Изображения раны записывали под фазово-контрастным микроскопом в разное время (0, 6, 12 и 24 ч). Закрытие раны/миграцию клеток оценивали с помощью программного обеспечения Image J.

РНК-интерференция

Трансфекции проводили на клетках с концентрацией Fyn siRNA 100 нМ. SiRNA трансфицировали липофектамином 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) в соответствии с рекомендациями производителя. Последовательности миРНК описаны в дополнительной таблице 1.

Статистический анализ

Непрерывные переменные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (SD), а категориальные данные представлены в виде числа (в процентах) в зависимости от ситуации. Чтобы сравнить значения между двумя группами, Студенческий 9Использовался тест 0149 т . Все тесты были двусторонними, и значение p  < 0,05 считалось значимым. Большинство экспериментов были повторены в трех независимых испытаниях с аналогичными результатами, и в эту статью включены репрезентативные изображения.

Результаты

Fyn был аномально активирован в тканях печени с клиникой фиброза ). TGF-β значительно увеличивал уровни SFK pY416, обнаруживаемые антителом (P-SFK Y416), которое может распознавать сайт фосфорилирования Y416 в большинстве SFK, включая Fyn, Src, Lyn, Lck и Hck (рис. 1а). Затем мы использовали антитело P-SFKs Y416 в анализе co-IP, чтобы выяснить, какой член (члены) SFK был активирован TGF-β в клетках LX-2, как показано на рис. 1a, только Fyn, но не другие члены SFK. были значительно увеличены при обработке TGF-β, что позволяет предположить, что Fyn отвечает за TGF-β-индуцированную активацию SFK в клетках LX-2. На самом деле экспрессия Fyn на уровне транскрипции была самой высокой в ​​семействе src по сравнению с другими членами (Fig.

S1). Затем мы проверили, активируется ли Fyn у пациентов с фиброзом печени человека. Как показано на рис. 1b, мы наблюдали значительное увеличение pY416-Fyn (активированный сайт) в фиброзной печени по сравнению с контрольной группой, в то время как общие уровни Fyn были сопоставимы в двух группах. Напротив, pY530-Fyn (ингибирующий сайт) уменьшались. Как и ожидалось, α-SMA, маркер активации HSCs, был высоко экспрессирован в фиброзной печени. Чтобы уточнить клеточный источник pY416-Fyn, мы провели окрашивание серийных срезов для H&E, окрашивание по Массону и иммуногистохимическое окрашивание для pY416-Fyn. Как показано на рис. 1c, фиброзные области показали самое высокое окрашивание pY416-Fyn, что свидетельствует о том, что активированные HSCs являются основным источником активированного Fyn в печени с фиброзом.

Рис. 1: Fyn был аномально активирован в фиброзных тканях печени.

a Коиммунопреципитация фосфорилированного семейства Src (Y-416) с последующим вестерн-блоттингом каждого члена семейства Src (FYN, SRC, LYN, LCK, HCK). b Вестерн-блоттинг экспрессии Fyn и уровня фосфорилирования Fyn (Y-416) из биоптатов нормальной и фиброзной печени. (Среднее  ± SD; N  = 3, * p  < 0,05 по критерию Стьюдента t ). c Репрезентативные срезы окрашивания H&E, окрашивания Массона и ИГХ на p-Fyn (Y416) из залитых парафином срезов здоровых, фиброзных и цирротических тканей печени. Штриховая линия указывает на фиброзную область.

Полноразмерное изображение

Передача сигналов Fyn способствовала активации HSC

Затем мы спросили, требуется ли активация Fyn для активации HSC и продукции ECM. Клетки линии клеток HSC человека LX-2 обрабатывали TGF-β (10 нг/мл). Как и ожидалось, маркер активации HSC, α-SMA, был значительно повышен при лечении TGF-β, в то время как уровни pY416-Fyn также повышались при лечении TGF-β (рис. 2а). Чтобы прояснить роль Fyn в активации HSC, мы эффективно сбили Fyn с помощью siRNA, как показано на рис. 2b, нокдаун Fyn подавлял увеличение α-SMA, коллагена I и фосфорилированных FAK и N-WASP в LX-2. клетки, индуцированные TGF-β. Кроме того, повышенная способность к пролиферации и миграции LX-2 при обработке TGF-β блокировалась Fyn siRNA (рис. 2c, d).

