Нк 32 серии 02: НК-32-02 Авиация России

Содержание

Двигатели НК-32-02 и будущее дальней авиации

Ту-160М «Игорь Сикорский» — первый носитель серийных НК-32-02. Фото ОАК

Продолжается программа модернизации и возобновления строительства стратегических бомбардировщиков-ракетоносцев Ту-160М. Одним из ключевых ее компонентов является проект модернизированного двигателя «второй серии» НК-32-02. К настоящему времени двигатель доведен до серии, и серийные изделия испытываются в воздухе.

Новости года

В этом году регулярно появлялись оптимистичные новости о проекте возобновления производства турбореактивных двигателей НК-32. Так, в феврале, во время визита делегации министерства обороны на производство ПАО «Кузнецов» было объявлено, что проект идет в соответствии с графиком. При этом осуществлялся поиск способов ускорения работ.

На форуме «Армия-2020» в августе Объединенная двигателестроительная корпорация сообщила о завершении изготовления и испытаний первой установочной партии двигателей НК-32 второго этапа. Изделия полностью соответствуют требованиям и приняты заказчиком.

К тому времени были завершены все мероприятия по подготовке серийного производства. Более того, его запустили и уже приступили к поставке новых изделий НК-32-02. ОДК пообещала наращивать темпы производства двигателей для выполнения требований компании «Туполев» и министерства обороны.

Готовые серийные двигатели поступили на Казанский авиационный завод для монтажа на модернизируемых самолетах. 3 ноября обновленный Ту-160М «Игорь Сикорский» совершил первый испытательный полет с двигателями НК-32-02. Эта машина проходит летные испытания с февраля, однако до сих пор летала с силовой установкой старой модели.

Испытательный полет 2 февраля 2020 г. Фото ОАК

Полет продлился 2 ч 20 мин. и происходил на высоте 6 тыс.м. Целью полета была проверка общесамолетных систем и радиоэлектронного оборудования новых типов. Кроме того, оценили работу новых двигателей. Полет прошел штатно, замечания к работе систем и агрегатов отсутствовали.

Прошлое и настоящее

Серийное производство турбореактивных двигателей НК-32 первой модификации было запущено в 1983 г. на площадках куйбышевского НПО «Труд». Оно велось исключительно в интересах строительства стратегических бомбардировщиков Ту-160. Сборка двигателей продолжалась до 1993 г. и по сути остановилось вместе со строительством самолетов. За 10 лет «Труд» собрал порядка 250 двигателей. За счет этого удалось оснастить более 30 построенных самолетов и создать солидный складской запас готовых моторов и запчастей.

На протяжении последующих десятилетий эксплуатация Ту-160 обеспечивалась за счет своевременного обслуживания и ремонта двигателей. По мере выработки ресурса двигателей проводилась ремоторизация. Резкое уменьшение парка боеспособных самолетов и сокращение интенсивности полетов после распада СССР позволили в некоторой мере ограничить выработку ресурса и потребность в новых двигателях. Однако в дальнейшем началось обсуждение восстановления их производства – теперь оно дало реальные результаты.

Технические особенности

Главной целью работ последнего времени было восстановление производства, остановленного в начале девяностых годов. Для этого пришлось провести реконструкцию производственных мощностей, а также развернуть различные линии и освоить новые технологии. Внедрены новые принципы производственной логистики. Модернизация производства осуществлялась с привлечением профильных институтов.

Также предусматривалось обновление конструкции НК-32 с учетом последних достижений науки и техники. В этом контексте использовали новые конструктивные решения и современные технологии производства. За счет таких доработок планировалось повысить основные характеристики двигателя и тем самым нарастить некоторые параметры самолетов.

НК-32-02 на заводе «Кузнецов». Кадр из т/п «Военная приемка», т/к «Звезда»

По известным данным, модернизированный НК-32-02 сохраняет все основные особенности архитектуры и конструкции. Это по-прежнему двухконтурный трехвальный двигатель; в компрессоре сохранены ступени высокого и среднего давления, а в турбине имеются ступени, высокого, среднего и низкого давления. При этом обновлены некоторые компоненты и использована современная система управления.

Основные характеристики остались на прежнем уровне. Форсажная тяга – 25000 кгс. При этом за счет различных доработок удалось сократить расход топлива примерно на 10%. Утверждается, что за счет повышения экономичности максимальная дальность полета Ту-160М вырастет на 1000 км или более, в зависимости от режима. При этом отсутствует необходимость увеличения баков или дозаправки в полете. Соответственно, боевой потенциал ракетоносца растет.

Перспективы проекта

Поставки серийных двигателей НК-32-02 начались этим летом. Какое количество изделий успели поставить Казанскому авиазаводу за прошедшие месяцы – неизвестно. При этом очевидно, что на производство поступило не менее четырех двигателей, т. е. комплект для оснащения одного самолета Ту-160М. Вероятно, поставки продолжаются, и запас моторов на заводе растет.

Производство двигателей ведется в рамках контракта 2018 г., который предусматривает поставку 22 изделий в течение нескольких следующих лет. Его выполнение позволит переоснастить пять бомбардировщиков и оставить два изделия в запасе.

По известным данным, актуальные планы Минобороны предусматривают глубокую модернизацию 15 строевых бомбардировщиков Ту-160 до состояния «М». За прошедшее время несколько самолетов прошли ремонт и обновление, однако серийные двигатели НК-32-02 пока получил только один из них. По мере продолжения модернизации, следующие машины будут получать такие двигатели. Затем возможна ремоторизация ранее обновленной техники.

Компрессор нового двигателя. Кадр из т/п «Военная приемка», т/к «Звезда»

Начато строительство бомбардировщиков новой серии Ту-160М2, которые изначально будут комплектоваться современными двигателями. Первый из них поднимется в воздух в следующем году, и в дальнейшем будет построено еще девять.

Нетрудно заметить, что существующий контракт на двигатели НК-32 второй серии недостаточен для выполнения всех намеченных планов по модернизации и строительству самолетов. Пока заказано только 22 двигателя, тогда как потребности авиастроительной программы в ее нынешнем виде достигают 100 ед., не считая складского запаса. Это показывает, что в ближайшее время может появиться новый заказ на двигатели в больших количествах.

Любопытно, что перспективы НК-32-02 не ограничиваются только проектами семейства Ту-160. Ранее неоднократно сообщалось, что на основе этого двигателя будет создано новое изделие для использования на перспективном бомбардировщике ПАК ДА. Также предлагалось выполнить на основе НК-32 двигатель для транспортных Ан-124.

Без слабых мест

На протяжении нескольких последних десятилетий неоднократно запускались программы модернизации бомбардировщиков Ту-160 того или иного рода. Несколько лет назад приняли решение о возобновлении производства таких самолетов. Однако у всех этих программ и планов было слабое место – отсутствие производства двигателей НК-32. Планируя развитие дальней авиации, приходилось полагаться только на имеющиеся складские запасы.

Очевидным – но весьма сложным – выходом являлось восстановление производства двигателей. Решение этой задачи заняло несколько лет и все же привело к желаемым результатам. ОДК и «Кузнецов» не только возобновили выпуск двигателей, но и провели их модернизацию с оптимизацией характеристик.

Как следует из опубликованных данных, темпы производства двигателей НК-32-02 пока остаются небольшими, однако они достаточны для выполнения имеющихся планов по ремонту и строительству авиационной техники. Таким образом, главная проблема в контексте эксплуатации и поддержания Ту-160(М) успешно решена, и можно не беспокоиться за будущее дальней авиации.

Двигатели НК-32-02 подняли в небо сверхзвуковой бомбардировщик Ту-160М

Домой Авиация Двигатели НК-32-02 подняли в небо сверхзвуковой бомбардировщик Ту-160М

3 ноября в Казани совершил первый полет модернизированный стратегический бомбардировщик Ту-160М с усовершенствованными двигателями НК-32-02

По сообщению пресс-службы ПАО «Туполев», в ходе полета были выполнены необходимые проверки обновленных общесамолетных систем и бортового радиоэлектронного оборудования, установленных в рамках глубокой модернизации самолета, а также произведена оценена работа нового двигателя НК-32 серии 02 (НК-32-02), разработки и производства предприятий Объединенной двигателестроительной корпорации (ОДК), входящей в состав госкорпорации «Ростех». Самолет пилотировал экипаж под руководством заслуженного летчика-испытателя России, работающего на Жуковской летно-испытательной и доводочной базе (ЖЛИиДБ) компании «Туполев» Анри Наскидянца (1960 г.р.). Полет проходил на высоте 6 тыс. м и длился 2 часа 20 мин. По официальной информации, во время полета были выполнены необходимые проверки усовершенствованных систем и оборудования. По данным экипажа, полет прошел в штатном режиме, системы и оборудование самолета отработали без замечаний.

Серийное производство двигателей НК-32 для бомбардировщиков Ту-160 было развернуто в 1984 г. и приостановлено в 1993 г. Через 20 лет было принято решение о возобновлении в «ОДК-Кузнецов» серийного производства моторов НК-32 в модернизированной версии НК-32-02.

Работы по возобновлению производства НК-32 в модернизированном варианте ведутся в компании «Кузнецов с 2013 г. Согласно первому контракту от 2016 г., компания «Кузнецов» должна была сдать первую установочную партию НК-32-02 к концу 2018 г.

ПАО «ОДК-Кузнецов» получило в 2018 г. крупный госконтракт на изготовление еще 22 двигателей НК-32-02 (предположительно, для первых четырех серийно модернизированных Ту-160М и головного образца Ту-160М2 новой постройки, плюс два запасных).

Первые усовершенствованные НК-32-02 были собраны в компании «Кузнецов» и поступили на стендовые испытания в 2017 г. Только летом нынешнего года первая установочная партия двигателей НК-32-02 была поставлена компанией «ОДК-Кузнецов» для Ту-160М на КАЗ.