Рис. 2: Передача сигналов Fyn способствует активации HSC.

a Уровни pY416-Fyn и α-SMA LX2 проверяли после обработки TGF-β. Клетки b LX-2 трансфицировали si-Fyn или контрольной siRNA в течение 48 ч, а затем обрабатывали TGF-β (10 нг/мл) в течение указанных интервалов времени. Экстракты клеток затем подвергали вестерн-блоттингу. c Влияние нокдауна Fyn с помощью siRNA на пролиферацию клеток LX-2. d Влияние нокдауна Fyn с помощью siRNA на миграцию клеток LX-2. Данные взяты из репрезентативного эксперимента, который был повторен три раза с аналогичными результатами. (Среднее значение ± SD, ** p  < 0,01 по критерию Стьюдента t ).

Изображение в полный размер

Затем мы дополнительно оценили роль активации Fyn HSC в мышиной модели фиброза печени in vivo. Мыши WT и Fyn KO получали постоянные инъекции CCl ₄ в течение 4 и 6 недель. У мышей WT развился значительный фиброз печени после хронического лечения CCl ₄ , что подтверждается окрашиванием H&E, окрашиванием по Массону и окрашиванием сириусом красным, как показано на рис. 3a, b. Напротив, мыши Fyn KO показали гораздо меньшее окрашивание коллагена по сравнению с мышами WT (рис. 3а, б). В соответствии с этими результатами окрашивания, другие маркеры фиброза печени, такие как уровни гиалуроновой кислоты в печени, аланинаминотрансферазы, содержание коллагена IV типа и уровни α-SMA в печени, были ниже у мышей Fyn KO по сравнению с мышами WT (рис. 3c, г). Все эти данные подтверждают критическую роль Fyn в активации HSCs и развитии фиброза печени.

Рис. 3: Дефицит Fyn in vivo, ослабленный фиброз печени, индуцированный CCl ₄ .

Тест in vivo проводили на 6-недельных мышах C57BL/6 путем внутрибрюшинной инъекции CCl ₄ в течение 4 или 6 недель. a Репрезентативная фотография микрофотографии окрашивания H&E, окрашивания по Массону и окрашивания сириусом красным срезов тканей печени, залитых парафином (масштабные линейки, 100 мкм). b Статистический анализ окрашивания Sirius red, относительная площадь фиброза печени была рассчитана с помощью Image-Pro Plus для трех разных полей зрения. c Химический анализ сыворотки на уровень гиалуроновой кислоты, аланинаминотрансферазы и коллагена IV типа. d Вестерн-блоттинг показал наличие Fyn и a-SMA в печени мышей Fyn WT и KO. (Среднее  ± SD; N  = 3, * p  < 0,05, ** p  < 0,01, по критерию Стьюдента t ).

Изображение полного размера

Саракатиниб подавлял активацию HSC in vitro

Поскольку наши данные показали, что Fyn можно рассматривать в качестве привлекательной лекарственной мишени для лечения фиброза печени, мы оценили возможное терапевтическое воздействие на фиброз печени клинически доказанного безопасного небольшого молекула ингибитора Fyn Саракатиниб. Наши данные также подтверждают безопасность саракатиниба у мышей (рис. S2). Саракатиниб значительно снижал повышенные уровни Fyn при обработке TGF-β в клетках LX-2, захваченных антителом P-SFKs Y416 (рис. 1а). Более того, мы показали, что саракатиниб дозозависимо блокирует фосфорилирование Y416 Fyn (рис. 4а). Эти данные свидетельствуют о том, что Саракатиниб может непосредственно воздействовать на активацию Fyn. Кроме того, маркеры активации HSC, такие как α-SMA и коллаген I, снижались при лечении саракатинибом дозозависимым образом. Кроме того, присутствие саракатиниба снижало жизнеспособность клеток как в клетках линии клеток HSC человека LX-2, так и в клетках линии клеток HSC крысы HSC-T6, что было определено с помощью анализа CCK-8. Напротив, саракатиниб продемонстрировал лишь незначительное влияние на жизнеспособность клеток. клеток линии LO2 эмбриональных гепатоцитов человека (рис. 4b–d). Дальнейшие исследования показали, что ингибирование жизнеспособности саракатиниба на ГСК не связано с индукцией апоптоза (рис. S3). Затем мы проверили влияние саракатиниба на миграцию клеток HSC с помощью анализа заживления ран. Как показано на рис. 4e, закрытие раны стимулировалось TGF-β, а эффекты TGF-β ослаблялись саракатинибом в зависимости от дозы в клетках LX-2 и клетках HSC-T6. Эти данные подтверждают, что опосредованная TGF-β активация и миграция HSC могут быть заблокированы саракатинибом.

Рис. 4: Влияние саракатиниба на активацию, рост и миграцию в клеточных линиях HSC.

a Клетки LX-2 обрабатывали саракатинибом в течение 24 ч и стимулировали TGF-β, экспрессия маркера активации HSC α-SMA, коллагена I и P-Fyn (416) определялась вестерн-блоттингом , α-SMA и коллаген значительно уменьшились. Влияние саракатиниба на клетки HSC-T6 ( b ), LX-2 ( c ) и LO-2 ( d ). Клетки культивировали в течение 72 ч в присутствии различных концентраций саракатиниба. Пролиферацию измеряли с помощью набора CCK-8. Результаты были репрезентативными для трех экспериментов, и каждая концентрация повторялась шесть раз в каждом эксперименте. e Саракатиниб ингибировал миграцию активированных HSC, определяемую в тесте на заживление ран. HSC-T6 и LX-2 инкубировали в присутствии различных концентраций саракатиниба в течение 24 часов. Значения выражены как мигрирующая площадь необработанного контроля из трех независимых экспериментов. (Среднее  ± SD; N  = 3, * p  < 0,05, ** p  < 0,01, *** p  < 0,0001 по критерию Стьюдента 9014).

Изображение с полным размером

Затем мы проверили потенциальное антифибротическое действие саракатиниба на свежевыделенных ГСК мыши. ГСК, выделенные от мышей, культивировали в течение 7 дней, в контрольной группе ГСК демонстрировали типичную морфологию миофибробластов и высокий уровень экспрессии маркеров активации ГСК α-SMA и коллагена I (рис. 5а, б). Присутствие саракатиниба сохраняло черты покоящихся HSC, такие как липидные везикулы в перинуклеарных участках и астральную морфологию (рис. 5а). Активация α-SMA и коллагена I также снижалась при лечении саракатинибом (рис. 5b). В совокупности саракатиниб блокировал активацию Fyn и предотвращал активацию как клеточных линий HSC, так и свежевыделенных HSC in vitro.

Рис. 5: Влияние саракатиниба на морфологию и активацию первичных ЗКП.

a Репрезентативные фотографии морфологических изменений первичных ГСК мыши на 7-й день с обработкой саракатинибом или без нее. b Вестерн-блоттинг проверил экспрессию α-SMA и коллагена I на первичных HSC с обработкой саракатинибом или без нее.

Изображение полного размера

Саракатиниб подавляет путь Fyn/FAK/N-WASP

Взаимодействия между киназой Src и FAK необходимы для поддержания активности FAK ⁸ , который был необходим для фосфорилирования N-WASP и образования нитей α-SMA ²² . Мы проверили, участвует ли аналогичный сигнальный путь в опосредованной Fyn активации HSC. Мы показали, что фосфорилирование как FAK, так и N-WASP блокировалось, когда активация Fyn ингибировалась саракатинибом (рис. 6а). Подобные результаты также наблюдались в первичных HSCs мыши (Fig. 6b). Кроме того, саракатиниб снижал активацию нижестоящей передачи сигналов FAK, такой как передача сигналов ERK и AKT, которые имели решающее значение для стимуляции пролиферации и выживания клеток (рис. 6c).

Рис. 6: Саракатиниб подавлял путь Fyn/FAK/N-WASP.

Вестерн-блот-анализ экспрессии фосфорилированных Fyn, FAK и N-WASP в клетках LX-2 ( a ) и первичных HSC мыши ( b ) с саракатинибом после обработки 10 нг/мл TGF-β . c Вестерн-блоттинг показал, что Саракатиниб подавлял экспрессию фосфорилированных Akt и ERK в клетках LX-2, обработанных 10 нг/мл TGF-β. Данные взяты из репрезентативного эксперимента, который был повторен трижды.