Сейчас в Самаре в компании «ОДК-Кузнецов» завершается модернизация производства и стендовой испытательной базы, которая потребовалась для начала серийного выпуска двигателей НК-32-02. Разработчики утверждают, что модернизированный двигатель НК-32 серии 02 обладает значительно улучшенными характеристиками по сравнению с НК-32, что позволит самолетам Ту-160М/М2 увеличить дальность полета на 1 тыс. км, а на особых режимах и более.

Согласно заявленным требованиям, основная и дублирующая электронные системы двигателя НК-32-02 должны обеспечить полет бомбардировщика продолжительностью до 30 часов.

Системы топливопитания и гидромеханического регулирования должны работать при околонулевых и отрицательных перегрузках до 2,7 g и при температурах от -60 до +50 градусов Цельсия. Минимальный срок службы изделия должен составлять 12 лет с возможностью продления срока эксплуатации до 21 года. Отдельно отмечено, что двигатель НК-32-02 должен быть устойчив к воздействию поражающих факторов ядерного оружия.

Справка ЖВ

Стратегический бомбардировщик-ракетоносец Ту-160 считается самым крупным и тяжелым сверхзвуковым самолетом в мире. Согласно открытым данным, максимальная скорость машины — 2230 километров в час, дальность полета – 13 900 километров, высота полета – 22 километра, размах крыла – до 56 метров. Самолет, способный перевозить до 40 тонн вооружения, впервые полетел в 1981 г.

Проект модернизации самолетов Ту-160 в вариант Ту-160М («изделие 70М») был утвержден в октябре 2014 г. Первый опытный Ту-160М был создан в рамках масштабной программы модернизации строевых авиационных комплексов стратегической и дальней авиации, которую выполняет ПАО «Туполев». Первый полет модернизированного стратегического бомбардировщика Ту-160М состоялся 2 февраля 2020 г. В рамках глубокой модернизации на машине Ту-160М установлено новое пилотажно-навигационное оборудование, бортовой комплекс связи, система управления, РЛС, комплекс радиоэлектронного противодействия. В начале испытаний на первом опытном образце Ту-160М «Валентин Близнюк» двигатели НК-32-02 не были установлен, в воздух самолет взлетел на двигателях НК-32.

По словам заместителя министра обороны Алексея Криворучко, модернизированный сверхзвуковой бомбардировщик Ту-160М2, построенный с «нуля», совершит свой первый полет в 2021 г., его строительство идет по плану. Как сказал А.Криворучко, поставки в соединения и части дальней авиации машины Ту-160М2 должны начаться в 2023 г. Воздушно-космические силы (ВКС) России получат 10 бомбардировщиков Ту-160М2 к 2027 г. Также А.Криворучко заявил, что новые модернизированные Ту-160М2, построенные с «нуля», не будут отличаться от модернизированных самолетов марки Ту-160М. Маркировка Ту-160М2 будет использоваться для обозначения построенных с «нуля» бомбардировщиков от усовершенствованных строевых машин марки Ту-160. До уровня Ту-160М также должны быть модернизированы 15 строевых самолетов Ту-160 ВКС России.

Параллельно с возобновлением серийного производства самолета Ту-160 на Казанском авиазаводе проводится реконструкция предприятия, ведутся работы по обновлению станочного парка.

Поддержи Жуковские вести!

Подробнее о поддержке можно прочитать тут

Юрий Пономарев

Обозреватель. Ведущий рубрик «Авиация», «Чтобы помнили»

Погода в городе

enter location

16.3 ° C

16.8 °

13.1 °

Кузнецов НК-32 — frwiki.wiki

Кузнецы НК-32 является низким разбавление, дважды проходить военный турбореактивный двигатель с форсажной камерой .

Резюме

1 НК-32
2 НК-32-02
3 ссылки
4 Внешние ссылки

НК-32

Развивая тягу 55000 фунтов силы (245

кН ) с форсажной камерой, он приводит в движение сверхзвуковой бомбардировщик Туполев Ту-160, который совершил свой первый полет в 1981 году и был установлен на примере сверхзвукового транспортного самолета Туполев Ту-144ЛЛ, использовавшегося НАСА в период между 1996 и 1999 г.

Ту-160 приземлился в 2019 году.

Это самый большой и мощный двигатель, когда-либо устанавливаемый на боевой самолет. Однако следует отметить, что более мощные реакторы, такие как General Electric GE90 , установленные на гражданских самолетах, приносят в жертву скорость выхода газа, чтобы иметь большую тягу; поэтому они не могут разогнаться до сверхзвуковых скоростей . Его производство остановлено в середине 1990-х годов.

НК-32-02

Турбореактивный двигатель НК-32-02 разрабатывался еще в 1987 году, но из-за проблем с финансированием в то время не выпускался.

Самарская компания Кузнецова подписала контракт в август 2014 г. Что касается возобновления производства НК-32 серии 02 с заказанными 20 или 22 двигателями, то первые опытные образцы были поставлены в конце 2018 года.

Усовершенствования, внесенные на НК-32-02, касаются лопаток компрессора и турбины, внутренней аэродинамики, а также улучшенного внутреннего охлаждения. В результате потребление керосина было уменьшено, что позволило увеличить дальность полета до одной тысячи км, при этом взлетная тяга, то есть 25 т, осталась неизменной. Текущая версия двигателя Ту-160М2 имеет обозначение НК32-02М2, а срок его эксплуатации оценивается в десяток лет.

В 20 февраля 2020 г.

объявляется о необходимости ускорения производства.

Объявлен первый полет Ту-160 с этими новыми двигателями. 3 ноября 2020 г..

Внешние ссылки

(cs) « Сверхзвуковые туполевые двигатели (НК-144, НК-22, НК-23, НК-25, РД-36-51) »

Кузнецов авиадвигатели
Турбореактивные двигатели	НК-8 НК-25 НК-32 НК-86 НК-87 НК-144
Турбовинтовой	НК-12
Экспериментальные двигатели	НК-14

Серийный двигатель НК-32-02 установлен на Ту-160М “Игорь Сикорский” для проведения испытаний

На фото: Ту-160М “Игорь Сикорский” – первый носитель серийных НК-32-02. Фото ОАК. Продолжается программа модернизации и возобновления строительства стратегических бомбардировщиков-ракетоносцев Ту-160М. Одним из ключевых ее компонентов является проект модернизированного двигателя «второй серии» НК-32-02. К настоящему времени двигатель доведен до серии, и серийные изделия испытываются в воздухе. В этом году регулярно появлялись оптимистичные новости о проекте возобновления производства турбореактивных двигателей НК-32. Так, в феврале, во время визита делегации министерства обороны на производство ПАО «Кузнецов» было объявлено, что проект идет в соответствии с графиком. При этом осуществлялся поиск способов ускорения работ. На форуме «Армия-2020» в августе Объединенная двигателестроительная корпорация сообщила о завершении изготовления и испытаний первой установочной партии двигателей НК-32 второго этапа. Изделия полностью соответствуют требованиям и приняты заказчиком.

Испытательный полет 2 февраля 2020 г. Фото ОАК

Воспользуйтесь нашими услугами

НК-32-02 на заводе “Кузнецов”. Кадр из т/п “Военная приемка”, т/к “Звезда”

Поставки серийных двигателей НК-32-02 начались этим летом. Какое количество изделий успели поставить Казанскому авиазаводу за прошедшие месяцы – неизвестно. При этом очевидно, что на производство поступило не менее четырех двигателей, т.е. комплект для оснащения одного самолета Ту-160М. Вероятно, поставки продолжаются, и запас моторов на заводе растет.

Компрессор нового двигателя. Кадр из т/п “Военная приемка”, т/к “Звезда”

Нетрудно заметить, что существующий контракт на двигатели НК-32 второй серии недостаточен для выполнения всех намеченных планов по модернизации и строительству самолетов. Пока заказано только 22 двигателя, тогда как потребности авиастроительной программы в ее нынешнем виде достигают 100 ед. , не считая складского запаса. Это показывает, что в ближайшее время может появиться новый заказ на двигатели в больших количествах.

Автор: Рябов Кирилл
Источник: https://topwar.ru/

Воспользуйтесь нашими услугами

Понравилась статья? Тогда поддержите нас, поделитесь с друзьями и заглядывайте по рекламным ссылкам!

Возвращение «Белого лебедя»: новые «стратеги» на базе Ту-160

Декабря

18 декабря 1981 года совершил первый полёт опытный образец межконтинентального стратегического ракетоносца-бомбардировщика Ту-160 – самого крупного и могущественного сверхзвукового боевого самолёта в истории мировой военной авиации. Повышение значимости и усиление мощи стратегической авиации России напрямую связаны с проведением глубокой модернизации строевых самолётов и возобновлением их выпуска в обновлённом облике. Авиасалон МАКС является единственным из крупнейших авиасалонов мира, посетители которого имеют привилегию видеть Ту-160, названный за свою красоту и грацию «Белым лебедем».

Разработка нового стратегического межконтинентального ракетоносца началась в СССР в конце 1960-х годов, когда стало очевидно, что ракетные вооружения не могут решить всех стратегических задач современной войны. Разработка велась на конкурсной основе: среди участников на разных стадиях проекта выступали ОКБ Сухого, Мясищева и Туполева. Совокупность заданных требований ставила перед конструкторами сложнейшую и трудноосуществимую задачу. Самолёт должен был иметь дальность полёта в пределах 11 — 13 тыс. км на скорости 2200 — 2500 км/ч на высоте 18 тыс. м, дальность полёта в дозвуковом режиме на высоте 16 — 18 тыс. км, иметь суммарную массу боевой нагрузки до 45 тонн, преодолевать ПВО противника в сверхзвуковом высотном режиме или на крейсерской скорости у земли. Назначение «стратега» – поражение критически важных объектов в удаленных географических районах и в глубоком тылу континентальных театров военных действий.

В итоге создание самолёта было поручено ОКБ Туполева, имевшему опыт создания сверхзвуковых Ту-22М и Ту-144. Туполевцам предстояла грандиозная по масштабам работа, в которую были вовлечены ведущие отраслевые НИИ и предприятия всего советского ВПК. Оптимизация схемы и параметров будущего самолёта и его силовой установки, выбор конструкционных материалов и разработка новых технологий, поиск оптимальной структуры и взаимосвязи комплексов и систем бортового оборудования и вооружения – в общей сложности работами по теме изделия «70» занималось около 800 предприятий и организаций. Был проведен беспрецедентный объём научно-исследовательских работ. В ходе исследований в аэродинамических трубах были выполнены продувки 70 вариантов моделей, созданы 60 стендов и семь летающих лабораторий, разработаны новые станки и оборудование, апробированы десятки новых технологий и материалов. Итогом стала конструкция в виде свободнонесущего моноплана с крылом изменяемой стреловидности, обеспечивающим устойчивый полёт на различных скоростных режимах, цельноповоротными стабилизатором и килем, четырьмя двухконтурными турбореактивными двигателями НК-32, установленными под крылом в спаренных гондолах. Основными материалами планера стали титан, алюминиевые термообработанные сплавы, стальные сплавы и композиционные материалы.

Первый лётный экземпляр самолёта заложили в постройку на Московском машиностроительном заводе «Опыт» (так с 1966 года называлось туполевское КБ) в 1977 году. Работы велись в тесной кооперации с авиационным заводом КАПО им. С.П. Горбунова в Казани, имевшим большой опыт по выпуску средних и тяжёлых бомбардировщиков. 14 ноября 1981 года машина совершила первую рулёжку, а 18 декабря 1981 года первый опытный самолёт впервые поднялся в воздух с аэродрома ЛИИ в Жуковском.

Высокие характеристики Ту-160 впоследствии были подтверждены 44 мировыми рекордами, в том числе по дальности и продолжительности полёта: многорежимность позволяла самолёту достигать рекордных показателей как при полёте на больших высотах со сверхзвуковой скоростью, так и на малых высотах в режиме огибания рельефа местности.

Параллельно с созданием первого лётного образца полным ходом шла подготовка к серийному производству Ту-160 на КАПО. Это потребовало радикальных перемен: в ходе работ в общей сложности на предприятии было введено более 300 тысяч кв. м. новых производственных площадей, проведена коренная реконструкция имеющегося производства.

Программа строительства Ту-160 предусматривала выпуск порядка 100 машин, из них к началу 1990-х годов на авиазаводе в Казани было построено 34 самолёта. Однако распад СССР кардинально изменил судьбу программы. После раздела Вооруженных сил Советского Союза 19 самолётов остались на территории Украины. Из них 10 бортов были уничтожены, ещё восемь самолётов удалось вернуть в Россию, которой пришлось фактически заново создавать стратегическую группировку бомбардировщиков Ту-160: необходимо было ввести в строй полностью укомплектованный полк самолётов этого типа.

Решение о возобновлении производства стратегических ракетоносцев Ту-160 было принято президентом России в мае 2015 года. В ноябре 2016 года на заводе в Казани начали восстанавливать ключевые технологии для производства модернизированной версии «стратега». Выкатка опытного образца модернизированного Ту-160М состоялась 16 ноября 2017 года. Серийное производство Ту-160М на КАПО началось в 2021 году. Параллельно на предприятии идут работы по созданию Ту-160М2 – новейшей модификации стратегического ракетоносца, боевые возможности которого возрастут за счёт расширения спектра вооружения и применения новых двигателей НК-32 серии 02, позволяющих увеличить дальность полёта на 1000 км. Заложенные при создании Ту-160 конструкторские решения позволяют и спустя 40 лет его модернизированному варианту оставаться беспрецедентно грозной силой.

Впервые любители авиации увидели Ту-160 в Жуковском на «МосАэроШоу-92». Показательный полёт совершил первый опытный экземпляр самолёта «70-01». Начиная с МАКС-1993 самолёт становится практически постоянным участником программы салона. Нынешние посетители МАКС уже привыкли к тому, что на статической стоянке их традиционно встречает строевой Ту-160 Дальней авиации ВКС России. В разные годы на МАКС прилетали «Алекандр Новиков», «Николай Кузнецов», «Павел Таран», «Владимир Судец», «Валентин Близнюк», «Василий «Решетников» – имена собственные стали присваивать самолётам в середине 1990-х, когда в рамках подготовки к параду Победы 1995 года Ту-160 получил имя своего знаменитого предшественника «Ильи Муромца». Интересно, что на салоне демонстрировались не только испытательная и строевая версии самолёта. Так на МАКС-1995 и МАКС-1997 был представлен самолёт-имитатор комплекса Ту-160СК с макетом ракеты-носителя «Бурлак», который предназначался для запуска на околоземные орбиты коммерческих искусственных спутников. Это было попыткой разработчиков Ту-160 найти ему в том числе и гражданское применение.

Незабываемым моментом лётной программы МАКС всегда остается пролёт «Белого лебедя» на малой высоте: легендарный исполин – как финальный аргумент в доказательстве тезиса о том, что Россия была, есть и будет оставаться великой авиационной державой. Следим за развитием программы создания стратегического авиационного комплекса следующего поколения и ждем появления на МАКС модернизированной версии ракетоносца Ту-160М!

Экс-командующий Дальней авиацией оценил новые двигатели «Блэк Джека»

11.03.2021 в 07:45 Политика 50159

Разработчики модернизированного ракетоносца Ту-160М (по западной классификации «Блэк Джек») сообщили о начале этапа испытаний с новыми двигателями НК-32 серии 02. Опытный самолет совершил перелет из Казани к месту проведения предварительных тестовых полетов. «МК» попросил оценить значение этого события бывшего командующего Дальней авиацией генерал-лейтенанта Михаила Опарина.

Фото: ru.wikipedia.org

Решение о возобновлении после длительного перерыва производства модернизированных Ту-160М на Казанском авиазаводе был принято несколько лет назад. Для этого пришлось восстановить несколько почти утраченных технологий, в том числе титановую сварку.

ВКС России планирует заказать несколько десятков таких самолетов, каждый из которых несет до 12 крылатых ракет большой дальности, в том числе с ядерными зарядами.

Важный элемент модернизации – замена двигателей НК-32 на более современные и эффективные НК-32-02.

По информации авиастроителей, Ту-160М, кроме новых двигателей, имеет также новый состав бортового радиоэлектронного оборудования. Все это улучшило его летно-технические характеристики.

Оценивая модернизированный самолет, военный летчик-снайпер, Заслуженный военный летчик России, бывший командующий дальней авиацией генерал-лейтенант Михаил Опарин сказал «МК»:

-Я завидую тем ребятам, которые сегодня служат в Дальней авиации и владеют этим грозным оружием, которые будут летать на этой боевой машине. Вспоминаю времена, когда мне пришлось осваивать полёты на Ту-160. Это замечательная машина. Начало испытаний первого модернизированного самолета Ту-160М с двигателями второго этапа НК-32-02 – это очень важное событие. Прежде всего, это повышение боевых возможностей Дальней авиации по досягаемости объектов противника и решению специальных боевых задач в современных условиях.

Рекордная продолжительность полета Ту-160, как вы, наверное, знаете — 24 часа 24 минуты. Но это с несколькими дозаправками в воздухе. А вот без дозаправки пройти такое же расстояние и выйти на такую же дальность — это впереди. Самое главное, что у нас уже есть такой двигатель — самый мощный в мировой военной авиации, и мы им владеем.

Генерал напомнил, что Ту-160 совершали полеты через Атлантику в Венесуэлу, а также над Индийским океаном до Южно-Африканской республики.

-Хочу пожелать испытателям из фирмы «Туполев» быстрее довести машину до ума, — сказал член Общественного совета при Минобороны РФ Михаил Опарин. — Я считаю себя туполевцем, поскольку на всех турбореактивных самолётах этого KБ я летал и имею опыт боевой работы. Могу сравнить с боевыми машинами, которые стоят на вооружении нашего вероятного противника, как мы говорили в советское время.

Сегодняшнее событие — большая победа. Одно только пожелание создателям самолета: надо всё делать вовремя, не отставать. Иначе все задержки и издержки сокращают наши боевые возможности.

Модернизированные самолеты Ту-160М, которые должны будут в скором времени прийти на вооружение Дальней авиации, кроме новых, более эффективных и современных двигателей, получают ряд других очень серьезных изменений, и всё это повышает боевые возможности по поражению объектов вероятного противника.

Авторы:

Сергей Вальченко

Казань Россия Венесуэла Грозный

Что еще почитать

Что почитать:Ещё материалы

В регионах

Полиция задержала 50 девушек в красном на петрозаводской площади Кирова.
ФОТО
Фото 16180
Карелия
Ирина Стафеева
Самые вкусные оладьи из кабачков по-новому
13911
Калуга
Елена Одинцова
Как получить звание ветерана труда
4033
Великий Новгород
Белобородько Мария
Жительницы Улан-Удэ становятся проститутками ради уплаты долгов и помощи близким
3803
Улан-Удэ
Роксана Родионова
«Надо настраиваться»: стилист в Улан-Удэ предсказала возвращение моды нулевых годов
Фото 3343
Улан-Удэ
Сэсэг Жигжитова
Костромские проблемы: в наших лесах исчезли грибы
2154
Кострома

В регионах:Ещё материалы

Российский модернизированный бомбардировщик Ту-160М2 летает с новыми двигателями НК-32-02

Модернизированный российский бомбардировщик Ту-160М2 летает с новыми двигателями НК-32-02 Значок поискаУвеличительное стекло.

Это означает: «Нажмите, чтобы выполнить поиск». Логотип InsiderСлово «Инсайдер». Значок шевронаОн указывает на расширяемый раздел или меню, а иногда и на предыдущие/следующие параметры навигации.ДОМАШНЯЯ СТРАНИЦА

Военные и оборонные участники

Дэвид Ченчотти,

Авиационист

2020-11-05T15:17:16Z

Значок «Сохранить статью» Значок «Закладка» Значок «Поделиться» Изогнутая стрелка, указывающая вправо.