Полноразмерное изображение

Саракатиниб облегчает фиброз печени мышей, вызванный CCl

₄

Выдающийся антифибротический эффект саракатиниба in vitro побудил нас продолжить изучение его благоприятного воздействия in vivo на фиброз печени. Саракатиниб (20 и 40 мг/кг) вводили через зонд один раз в день в течение 6 недель после 4 недель инъекций CCl ₄ . Как показано на рис. 7а, б, саракатиниб значительно уменьшал фиброз печени, что подтверждается окрашиванием H&E, Masson и Sirus red. Повышение уровня гиалуроновой кислоты в печени и содержания коллагена IV типа при хроническом CCl 9Лечение 0796 4 было значительно ослаблено саракатинибом (рис. 7c). Результаты вестерн-блоттинга показали, что активация Fyn у мышей, получавших хронически CCl ₄ , ингибировалась саракатинибом, а повышенный уровень α-SMA также блокировался у мышей, получавших саракатиниб через зонд (рис. 7d). Эти данные подтвердили, что саракатиниб может эффективно уменьшать фиброз печени в мышиной модели.

Рис. 7. Саракатиниб уменьшает фиброз печени мышей, вызванный CCl ₄ .

a Схема исследования на животных. Модель фиброза печени была выполнена на 6-недельных мышах C57BL/6 с помощью CCl 9. 0796 4 внутрибрюшинная инъекция в течение 4 недель. Затем Саракатиниб вводили через зонд один раз в день в течение еще 6 недель. Мышей случайным образом разделили на четыре группы ( N  = 6–10 в каждой группе): контроль, CCl ₄ инъекция, CCl ₄ инъекция + Саракатиниб 20 мг /кг и CCl ₄ инъекции + Саракатиниб 40 мг/кг. b Типичная фотография окрашивания H&E, окрашивания по Массону и окрашивания сириусом красным срезов тканей печени, залитых парафином (масштабные линейки, 100 мкм). c Статистический анализ окрашивания сириусом красным, относительная площадь фиброза печени была рассчитана с помощью Image-Pro Plus для трех разных полей зрения от 6 до 10 мышей. d Химический анализ сыворотки на гиалуроновую кислоту, аланинаминотрансферазу и коллаген IV типа. e Вестерн-блоттинг показал, что саракатиниб также значительно подавлял экспрессию P-Fyn (Y416) и α-SMA в печени мыши. (Среднее значение ± SD; N  = 3, * p  < 0,05, ** p  < 0,01 и *** p  < 0,001 по критерию Стьюдента t ).

Изображение полного размера

Обсуждение

В этом исследовании мы показали критическую роль Fyn в активации ГСК и развитии фиброза печени. Как показано на рис. 8, Fyn активировался в HSCs при стимуляции TGF-β, хроническом лечении CCl ₄ фиброзной печени мыши и в образцах печени пациентов с фиброзом печени человека. Активированный Fyn способствовал активации HSC, вероятно, за счет взаимодействия между Fyn и FAK, которое активировало FAK и приводило к фосфорилированию N-WASP 9.0686 23,24 . У мышей с дефицитом Fyn наблюдался облегчающий CCl ₄ индуцированный фиброз печени. Важно отметить, что мы протестировали антифибротические эффекты клинически доказанного безопасного ингибитора Fyn Саракатиниба in vitro и in vivo. Наши результаты показали, что саракатиниб значительно блокирует активацию как клеточных линий HSC, так и первичных клеток HSC. Пероральное введение саракатиниба значительно ослабляло фиброз печени в мышиной модели фиброза печени, индуцированной CCl ₄ . Саракатиниб ингибирует Fyn и другие члены SFK.

Рис. 8

Схематическая модель антифиброзного механизма Саракатиниба.