Скачать приложение

Стратегический бомбардировщик Туполев Ту-160 над Красной площадью во время Парада Победы в Москве, 9 мая 2015 года.

РИА Новости/REUTERS

Недавно модернизированный российский бомбардировщик Ту-160 совершил первый полет с новой версией НК-32, самого большого и мощного двигателя, когда-либо устанавливавшегося на военные самолеты.
Новые двигатели позволяют Ту-160 увеличить дальность полета как минимум на 1000 км, заявил представитель Минобороны России в 2015 году.
Посетите домашнюю страницу Business Insider, чтобы узнать больше.

LoadingЧто-то загружается.

Последняя версия массивного российского Ту-160 (по классификации НАТО «Блэкджек») вылетела из Казани, Россия, с новыми двигателями НК-32-02, сообщила Объединенная авиастроительная корпорация 3 ноября 2020 года.

Первый полет модернизированного стратегического бомбардировщика Ту-160М2 с новыми ТРДД продолжался 2 часа 20 минут и был проведен на высоте 6000 метров.

Интересно, что изображения новых двигателей самолета, испытания которых начались в 2017 году, не были опубликованы «из соображений безопасности», а на фотографиях, которые ОАК использовала в социальных сетях, изображен полностью модернизированный Ту-160М, названный «Игорь Сикорский». во время предыдущего полета.

— Объединенная авиастроительная корпорация (@UAC_Russia) 3 ноября 2020 г.

С его тягой 55 000 фунтов оригинальный Кузнецовский НК-32, трехконтурный двухконтурный турбореактивный двигатель с форсажной камерой, уже является самым большим и мощным двигателем, когда-либо установленным на военный самолет.

Новый НК-32-02, он же НК-32 серии 2, отличается улучшенными характеристиками и экономичностью: Благодаря новым двигателям Ту-160 увеличит дальность полета не менее чем на 1000 км, замминистра обороны РФ Юрий Борисов объявил в 2015 году.

Новые двигатели — лишь одно из обновлений, реализуемых в рамках второго этапа модернизации Ту-160М.

Новая версия Ту-160М2 включает стеклянную кабину, модернизацию вооружения, новые двигатели и удаление устаревшего оборудования, более не относящегося к задаче Ту-160. Оригинальный Туполев Ту-160 «Блэкджек» впервые поднялся в воздух в 1981 году и поступил на вооружение в 1987 году. Первый полет первого Ту-160М2 состоялся 2 февраля 2020 года и длился 2 часа 34 минуты.

Подпишитесь на уведомления от Insider! Будьте в курсе того, что вы хотите знать.

Подписаться на push-уведомления

Прочитайте оригинальную статью на The Aviationist. Авторское право 2020. Подпишитесь на The Aviationist в Твиттере. Значок сделкиЗначок в виде молнии.

Продолжай читать

Более: Авиационист Автор новостей Россия Ту-160

Ту-160М2

Значок шевронаОбозначает расширяемый раздел или меню, а иногда и предыдущие/следующие параметры навигации.

Двигатели НК-32-02 и будущее дальней авиации

Ту-160М «Игорь Сикорский» — первый носитель серийного НК-32-02. Фото ОАК

Продолжается программа модернизации и возобновления строительства стратегических ракетоносцев Ту-160М. Одной из ключевых ее составляющих является проект модернизированного двигателя «второй серии» НК-32-02. К настоящему времени двигатель доведен до серии, серийные изделия проходят испытания в воздухе.

Новости года

В этом году оптимистичные новости по проекту возобновления производства ТРД НК-32. Так, в феврале во время визита делегации Минобороны на производство ПАО «Кузнецов» было объявлено, что проект идет в соответствии с графиком. Параллельно велся поиск путей ускорения работы.

На форуме «Армия-2020» в августе Объединенная двигателестроительная корпорация объявила об окончании изготовления и испытаний первой опытной партии двигателей НК-32 второго этапа. Продукция полностью соответствует требованиям и принята заказчиком.

К тому времени все приготовления к серийному производству были завершены. Более того, он запущен и уже началась поставка новых изделий НК-32-02. ОДК пообещала увеличить темпы производства двигателей для удовлетворения требований туполевской компании и Минобороны.

Готовые серийные двигатели поступили на Казанский авиационный завод для установки на модернизированные самолеты. 3 ноября обновленный Ту-160М «Игорь Сикорский» совершил первый испытательный полет с двигателями НК-32-02. Этот самолет находится на летных испытаниях с февраля, но до сих пор летал с силовой установкой старой модели.

Испытательный полет 2 февраля 2020 г. Фото KLA

Полет длился 2 часа 20 минут. и проходил на высоте 6 тысяч метров. Целью полета была проверка общесамолетных систем и новых видов радиоэлектронного оборудования. Кроме того, были оценены характеристики новых двигателей. Полет прошел штатно, замечаний к работе систем и агрегатов не было.

Прошлое и настоящее

Серийное производство первой модификации ТРД НК-32 начато в 1983 на площадках Куйбышевского НПО Труд. Она проводилась исключительно в интересах создания стратегических бомбардировщиков Ту-160. Сборка двигателей продолжалась до 1993 года и практически прекратилась с постройкой самолета. За 10 лет «Труд» собрал около 250 двигателей. За счет этого удалось укомплектовать более 30 построенных самолетов и создать солидный складской запас готовых двигателей и запасных частей.

В течение следующих десятилетий эксплуатация Ту-160 обеспечивалась за счет своевременного технического обслуживания и ремонта двигателей. По мере выработки ресурса двигателя была проведена ремоторизация. Резкое сокращение парка боеспособных самолетов и снижение интенсивности полетов после распада СССР позволило несколько ограничить выработку ресурса и потребность в новых двигателях. Однако в дальнейшем началось обсуждение восстановления их производства — теперь это дало реальные результаты.

Технические характеристики

Основной целью последних работ было восстановление производства, остановленного в начале девяностых годов. Для этого необходимо было реконструировать производственные мощности, развернуть различные линии и освоить новые технологии. Внедрены новые принципы производственной логистики. Модернизация производства проводилась с привлечением профильных институтов.

Также предусматривалось обновление конструкции НК-32 с учетом последних достижений науки и техники. При этом использовались новые конструкторские решения и современные технологии производства. За счет таких доработок планировалось улучшить основные характеристики двигателя и тем самым повысить некоторые параметры самолета.

НК-32-02 на Кузнецовском заводе. Кадр из ТЦ «Военная приемка», ТЦ «Звезда»

По известным данным, модернизированный НК-32-02 сохраняет все основные черты архитектуры и конструкции. Это по-прежнему двухконтурный трехвальный двигатель; компрессор сохраняет ступени высокого и среднего давления, а турбина имеет ступени высокого, среднего и низкого давления. При этом были обновлены некоторые компоненты и применена современная система управления.

Основные характеристики остались прежними. Тяга на форсаже — 25000 кгс. При этом за счет различных доработок удалось снизить расход топлива примерно на 10%. Утверждается, что за счет повышения эффективности максимальная дальность полета Ту-160М увеличится на 1000 км и более в зависимости от режима. При этом нет необходимости увеличивать баки или дозаправляться в полете. Соответственно, боевой потенциал ракетоносца растет.

Перспективы проекта

Этим летом начались поставки серийных двигателей НК-32-02. Неизвестно, сколько изделий Казанский авиазавод успел поставить за последние месяцы. При этом очевидно, что в производство было поставлено как минимум четыре двигателя, т.е. комплект для оснащения одного самолета Ту-160М. Вероятно, поставки продолжаются, и парк моторов на заводе растет.

Производство двигателей осуществляется по контракту 2018 года, который предусматривает поставку 22 изделий в течение следующих нескольких лет. Его реализация позволит перевооружить пять бомбардировщиков и оставить на складе два изделия.

По известным данным, текущие планы Минобороны предусматривают глубокую модернизацию 15 боевых бомбардировщиков Ту-160 до состояния «М». С тех пор несколько самолетов прошли ремонт и модернизацию, однако только один из них получил серийные двигатели НК-32-02. По мере продолжения модернизации такие двигатели получат следующие машины. Тогда возможна ремоторизация ранее обновленной техники.

Компрессор нового двигателя. Кадр из ТЦ «Военная приемка», ТЦ «Звезда»

Начато строительство бомбардировщиков новой серии Ту-160М2, которые изначально будут оснащаться современными двигателями. Первый из них взлетит в следующем году, в дальнейшем будут построены еще девять.

Нетрудно заметить, что существующего контракта на двигатели НК-32 второй серии недостаточно для выполнения всех планов по модернизации и строительству самолетов. Пока заказано всего 22 двигателя, а потребности программы самолетостроения в ее нынешнем виде достигают 100 единиц, не считая запаса. Это показывает, что в ближайшее время может появиться новый заказ на двигатели в больших количествах.

Любопытно, что перспективы НК-32-02 не ограничиваются только проектами семейства Ту-160. Ранее неоднократно сообщалось, что на базе этого двигателя будет создано новое изделие для использования на перспективном бомбардировщике ПАК ДА. Предлагалось также выполнить на базе НК-32 двигатель для транспортного Ан-124.

Нет слабых мест

За последние несколько десятилетий были запущены программы модернизации бомбардировщиков Ту-160 того или иного типа. Несколько лет назад решили возобновить производство таких самолетов. Однако у всех этих программ и планов было слабое место — отсутствие производства двигателей НК-32. При планировании развития дальней авиации приходилось рассчитывать только на имеющиеся запасы.

Очевидным, но очень трудным выходом было восстановить производство двигателей. Решение этой проблемы заняло несколько лет и все же привело к желаемым результатам. ОДК и Кузнецов не только возобновили выпуск двигателей, но и модернизировали их, оптимизировав их характеристики.

Как следует из опубликованных данных, объемы производства двигателей НК-32-02 еще невелики, но достаточны для выполнения существующих планов по ремонту и строительству авиационной техники. Таким образом, основная проблема в плане эксплуатации и обслуживания Ту-160(М) успешно решена, и за будущее дальней авиации можно не беспокоиться.

ТУ-160 принят на вооружение в 2021 году

Воздух и Космос — Международный
Защита
Россия : Ту-160 будет принят на вооружение в 2021 году.

Защита

01.11.2021 16:41 | Энтони Ангранд 193 слова

Россия рассчитывает к 2021 году принять на вооружение свои модернизированные стратегические бомбардировщики Ту-160 М, оснащенные, в том числе, новым турбореактивным двигателем Кузнецова НК-32-2. Россия также хочет увеличить количество четырехмоторных самолетов, находящихся на вооружении, в течение следующих семи лет.

В 2021 году ожидается поступление на вооружение Воздушно-космических сил (ВКС) модернизированных квадроциклов Туполев Ту-160. Об этом официально заявил в среду, 30 декабря, заместитель министра обороны России Алексей Криворучко. Как указал последний, цель состоит в том, чтобы в течение следующих семи лет увеличить парк Ту-160 в полтора раза.

Новые ТРД Кузнецова НК-32

23 декабря 2020 года Алексей Соболев, заместитель генерального директора производителя двигателей ОДК-Кузнецов, заявил, что компания поставит очередную партию двигателей НК-32 второго поколения для стратегическая модернизация Ту-160М в течение месяца. Они будут доставлены в январе 2021 года. 21 декабря 2020 года Минобороны России заявило, что государственные испытания модернизированного Ту-160 начнутся в 2021 году. К началу ноября 2020 года состоялся первый полет глубоко модернизированного Ту-160М. бомбардировщика состоится с новыми серийными двигателями НК-32-02. По словам экипажа, полет прошел в штатном режиме, системы и оборудование работают без нареканий.

https://www.air-cosmosboutique. com/produit/abonnement-numerique-1-an-aircosmos/

Ответ на ( ) :

Ваше имя

Ваш адрес электронной почты

Ваш комментарий

Прямая трансляция

Опубликовано 27.02.2022
Антонов Ан-225 Мрия загорелся в своем ангаре в Украине (официальное подтверждение)
Опубликовано 24.
02.2022
Украина: Лента новостей, чтобы знать все о конфликте
Опубликовано 24.02.2022
Украина: Россия получит в свои руки парк Ан-124
Опубликовано 24.02.2022
Франция и война на Украине
Опубликовано 24.02.2022
Украина и Молдова закрывают воздушное пространство
Опубликовано 24.
02.2022
Обновлена карта кризиса в Украине
Опубликовано 22.02.2022
ВМС США наращивают мощность с вводом в эксплуатацию первых Osprey

Усиленный сигнал кальция вызывает дегрануляцию NK-клеток, но подавляет их цитотоксическую активность

Хотя механизм активации NK-клеток до сих пор неясен, строгая зависимость от кальция остается отличительной чертой секреции литических гранул. Множество исследований, утверждающих, что нарушается Ca 9Опубликовано, что передача сигналов 0265 2+ приводит к сильно дефектному экзоцитозу цитотоксических гранул, сопровождающемуся слабым лизисом клеток-мишеней. Однако мало обсуждалось влияние индуцированного кальциевого сигнала на цитотоксичность NK-клеток. В нашем исследовании мы наблюдали, что низкомолекулярный ингибитор UNC1999, который подавляет глобальное триметилирование h4K27 (h4K27me3) человеческих NK-клеток, индуцирует PKD2-зависимый кальциевый сигнал. Усиленное поступление кальция приводило к несбалансированному высвобождению везикул, в результате чего меньше клеток-мишеней приобретали литические гранулы и впоследствии погибали. Дальнейшие анализы показали, что способность к образованию конъюгатов, формированию литических синапсов и поляризации гранул были нормальными в NK-клетках, обработанных UNC19.99. В совокупности эти данные показали, что индуцированный кальциевый сигнал исключительно усиливает несбалансированную дегрануляцию, что дополнительно ингибирует их цитотоксическую активность в NK-клетках человека.

Уклонение от иммунитета является основным препятствием для разработки эффективных стратегий противоопухолевого лечения. Основные механизмы уклонения от иммунитета включают изменение скорости и эффективности иммунных клеток в уничтожении раковых клеток. NK-клетка обладает способностью неспецифически распознавать и убивать раковые клетки без предварительной сенсибилизации, поэтому играет важную роль в иммунном надзоре (1). Эффекторная функция NK-клеток, характеризующаяся скоростью и эффективностью уничтожения NK-клетками клеток-мишеней, во многом зависит от Ca ²⁺ приток (2). Следовательно, необходимо выяснить корреляцию между уровнем притока Ca ²⁺ и цитотоксичностью NK-клеток.

Во время распознавания клеток-мишеней NK-клетки получают сигналы активации и подвергаются ряду биологических процессов, включая приток внеклеточного Са ²⁺, перестройку цитоскелета и образование иммунного синапса (ИС) с последующей поляризацией гранул в сторону клеток-мишеней . Конечным результатом литического взаимодействия является экзоцитоз литических гранул, что влечет за собой программирование клетки-мишени на лизис (3-5). Кроме того, NK-клетки могут отделяться от мишени и снова убивать — процесс, известный как серийное уничтожение (6). Результаты предыдущих исследований подтвердили связь Ca ²⁺ приток с цитотоксичностью NK-клеток. Анализируя NK-клетки пациентов с дефицитом ORAI1, Bryceson et al. (7) наблюдали, что депо-управляемое проникновение Ca ²⁺ через ORAI1 имеет решающее значение для индуцированного клетками-мишенями экзоцитоза литических гранул в NK-клетках. Кроме того, Schwindling и его коллеги (8) сообщили, что митохондриальная поляризация к IS зависит от Ca ²⁺. Накопление литических гранул в ИС является важным шагом во время уничтожения клетки-мишени NK-клетками и, как сообщается, косвенно модулируется внутренним Ca ²⁺ концентрация (9).

Ca ²⁺ активируемые высвобождением каналы Ca ²⁺, состоящие из ORAI1, формируют доминирующие пути притока Ca ²⁺ в NK-клетках (10). ORAI1 активируются посредством прямого физического взаимодействия со STIM1, датчиком истощения Ca ²⁺, расположенным в мембране эндоплазматического ретикулума (ER) (11). Поскольку соотношение белков STIM1:ORAI1 играет важную роль в модуляции экзоцитоза (для одного канала ORAI1 требуется двенадцать молекул STIM1, чтобы нести максимальное количество Ca ²⁺ активирует высвобождение Ca ²⁺ (ток) (12), сдвиг экспрессии либо STIM1, либо ORAI1 снижает приток Ca ²⁺, что дополнительно приводит к снижению цитотоксичности NK-клеток; Итак, как можно повысить приток Ca ²⁺ и что произойдет, когда приток Ca ²⁺ будет усилен в NK-клетках? В нашем исследовании мы случайно заметили, что низкомолекулярный ингибитор UNC1999, который подавляет модификацию h4K27me3 NK-клеток, также индуцирует PKD2-зависимый кальциевый сигнал. Дальнейшие анализы показали, что усиленный Ca 9Поступление 0265 2+ приводит к несбалансированному высвобождению везикул, что, в свою очередь, подавляет их цитотоксическую активность. Наши результаты показывают, что оптимизированный вход Ca ²⁺ чрезвычайно важен для сбалансированного высвобождения везикул NK-клетками.

Клеточная линия NK92MI была приобретена в Американской коллекции типовых культур. Клетки поддерживали в α-MEM (Life Technologies) с добавлением 2 мМ l-глютамина (Life Technologies), 0,2 мМ I-инозитола (Sigma-Aldrich), 0,02 мМ фолиевой кислоты (Sigma-Aldrich), 0,1 мМ 2-ME ( Invitrogen), 12,5% FBS (Life Technologies) и 12,5% лошадиной сыворотки (Life Technologies). Клетки-мишени K562 (любезно предоставленные Тао Ченгом из Института гематологии и больницы болезней крови Китайской академии медицинских наук) культивировали в среде RPMI 1640 (Life Technologies) с добавлением 1% пенициллина/стрептомицина (HyClone Laboratories) и 10% FBS ( Технологии жизни). NK-клетки периферической крови человека выделяли методом отрицательной магнитной селекции (Miltenyi Biotec) и культивировали в среде RPMI 1640 (Life Technologies) с добавлением 1% пенициллина/стрептомицина (HyClone Laboratories), 10% FBS (Life Technologies) и 500 ЕД/мл человеческого rIL. -2 (ПепроТех). До их использования UNC1999 (Selleck Chemicals) и GSK343 (Selleck Chemicals) растворяли в ДМСО, получая исходные растворы с концентрацией 5 мМ. Образцы крови были получены от здоровых доноров, подписавших информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией.

Как описано ранее (13), анализ дегрануляции клеток, окрашенных флуорохром-конъюгированными моноклональными антителами, для CD56 (562794; BD Biosciences; 20-0564; Tonbo Biosciences) и CD107a (555801; BD Biosciences; 328608; BioLegend) проводили с помощью проточной цитометрии (LSRFortessa; BD Biosciences).

Клетки-мишени метили 1 мкМ CFSE (BioLegend) в течение 10 мин при 37°C. После инкубации их однократно промывали с использованием RPMI 1640 с добавлением 10% FBS. NK-клетки и клетки-мишени совместно инкубировали при соотношениях E:T 10:1, 5:1 и 2,5:1. Гибель базальных клеток измеряли с использованием клеток-мишеней, которые инкубировали отдельно. Через 4 ч инкубации (12 ч для длительного киллинга) клеточные смеси дважды промывали PBS, инкубировали 20 мин при комнатной температуре в буферном растворе с 20 мкг/мл 7-ААД (BioLegend) и анализировали методом протока. цитометрия. Цитотоксичность, опосредованную NK-клетками, оценивали путем определения процента мертвых клеток-мишеней (CFSE ⁺ /7-аминоактиномицин D ⁺ ).