Изображение полного размера

На данный момент известно девять членов SFK: Src, Yes, Fyn, Fgr, Lyn, Hck, Lck, Yrk и Blk. Fyn в основном экспрессируется в головном мозге, фибробластах, эндотелиальных клетках, кератиноцитах, Т- и В-клетках ⁷ . Fyn был единственным SFK, который активировался, когда HSC активировались TGFβ. Однако мало что было известно о функции Fyn в HSCs. Наша предыдущая работа была сосредоточена на роли активированного Src в переходе от фибробластов легких к миофибробластам. Ингибитор киназы Src Саракатиниб блокировал индуцированную TGF-β активацию киназы Src и экспрессию α-SMA в фибробластах легких ⁸ . Саракатиниб также может эффективно снижать фиброз легких, вызванный блеомицином ⁸ . Нацеливание на Src было также эффективным в предотвращении развития почечного фиброза ¹² . Что касается Fyn, его роль в фиброзе печени не была хорошо задокументирована. Сео и др. показали, что мыши, лишенные Fyn, были устойчивы к почечному фиброзу, вызванному односторонней обструкцией мочеточника ¹³ . Был ли Fyn вовлечен в активацию HSCs и фиброз печени, неизвестно. Мы показали, что Fyn активировался в HSCs при лечении TGF-β, модели фиброза печени мыши и у пациентов с фиброзом печени человека. Нокдаун Fyn ингибировал активацию, пролиферацию и миграцию HSCs, более того, у мышей с дефицитом Fyn развивался гораздо меньший фиброз при хроническом CCl ₄ модель. Все эти данные убедительно подтверждают, что Fyn также имеет решающее значение в патогенезе фиброза печени.

Механизм того, как передача сигналов Fyn способствует активации HSCs, до сих пор неизвестен и будет изучаться в нашей будущей работе. Мы и другие продемонстрировали, что FAK необходим для TGF-β-индуцированной экспрессии α-SMA и дифференцировки миофибробластов ^25,26,27 . Активированный FAK напрямую связывается с N-WASP и приводит к фосфорилированию остатка тирозина 256 (Y256) N-WASP 9. 0686 22,28 . Было хорошо установлено, что N-WASP играет решающую роль в формировании филоподий и распространении клеток ^29,30,31 . Наше предыдущее исследование также подтвердило, что делеция FAK отменяет фосфорилирование N-WASP и впоследствии снижает экспрессию α-SMA, индуцированную TGF-β ²² . На основании этих исследований мы проверили, способствует ли активированный Fyn активации HSC посредством взаимодействия с FAK и N-WASP. Мы показали, что нокдаун Fyn значительно снижает активацию FAK (рис. 2б). Кроме того, лечение ингибитором Fyn саракатинибом нарушило взаимодействие между Fyn и FAK, а также активацию N-WASP, что может объяснить заметные антифибротические эффекты саракатиниба и потенциальный механизм, с помощью которого Fyn активирует HSC.

Саракатиниб был новым ингибитором SFK, который является мощной мишенью не только для c-Src, но и для других членов семейства src: Fyn, c-Yes, Lyn, Blk, Fgr и Lck ³² . Недавно Саракатиниб был использован для эффективного лечения экспериментальных моделей фиброза легких ⁸ . Однако до сих пор неизвестно, оказывает ли саракатиниб какое-либо влияние на фиброз печени. Хотя в развитие фиброза печени и фиброза легких/почки вовлечены некоторые общие сигнальные пути, необходимо проверить уникальные особенности ГСК, клеток, продуцирующих ВКМ в печени, чтобы понять, может ли Саракатиниб эффективно блокировать активацию ГСК. Здесь мы подтвердили, что саракатиниб продемонстрировал мощное ингибирующее действие на активацию клеточной линии HSC, первичных HSC и CCl 9.0796 4 -модель индуцированного фиброза печени. Мы также предположили, что антифибротические эффекты саракатиниба опосредованы ингибированием передачи сигналов Fyn и нарушением взаимодействия между Fyn и FAK.

Таким образом, наши результаты показывают, что саракатиниб можно использовать для лечения пациентов с фиброзом печени путем нацеливания на Fyn в ГСК, поскольку безопасность и фармакокинетика саракатиниба хорошо задокументированы ³² .

Ссылки

1. «>

   Zhang, D.Y. & Friedman, S.L. Зависимые от фиброза механизмы гепатоканцерогенеза. Гепатология 56 , 769–775 (2012).

   КАС Статья Google ученый

2. Траутвейн К., Фридман С.Л., Шуппан Д. и Пинзани М. Фиброз печени: концепция лечения. Дж. Гепатол. 62 (1 Приложение), S15–S24 (2015).

   КАС Статья Google ученый

3. Bataller, R. & Brenner, D. A. Фиброз печени. Дж. Клин. Инвестировать . 115 , 209–218 (2005).

   КАС Статья Google ученый

4. Lee, U.E. & Friedman, S.L. Механизмы фиброгенеза печени. Лучший. Пр. Рез клин. Гастроэнтерол. 25 , 195–206 (2011).

   КАС Статья Google ученый

5. Liu, X. , Hu, H. & Yin, J. Q. Терапевтические стратегии против сигнального пути TGF-бета при фиброзе печени. Печень, внутр. 26 , 8–22 (2006).

   Артикул Google ученый

6. Фабрегат, И. и др. Передача сигналов TGF-бета и заболевание печени. FEBS J. 283 , 2219–2232 (2016).

   КАС Статья Google ученый

7. Гоэль, Р. К. и Луконг, К. Э. Понимание клеточных ролей киназы, связанной с Fyn (FRK): значение в биологии рака. Метастазы рака, ред. 35 , 179–199 (2016).

   КАС Статья Google ученый

8. Ху, М. и др. Терапевтическое нацеливание киназы SRC на дифференцировку миофибробластов и легочный фиброз. Дж. Фарм. Эксп. тер. 351 , 87–95 (2014).

   Артикул Google ученый

9. «>

   Ramirez-Valadez, K. A., Vazquez-Victorio, G., Macias-Silva, M. & Gonzalez-Espinosa, C. Киназа Fyn опосредует кортикальную деполимеризацию актинового кольца, необходимую для миграции тучных клеток в ответ на TGF-бета у мышей . Евро. Дж. Иммунол. 47 , 1305–1316 (2017).

   КАС Статья Google ученый

10. Ким А. Н. и др. Fyn опосредует понижающую регуляцию E-кадгерина, индуцированную трансформирующим фактором роста-бета1, в клетках рака легких человека A549. Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 407 , 181–184 (2011).

    КАС Статья Google ученый

11. Ю. Л. и др. TGF-бета1 индуцирует повреждение подоцитов посредством пути Smad3-ERK-NF-kappaB и Fyn-зависимого фосфорилирования TRPC6. Клеточная физиол. Биохим . 26 , 869–878 (2010).

    КАС Статья Google ученый

12. «>

    Ян Ю. и др. Ингибирование Src блокирует активацию почечных интерстициальных фибробластов и уменьшает почечный фиброз. Почки, внутр. 89 , 68–81 (2016).

    КАС Статья Google ученый

13. Seo, H.Y. et al. Дефицит Fyn ослабляет почечный фиброз за счет ингибирования фосфо-STAT3. Почки Инт . 90 , 1285–1297 (2016).

    КАС Статья Google ученый

14. Схиртладзе, К. и др. Киназы Src при системном склерозе: центральная роль в активации фибробластов и фиброзе кожи. Ревматоидный артрит. 58 , 1475–1484 (2008).

    КАС Статья Google ученый

15. Chang, Y.M. et al. Онкогенный потенциал и пути киназ семейства Src при раке предстательной железы, как показано AZD0530. Онкоген 27 , 6365–6375 (2008).

    КАС Статья Google ученый

16. Лара П. Н. мл. и др. Испытание фазы II ингибитора Src-киназы AZD0530 у пациентов с прогрессирующим раком предстательной железы, резистентным к кастрации: исследование Калифорнийского онкологического консорциума. Противораковые препараты 20 , 179–184 (2009).

    КАС Статья Google ученый

17. Tabernero, J. et al. Фаза I исследования AZD0530, мощного перорального ингибитора киназы Src: первая демонстрация ингибирования активности Src при раке человека. Дж. Клин. Онкол. 25 (18 Дополнение), 3520–3520 (2007).

    Google ученый

18. Сюй, Л. и др. Линии звездчатых клеток печени человека, LX-1 и LX-2: новые инструменты для анализа фиброза печени. Гут 54 , 142–151 (2005).

    КАС Статья Google ученый

19. Vogel, S. et al. Иммортализованная линия звездчатых клеток печени крысы (HSC-T6): новая клеточная модель для изучения метаболизма ретиноидов in vitro. J. Липидный рез . 41 , 882–893 (2000).