Цитотоксичность в реальном времени оценивали с использованием системы клеточного анализатора в реальном времени (RTCA) (ACEA Biosciences). Вкратце, клетки HeLa промывали и ресуспендировали в RPMI 1640 с добавлением 10% FBS при плотности 5×10 ⁴ клеток/мл. Затем в каждую лунку E-Plate 16 добавляли по 100 мкл клеток HeLa. На дно каждой ячейки устанавливали сенсорную матрицу микроэлектродов, которая могла идентифицировать биологическую информацию, связанную с физиологическими функциями клеток, путем обнаружения изменений значений импеданса. лунку для роста E-Plate 16. E-Plate 16 помещали на станцию RTCA в инкубаторе. Через 12 ч пластину сняли со станции и NK9Клетки 2MI добавляли в каждую лунку в соотношении E:T 10:1, 5:1 и 1:1. Планшет снова помещали на станцию RTCA и контролировали в режиме реального времени, чтобы наблюдать эффекты клеток NK92MI на клетки HeLa.

NK-клетки (1 × 10 ⁶ ) окрашивали аллофикоцианин-Cy7-конъюгированными CD56 mAb (318332; BioLegend,), тогда как клетки K562 (1 × 10 ⁶ мкК) метили M-SE 1 (BioLegend) в течение 10 мин при 37°С. Клетки отмывали и ресуспендировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10 % FBS с плотностью 1 × 10 9 .0265 6 клеток/мл. Далее к 100 мкл клеток К562 добавляли 100 мкл NK-клеток с последующим центрифугированием при 20× g в течение 1 мин. После удаления 150 мкл супернатанта клетки стимулировали инкубацией при 37°С в течение 5 или 15 мин. Реакции останавливали добавлением 300 мкл ледяного параформальдегида (0,5%). Конъюгаты выявляли с помощью проточной цитометрии (LSRFortessa; BD Biosciences).

NK-клетки (1 × 10 ⁶ ) и клетки-мишени K562 (1 × 10 ⁶ , предварительно окрашенные CFSE для анализа синапсов) смешивали и центрифугировали при 30 × g в течение 3 мин с последующей инкубацией в течение 20 мин при 37°C. Клетки осторожно ресуспендировали и обрабатывали 100 мкл раствора для фиксации/пермеабилизации (BD Biosciences) в течение 20 мин. Затем их переносили на предметные стекла, покрытые поли-d-лизином (Sigma-Aldrich), на 15 минут при 37°C. Для анализа синапсов клетки окрашивали фаллоидином (Invitrogen) и оценивали с помощью лазерной сканирующей конфокальной микроскопии. Для поляризационного анализа клетки окрашивали α-тубулином (Abcam) и перфорином (BioLegend) и оценивали с помощью лазерной сканирующей конфокальной микроскопии.

Клетки NK92MI фиксировали, подвергали пермеабилизации, окрашивали аллофикоцианин-конъюгированными перфориновыми mAb (308109; BioLegend) и PE-конъюгированными перфориновыми mAb (561142; BD Biosciences) и анализировали с помощью проточной цитометрии (BD биологические науки).

Клетки NK92MI загружали 5 мкМ Fluo-3 (Invitrogen) в среде RPMI 1640, не содержащей FBS, в течение 60 мин при 37°C, дважды промывали и доводили до концентрации клеток 1 × 10 ⁶ клеток/мл в среде RPMI 1640 с добавлением 10% FBS и 10 мкМ HEPES (HyClone Laboratories). Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии (LSRFortessa, BD Biosciences). В каждой панели анализировали не менее 50 000 клеток.

Доставку гранзима В от NK к клеткам-мишеням K562 оценивали с использованием набора GranToxiLux Kit (OncoImmunin). Вкратце, клетки-мишени K562 метили TFL-4 и проникающим в клетки флуорогенным субстратом. Затем NK-клетки инкубировали с клетками-мишенями. В этом анализе, когда NK-клетки доставляют гранзим B к клеткам-мишеням, гранзим B лизирует субстрат, что приводит к усилению флуоресценции в TFL-4 ⁺ клеток-мишеней. Сбор и анализ данных проводили с помощью проточной цитометрии.

EZh3-направленные короткие шпилечные РНК и скремблированные короткие шпилечные РНК были любезно предоставлены профессором Ваном (Первая больница Пекинского университета, Пекин, Китай) (14). Вирусная упаковка и концентрация были выполнены GeneChem. Для трансдукции NK-клеток периферической крови человека клетки выдерживали в полной среде RPMI 1640 (упомянутой выше) не менее 3 дней с ежедневным добавлением цитокинов (ИЛ-2, 1000 ЕД/мл; ИЛ-21, 20 нг/мл). ). При плотности 2–5 × 10 ⁵, NK-клетки инокулировали в 24-луночные планшеты, и в лунки добавляли множественность заражения лентивирусом 30–50, 8 мкг/мл протамина сульфата (Sigma-Aldrich) и 6 мкМ BX795 (InvivoGen). . Планшет центрифугировали при 32°С и 1500× г в течение 1,5 ч. Зараженные клетки инкубировали в течение ночи при 37°C и 5% CO ₂ . Затем супернатант удаляли и добавляли свежую полную среду. После 3 дней размножения EGFP ⁺ NK-клетки сортировали с помощью проточной цитометрии (FACSAria II; BD Biosciences). Для НК9При трансдукции клеток 2MI клетки выдерживали в полной среде α-MEM (упомянутой выше) в течение не менее 3 дней с ежедневным добавлением цитокинов (IL-21, 20 нг/мл). При плотности 2–5 × 10 ⁵ клетки NK92MI инокулировали в 24-луночные планшеты, лентивирусная множественность заражения 30–50, 8 мкг/мл полибрена (Sigma-Aldrich) и 6 мкМ BX795 ( InvivoGen) добавляли в лунки. Затем планшет центрифугировали при 32°C и 1500× g в течение 1,5 часов. Зараженные клетки инкубировали в течение ночи при 37°C и 5% CO 9 .0381 2 . Супернатант удаляли и добавляли свежую полную среду. После размножения в течение 3 дней клетки EGFP ⁺ NK92MI оценивали с помощью проточной цитометрии (FACSAria II; BD Biosciences). Эффективность трансдукции показана на дополнительном рис. 2.

Клеточные экстракты готовили путем инкубации клеток в буферном растворе RIPA (50 мМ трис-HCl [pH 7,5], 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 % NP40, 1 мМ PMSF и 1× смесь ингибиторов протеазы) в течение 30 мин при 4°C. Концентрации белка определяли с использованием набора для анализа BCA (Thermo Fisher Scientific). Экстракты клеток (10 мкг) денатурировали в течение 5 мин в загрузочном буфере 5× SDS-PAGE, разделяли на SDS-PAGE и переносили на мембраны PVDF. Мембраны инкубировали при 4°C в течение ночи в присутствии соответствующих антител с последующей инкубацией со вторичными антимышиными или антикроличьими антителами (технология Cell Signaling). Полосы визуализировали с использованием набора для обнаружения хемилюминесценции ECL (Vazyme Biotech) в соответствии с инструкциями производителя. В этом эксперименте использовали следующие антитела: анти-гистон h4 (4499; Cell Signaling Technology), анти-триметилгистон h4 (9733; Cell Signaling Technology), анти-EZh3 (5246; Cell Signaling Technology), анти-β-актин (sc-8432; Santa Cruz Biotechnology) и анти-PKD2 (sc-28331; биотехнология Санта-Крус).

Суммарную РНК экстрагировали с использованием реагента TRIzol (Invitrogen) и оценивали с помощью биоанализатора Agilent 2100 (Agilent Technologies) и флуорометра Qubit (Invitrogen). Вкратце, библиотеки готовили с использованием 1 мкг тотальной РНК и набора для подготовки библиотеки ультраРНК NEBNext для Illumina (New England BioLabs). Библиотеки подвергали секвенированию парных концов с длиной считывания парных концов 150 п.н. на секвенаторе Illumina NovaSeq (Illumina). Чистые данные были сопоставлены с hg19эталонный геном с использованием программного обеспечения STAR (v2.7.9). Количественную оценку экспрессии полногеномных генов проводили с использованием htseq-count (v0.13.5). Дифференциальный анализ экспрессии выполняли с использованием пакета edgeR R (v3.34.0). При значении отсечки |log ₂ (кратное изменение)| > 1 и частота ложных открытий (FDR) <0,05, гены дифференциальной экспрессии (DEG) были идентифицированы в обработанных UNC1999 и контрольных клетках NK92MI. Генная онтология (GO) и анализ путей Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) были выполнены отдельно для идентифицированных DEG с использованием базы данных для аннотации, визуализации и интегрированного обнаружения (https://david.ncifcrf.gov/). Условия GO и KEGG с 9Были выбраны 0040 p ≤ 0,05 и n > 5. Для анализа обогащения набора генов (GSEA) списки генов, полученные на основе данных секвенирования РНК, сравнивали со списками генов в общедоступной базе данных молекулярных сигнатур версии 7.4. Статистический анализ GSEA был выполнен с использованием GSEA v4.1.0 для Mac. Наборы генов с нормализованной оценкой обогащения |> 1, p <0,05 и FDR <0,25 считались значительно обогащенными (15). Необработанные файлы депонированы в базе данных Gene Expression Omnibus (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi) под номером доступа GSE184127.

Данные секвенирования иммунопреципитации хроматина (ChIP-seq) были загружены из проекта Roadmap Epigenomics Project (ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/pub/geo/DATA/roadmapepigenomics/) . Файлы париков были загружены и преобразованы в bigWig для визуализации в программе просмотра интегративной геномики.