    КАС пабмед Google ученый

20. Рамирес, Т. и др. Старение усугубляет алкогольное повреждение печени и фиброз у мышей за счет подавления экспрессии сиртуина-1. Ж. Гепатол. 66 , 601–609 (2017).

    КАС Статья Google ученый

21. Jeong, W. I. et al. Подавление врожденного иммунитета (естественные клетки-киллеры/интерферон-гамма) на поздних стадиях фиброза печени у мышей. Гепатология 53 , 1342–1351 (2011).

    КАС Статья Google ученый

22. «>

    Cai, G. Q. et al. Нейрональный белок синдрома Вискотта-Олдрича (N-WASP) имеет решающее значение для образования альфа-гладкомышечных актиновых филаментов во время дифференцировки миофибробластов. 901:49 утра. Дж. Физиол. Мол.клеток легких. Физиол. 303 , L692–L702 (2012 г.).

    КАС Статья Google ученый

23. Че, П. и др. S100A4 способствует прогрессированию рака поджелудочной железы посредством двойного сигнального пути, опосредованного Src и киназой фокальной адгезии. науч. Респ. 5 , 8453 (2015).

    КАС Статья Google ученый

24. Cai, G.Q. et al. Нейрональный белок синдрома Вискотта-Олдрича (N-WASP) имеет решающее значение для образования α-гладкомышечных актиновых филаментов во время дифференцировки миофибробластов. утра. Дж. Физиол. Мол.клеток легких. Физиол. 303 , 692–702 (2012).

    Артикул Google ученый

25. Zhao, X.K. et al. Киназа фокальной адгезии регулирует активацию звездчатых клеток печени и фиброз печени. науч. Рем. 7 , 4032 (2017).

    Артикул Google ученый

26. Ding, Q., Gladson, C.L., Wu, H., Hayasaka, H. & Olman, M.A. Киназа фокальной адгезии (FAK), не связанная с киназой, ингибирует дифференцировку миофибробластов за счет дифференциальной активации MAPK в зависимости от FAK. . Дж. Биол. хим. 283 , 26839–26849 (2008 г.).

    КАС Статья Google ученый

27. Thannickal, VJ et al. Дифференцировка миофибробластов путем трансформации фактора роста-бета1 зависит от клеточной адгезии и передачи сигналов интегрина через киназу фокальной адгезии. Дж. Биол. хим. 278 , 12384–12389 (2003 г. ).

    КАС Статья Google ученый

28. Wu, X., Suetsugu, S., Cooper, L.A., Takenawa, T. & Guan, J.L. Киназа фокальной адгезии, регулирующая субклеточную локализацию и функцию N-WASP. Дж. Биол. хим. 279 , 9565–9576 (2004 г.).

    КАС Статья Google ученый

29. Домингес, Р. Зарождение актиновых филаментов и взаимосвязь между факторами удлинения и структурой. Крит. Преподобный Биохим. Мол. биол. 44 ​​ , 351–366 (2009).

    КАС Статья Google ученый

30. Zhang, X., Moore, S.W., Iskratsch, T. & Sheetz, M.P. N-WASP-направленная полимеризация актина активирует фосфорилирование Cas и распространение ламеллиподия. J. Cell Sci. 127 (часть 7), 1394–1405 (2014).

    КАС Статья Google ученый

31. «>

    Такенава Т. и Суэцугу С. Белковая сеть WASP-WAVE: соединение мембраны с цитоскелетом. Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. 8 , 37–48 (2007).

    КАС Статья Google ученый

32. Грин, Т. П. и др. Доклиническая противораковая активность мощного перорального ингибитора Src AZD0530. Мол. Онкол. 3 , 248–261 (2009).

    КАС Статья Google ученый

Скачать ссылки

Осиные галлы | ДИКОЕ СЛОВО

WASP GALLS

Весной 2014 года я сидел в Гайд-парке. Солнце стояло низко, а земля   была твердой. Земля была твердой, потому что была покрыта маленькими скрюченными   деревяшками. Осиные галлы под дубом. Это были, конечно,   знакомый мне, но в тот момент удивительный и ужасающий. Охваченный   трепетом научно-фантастического фильма, я набил карманы и пошел домой.