Низкомолекулярный ингибитор UNC1999 специфичен для гистоновых метилаз EZh3 и EZh2. Кроме того, он снижает уровень модификации h4K27me3 в клеточной линии NK92MI в зависимости от времени (рис. 1А) и концентрации [описано в (13)]. В этом исследовании клетки NK92MI обрабатывали 10 мкМ UNC1999 в течение 48 часов, а затем инкубировали с целевыми клетками K562 в течение 2 часов. Результаты показали, что NK9Клетки 2MI в группе лечения UNC1999 имели значительно более высокий уровень дегрануляции [CD107a является маркером дегрануляции NK-клеток, описанный в (16)], чем в контрольной группе (рис. 1C). Чтобы проверить этот результат, мы обработали клетки NK92MI другим низкомолекулярным ингибитором, GSK343 (специфическим для гистонметилазы EZh3), и обнаружили, что GSK343 также повышает уровень дегрануляции клеток NK92MI (рис. 1C). Помимо активации NK-клеток с помощью клетки-мишени K562, мы также активировали клетки NK92MI с помощью PMA/иономицина (PMA/Iono), и результаты активации клеток-мишеней были согласованными. Оба низкомолекулярных ингибитора (UNC1999 и GSK343) повышали уровень дегрануляции клеток NK92MI (рис. 1D). Наконец, мы сбили экспрессию EZh3 в клетках NK92MI (рис. 1B, дополнительная рис. 2) и обнаружили, что, в соответствии с результатами низкомолекулярных ингибиторов, уровень дегрануляции клеток NK92MI в группе с нокдауном был значительно выше, чем контрольная группа (рис. 1Е).

Ингибирование активности или экспрессии фермента EZh3 способствовало дегрануляции NK-клеток. ( A ) Вестерн-блоттинг использовали для обнаружения изменений в статусе модификации h4K27me3 в NK9. Клетки 2MI, обработанные ДМСО (контроль) и UNC1999. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение для n = 3. Статистический анализ проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа. *** р < 0,01. ( B ) Вестерн-блоттинг использовали для оценки изменений в экспрессии EZh3 и статуса модификации h4K27me3 в клетках NK92MI с нокдауном EZh3 или без него. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение для n = 3. Статистический анализ проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа. *** р < 0,01. ( 9Клетки 0133 C ) NK92MI и ( F ) NK-клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) и двумя низкомолекулярными ингибиторами в определенных концентрациях в течение 48 часов. Обработанные эффекторные клетки инкубировали в течение 2 ч с клетками-мишенями K562. Проточную цитометрию использовали для оценки уровней дегрануляции эффекторных клеток. Клетки ( D ) NK92MI и ( G ) NK-клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) и двумя низкомолекулярными ингибиторами в определенных концентрациях в течение 48 часов. Обработанные эффекторные клетки активировали PMA/Iono в течение 2 часов. Проточную цитометрию использовали для оценки уровней дегрануляции в эффекторных клетках. Лентивирусная инфекция сбила ЭЖ3 в ( E ) клетки NK92MI и ( H ) NK клетки периферической крови человека. Обработанные эффекторные клетки активировали в течение 2 ч с помощью PMA/Iono. Проточную цитометрию использовали для оценки уровней дегрануляции эффекторных клеток. Статистический анализ проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа. Столбики погрешностей представляют собой стандартные отклонения результатов девяти образцов в трех независимых экспериментах. *** р < 0,01.

Затем мы повторили вышеуказанные эксперименты с NK-клетками периферической крови человека. В соответствии с нашими ожиданиями, ингибирование ферментативной активности EZh3 или подавление экспрессии EZh3 в NK-клетках повышало уровень дегрануляции NK-клеток (рис. 1B, F-H; дополнительная рис. 2).

В норме дегрануляционная способность NK-клеток положительно коррелирует с цитотоксичностью NK. Поэтому мы проверили способность к уничтожению NK-клеток после обработки низкомолекулярными ингибиторами. Клетки NK92MI обрабатывали указанными концентрациями низкомолекулярных ингибиторов (UNC1999 или GSK343) в течение 48 часов перед инкубацией с клеткой-мишенью K562 в течение 4 часов.

Вопреки ожидаемым результатам, мы обнаружили, что убивающая способность NK9Клетки 2MI, обработанные UNC1999 или GSK343, были значительно ниже, чем у контрольной группы (фиг. 2A, 2B). Чтобы дополнительно подтвердить этот результат, мы сбили экспрессию EZh3 в клетках NK92MI и заметили, что истощение EZh3 привело к снижению способности NK-клеток к уничтожению (рис. 2C). Наконец, мы повторили вышеуказанные эксперименты с NK-клетками периферической крови человека, и результаты согласуются (рис. 2D-F).

Ингибирование активности фермента EZh3 или экспрессия подавленной цитотоксичности NK-клеток. ( 9Клетки 0133 A ) NK92MI и ( D ) NK-клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) и низкомолекулярным ингибитором (UNC1999) в определенных концентрациях в течение 48 часов. Обработанные эффекторные клетки инкубировали с клетками-мишенями K562 в течение 4 часов. Проточную цитометрию использовали для оценки способности к уничтожению эффекторных клеток. Клетки ( B ) NK92MI и ( E ) NK клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) и низкомолекулярным ингибитором GSK343 в определенных концентрациях в течение 48 часов. Обработанные эффекторные клетки инкубировали с клетками-мишенями K562 в течение 4 часов. Проточную цитометрию использовали для оценки способности к уничтожению эффекторных клеток. Лентивирусная инфекция сбивала экспрессию EZh3 в ( C ) клетки NK92MI и ( F ) NK клетки периферической крови человека. Эффекторные клетки инкубировали с клетками-мишенями K562 в течение 4 часов. Проточную цитометрию использовали для оценки способности к уничтожению эффекторных клеток. Для расчета площади под значениями кривой для кривой уничтожения использовали GraphPad, а для сравнения площади под значениями кривой выполняли однофакторный анализ ANOVA. Значения p менее 0,05 считались значимыми. Опыты повторяют не менее двух раз * р < 0,05, *** р < 0,01.

Ингибирование активности фермента EZh3 не влияет на долговременную киллерную способность NK-клеток контрольная группа в режиме реального времени (анализ цитотоксичности в реальном времени). Мы наблюдали, что на ранних стадиях умерщвления (0–4 ч) количество клеток-мишеней, убитых группой UNC1999 и группой GSK343, было значительно меньше, чем в контрольной группе, тогда как не было существенной разницы в количестве клеток-мишеней, убитых между группами.