Andricus quercuscalicis, оса, вырабатывающая желчь Кноппера, вводит свое яйцо в цветы дуба. Это вызывает генетическую мутацию в цветке, и вместо желудя в нем вырастает галл, толстое восковое место жительства для личинки осы, которая питается питательными веществами, предназначенными для желудя. Осенью желчь затвердевает и отпадает. Когда приходит весна, из личинки появляется оса, чтобы найти себе пару или другой цветок дуба.

Генетическая связь, которую этот паразит развил с дубами , является гиперспецифической, чтобы они могли запустить эту мутацию. На самом деле это не просто дубы, а два отдельных рода дуба. Осы размножаются циклами: одно поколение партеногенетическое (все самки), а следующее половое, каждое со своим особым предпочтением дуба. Дуб черешчатый и турецкий дуб соответственно.[1]

Оса была впервые обнаружена в Великобритании в 1960-х годах в Девоне, распространившись из южной и восточной Европы более 400 лет. С тех пор она распространилась на север и была обнаружена в загородном парке Эглинтон в Северном Эйршире в 2007 году. 79, такое медленное распространение может быть связано с тем, что они должны находиться в районах с обоими родами дубов. Хотя нельзя не учитывать изменение климата, делающее север все более привлекательным.[2]

Многие паразитические насекомые образуют галлы на растениях и мало влияют на хозяина. Однако галл Кноппера поражает дуб в точке его размножения. На каждый галл приходится на один желудь меньше, и плодовитость дерева уменьшается. Официальные лица говорят, что галл Кноппера в настоящее время не представляет серьезной угрозы для британских дубов, однако на Гавайях местное правительство было вынуждено внедрить вторичного паразита для борьбы с осами, производящими галлы, которые опустошали местные коралловые деревья.[3]

КАТАЛОГ ФОТОГРАФИЙ

Для этой коллекции галлы были сфотографированы с использованием фиксированного набора лупы, штатива и источников света. Стиль фотографий статичен, чтобы подчеркнуть различия в предметах. Этот метод вдохновлен фотографиями промышленной архитектуры Бернда и Хиллы

Бехер. Бехеры задокументировали многочисленные здания и постройки строго плоского стиля. Представляя группы фотографий разных зданий, построенных для одной и той же цели (доменные печи, бункеры для хранения, коксовые печи и т. д.), они создавали серию за серией изображений с бесконечными тонкими вариациями и, казалось бы, чудесным сходством.

В отличие от желудей, которые в целом очень похожи друг на друга, галлы Кноппера чрезвычайно разнообразны. Несмотря на огромное разнообразие форм и форм на фотографиях, каждая из них безошибочно является реликтом этой конкретной паразитической мутации.

В 2011 году Тайсир Батниджи выпустил серию работ под названием «Сторожевые башни, Западный берег/Палестина». Следуя примеру Бехеров, Батниджи и нанятый фотограф решили сделать серию фотографий израильских сторожевых башен. Из-за политических ограничений на фотографирование таких сооружений фотографиям Батниджи не хватает совершенства Бехеров. Именно в этом искажении идеала становится ясной точка зрения Батниджи: это не фотографии о том, как выглядят здания, а политика, окружающая их видимость и их возможности наблюдения.

Метод, используемый для каталогизации фотографий в этой коллекции, также является искажением, поскольку он полностью основан на личной эстетике. Процесс был сложным и длительным, и то, что на первый взгляд может показаться научным, на самом деле таковым не является. Выбор, сделанный в этой таксономии, полностью стилистический, и в этом отношении коллекция, возможно, более тесно связана с модой, чем с ботаникой. Это привлекает внимание к воображаемому разрыву между ними и непопулярной идее о том, что в науке есть либеральная доля личного вкуса, а в искусстве – холодный расчет.

[1] Этот абзац говорит нам: Это существо резко отличается от нас и генерирует быстрее, чем мы. Его сила в женщинах. Наши акты патриархата делают нас слабыми.

[2] Этот абзац говорит нам: Это ползущая угроза, и мы навлекли ее на себя. В нашем упадке мы делаем себя уязвимыми для наших врагов, которые многочисленны и набирают силу.

[3] Этот параграф говорит нам: Наше самодовольство не служит нам.