группы на поздней стадии умерщвления (8–12 ч) (рис. 3А). В то же время мы использовали традиционный метод уничтожения (анализ цитотоксичности) для определения эффективности уничтожения (NK92MI по сравнению с HeLa, NK92MI по сравнению с K562 и NK периферической крови по сравнению с K562) после инкубации в течение 12 часов, а результаты группы UNC1999 и группы GSK343 были аналогичны результатам контрольной группы (рис. 3B-D).
РИСУНОК 3.
Ингибирование активности фермента EZh3 не влияло на долговременную способность к уничтожению NK-клеток. ( A ) Анализатор RTCA использовали для оценки долгосрочной уничтожающей способности клеток NK92MI. Время представлено на горизонтальной оси, а индексы ячеек (значения CI) представлены на вертикальной оси. Значение CI прямо пропорционально количеству живых клеток. Чем больше количество живых клеток, тем выше значение CI. Мы использовали GraphPad для расчета площади под значениями кривой для 0–4 ч ранних стадий периода умерщвления для каждой группы и выполнили однофакторный дисперсионный анализ площади под значениями кривой. p значения менее 0,05 считались значимыми. Опыты повторяли дважды. Клетки NK92MI обрабатывали ДМСО (контроль) и низкомолекулярными ингибиторами UNC1999 и GSE343 в указанных концентрациях в течение 48 часов. Обработанные эффекторные клетки инкубировали с клетками-мишенями ( B ) HeLa или ( C ) K562 в течение 12 часов. Проточную цитометрию использовали для определения способности эффекторных клеток к убийству. ( D ) NK-клетки периферической крови обрабатывали ДМСО (контроль) и низкомолекулярными ингибиторами UNC19.99 и GSE343 в указанных концентрациях в течение 48 часов. Обработанные эффекторные клетки инкубировали с клетками-мишенями K562 в течение 12 часов. Проточную цитометрию использовали для оценки способности эффекторных клеток к уничтожению. Для расчета площади под значениями кривой для кривой уничтожения использовали GraphPad, а для сравнения площади под значениями кривой выполняли односторонний ANOVA. Значения p менее 0,05 считались значимыми. Опыты повторяют не менее двух раз.
Ингибирование активности фермента ЭЖ3 не влияет на связывание NK-клеток с клетками-мишенями, образование ИС и поляризацию токсических частиц
Уничтожение опухолевых клеток NK-клетками — очень сложный процесс, на который влияет множество факторов. NK-клетки демонстрируют повышенный уровень дегрануляции после обработки низкомолекулярными ингибиторами, хотя их способность к уничтожению снижается. Предполагается, что низкомолекулярные ингибиторы могут влиять на связывающую способность NK-клеток с клетками-мишенями, формирование ИС или поляризацию внутриклеточных токсических частиц. Мы использовали проточную цитометрию для определения связывающей способности NK-клеток с клетками-мишенями (рис. 4А), а способность NK-клеток формировать иммунные синаптические и поляризационные токсические частицы наблюдали с помощью лазерной конфокальной микроскопии (рис. 4В, 4С). Однако UNC1999 не влиял на связывающую способность NK-клеток, формирование IS NK-клеток и поляризацию NK-клеток (фиг. 4D). Более того, внутриклеточная экспрессия перфорина и гранзима B не изменилась в контрольной группе по сравнению с группой UNC1999 (дополнительная рис. 1).
РИСУНОК 4.
Ингибирование активности фермента ЭЖ3 не влияло на связывание NK-клеток с клетками-мишенями, образование ИС и поляризацию токсических частиц. ( A ) Аллофикоцианин-Cy7-окрашенный NK9Эффекторные клетки 2MI инкубировали с мечеными CFSE клетками-мишенями K562 в течение определенного времени. Проточную цитометрию использовали для определения связывающей способности клеток NK92MI с клетками-мишенями K562, обработанными низкомолекулярными ингибиторами или без них. ( B ) Клетки NK92MI обрабатывали ДМСО (контроль) или низкомолекулярным ингибитором UNC1999 и инкубировали с клетками-мишенями K562, окрашенными CFSE, в течение 30 минут соответственно (нижняя панель). Типичный синапс между NK92MI и K562 показан на верхней панели. Конфокальную микроскопию проводили для наблюдения за способностью эффекторных клеток образовывать накопление F-актина. ( C ) Клетки NK92MI обрабатывали ДМСО (контроль) или низкомолекулярным ингибитором UNC1999 и инкубировали с клетками-мишенями K562 в течение 30 мин. Окрашивание анти-перфорином (зеленый) и анти-α-тубулином (красный) проводили для обнаружения перфорина и центра организации микротрубочек. ( D ) Количественное определение конъюгатов, поляризации и синапсов проводили соответственно. Сто межклеточных контактов были проанализированы в (B) и (C) для статистического анализа. Статистический анализ проводили с использованием двусторонних непарных т испытаний. Столбики погрешностей представляют собой стандартное отклонение от среднего для трех независимых экспериментов.
Зависимая от активности EZh3 активация ионов кальция может вызывать аномальное высвобождение токсичных частиц из NK-клеток
Schwarz et al. (6) предположили, что при увеличении притока ионов кальция в NK-клетки будут высвобождаться аномальные токсичные гранулы NK-клеток. Например, когда NK-клетка содержит шесть токсичных частиц, NK-клетка высвобождает первые две токсичные частицы в первую клетку-мишень, затем высвобождает следующие две токсичные частицы во вторую клетку-мишень, затем высвобождает последние две токсичные частицы в третью. целевая ячейка. Однако, когда приток кальция к NK-клеткам увеличивается, NK-клетки могут одновременно высвобождать все шесть токсичных частиц в первую клетку-мишень, в результате чего только первая клетка-мишень получает токсичные частицы и в конечном итоге погибает от NK-клеток.
На основании вышеизложенных предположений мы исследовали поток ионов кальция в NK-клетках. Первоначально поток кальция значительно увеличился в клетках NK92MI при стимуляции PMA/Iono после обработки различными концентрациями UNC1999 (фиг. 5A). Изменения потока кальция в NK-клетках в основном определяются двумя различными процессами, включая высвобождение ионов кальция, хранящихся в ER NK-клеток, в цитоплазму, или ионов кальция в микроокружении, поступающих в цитоплазму через кальциевый канал на клеточной мембране. Чтобы определить, на какой процесс влияют низкомолекулярные ингибиторы, мы хелатировали ионы кальция в микроокружении с помощью 2 мМ EGTA. Было обнаружено, что поток ионов кальция в UNC1999 было все еще значительно выше, чем в контрольной группе, что указывает на то, что UNC1999 увеличивает накопление ионов кальция в ER (фиг. 5B). Чтобы дополнительно подтвердить этот результат, мы активировали клетки NK92MI анти-NKp46 и анти-2B4 вместо PMA/Iono. Независимо от наличия или отсутствия ионов кальция в микроокружении поток ионов кальция в группе UNC1999 был значительно выше, чем в контрольной группе (рис. 5C, 5D). Наконец, мы повторили описанные выше эксперименты на NK-клетках периферической крови человека. В совокупности эти результаты свидетельствуют о том, что ингибирование ферментативной активности EZh3 с помощью UNC1999 может усиливать накопление ионов кальция в ER NK-клеток периферической крови человека и дополнительно увеличивать поток кальция (Fig. 5E-H).
РИСУНОК 5.
Зависимая от активности EZh3 повышающая регуляция ионов кальция индуцировала аномальное высвобождение токсичных частиц из NK-клеток. ( A ) клетки NK92MI и ( E ) NK клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) или низкомолекулярным ингибитором UNC1999 в указанных концентрациях в течение 48 часов. Эффекторные клетки собирали в 2 мМ Ca ²⁺ –ПБС. Проточную цитометрию использовали для оценки потока кальция эффекторных клеток при стимуляции PMA/Iono. ( B ) клетки NK92MI и ( F ) NK клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) или низкомолекулярным ингибитором UNC1999 в указанных концентрациях в течение 48 ч, а эффекторные клетки собирали в 2 мМ EGTA. –ПБС. Проточную цитометрию использовали для оценки потока кальция эффекторных клеток при стимуляции PMA/Iono. ( C ) клетки NK92MI и ( G ) NK-клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) или низкомолекулярным ингибитором UNC1999 в указанных концентрациях в течение 48 ч, эффекторные клетки собирали в 2 мМ Ca ²⁺ –PBS. Проточную цитометрию использовали для оценки потока кальция эффекторных клеток, стимулированных анти-NKp46/анти-2B4. Клетки ( D ) NK92MI и ( H ) NK-клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) или низкомолекулярным ингибитором UNC1999 в указанных концентрациях в течение 48 ч, а эффекторные клетки собирали в 2 мМ EGTA– ПБС. Проточную цитометрию использовали для измерения потока кальция в эффекторных клетках, стимулированных анти-NKp46/анти-2B4. Все опыты повторяли не менее двух раз.
Аномальное высвобождение токсичных частиц приводит к меньшему количеству клеток-мишеней, получающих токсичные частицы.
Для проверки вышеизложенной гипотезы мы исследовали способность клеток NK92MI и NK-клеток периферической крови человека доставлять токсичные частицы гранзима B в клетки-мишени, обработанные UNC1999 или без него. Результаты показали, что меньше клеток K562 в группе UNC1999 и группе GSK343 получили гранзим B после инкубации с эффекторными клетками (фиг. 6A). Мы повторили вышеуказанные эксперименты с NK-клетками периферической крови человека, и результаты согласуются (рис. 6B).
РИСУНОК 6.
Аномальное высвобождение токсичных частиц привело к тому, что меньше клеток-мишеней получили токсичные частицы. Клетки ( A ) NK92MI и ( B ) NK-клетки периферической крови человека обрабатывали ДМСО (контроль) или низкомолекулярными ингибиторами UNC1999 и GSK343 в указанных концентрациях в течение 48 ч, а эффекторные клетки инкубировали с TLF4-окрашенными Клетки-мишени K562 в течение 1,5 ч. Проточную цитометрию использовали для измерения эффективности доставки гранзима В эффекторными клетками. Столбики погрешностей представляют собой стандартные отклонения от среднего значения для n = 3. Статистический анализ проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа. * р < 0,05, *** р < 0,01.
Идентификация генных сигнатур, чувствительных к UNC1999, с помощью анализа высокопроизводительного секвенирования
Для дальнейшего определения молекулярного механизма, с помощью которого UNC1999 активирует поток кальция в NK-клетках, мы провели высокопроизводительный анализ секвенирования второго поколения обработанных UNC1999 и контрольных клеток NK92MI. . Мы обнаружили, что 354 гена активировались, а 109 генов подавлялись в клетках NK92MI, обработанных UNC1999 (рис. 7A; 200 лучших DEG перечислены в дополнительной таблице II). Этот результат согласуется с функцией репрессии транскрипции комплекса PRC2. Анализ путей GO и KEGG проводили на DEG. Термины GO связаны со сборкой нуклеосом, положительной регуляцией экспрессии генов и связыванием ионов металлов (рис. 7Е). Анализ пути KEGG показал, что сигнальный путь PI3K-Akt, сигнальный путь Hippo и сигнальный путь Jak-STAT были значительными (рис. 7F). Впоследствии мы провели анализ GSEA, чтобы определить, показал ли определенный набор генов значительные и устойчивые различия по сравнению с нашими данными. В соответствии с ожиданиями UNC19Группа, получавшая 99, положительно коррелировала с набором генов KODON_EZh3_TARGET. Кроме того, ингибирование EZh3 было в значительной степени связано с набором генов ION_CHANNEL_BINDING. Обзор всех генов в наборе генов ION_CHANNEL_BINDING показал, что PKD2, проницаемый для кальция катионный канал, участвующий в транспорте кальция и передаче сигналов кальция, был наиболее сильно индуцируемым геном ионного канала (Fig. 7D).
РИСУНОК 7.
Идентификация генов, отвечающих за UNC1999, с помощью высокопроизводительного секвенирования. ( A ) На графиках вулканов показаны DEG, отфильтрованные по |log2 (кратное изменение)| > 1 и FDR < 0,05 при секвенировании транскриптома. Зеленые точки представляют гены с повышенной активностью, а красные точки представляют гены с пониженной регуляцией. Анализ GSEA для наборов генов EZh3_TARGETS ( B ) и ION_CHANNEL_BINDING ( C ). ( D ) Тепловая карта 62 генов в наборах генов ION_CHANNEL_BINDING. ( E ) Результаты анализа GO DEG в контрольной группе по сравнению с группами UNC1999. ( F ) Результаты обогащения пути KEGG для DEG в контроле по сравнению с UNC1999 групп. Размеры точек представляют количество DEG на пути, а цвета точек от красного до синего указывают значения p от низкого к высокому.
Другой низкомолекулярный ингибитор, GSK-J4, специфичный для гистоновой деметилазы JMJD3/UTX, может повышать глобальные уровни репрессивной метки h4K27me3. Высокопроизводительный секвенирующий анализ обработанных GSK-J4 и контрольных NK-клеток проводили, как описано ранее (17). В этом исследовании уровень экспрессии PKD2 был значительно снижен (данные не показаны), что согласуется с нашими данными.
Ингибирование активности EZh3 повышает экспрессию кальциевого канала PKD2
Для проверки результатов высокопроизводительного секвенирования мы обработали клетки NK92MI 10 мкМ UNC1999 в течение 48 часов. Количественная ПЦР в реальном времени (кПЦР) и вестерн-блоттинг подтвердили, что экспрессия PKD2 кальциевого канала значительно повышалась как на уровне мРНК, так и на уровне белка (фиг. 8A, 8B). Впоследствии мы загрузили и проанализировали ряд данных ChIP-seq в базе данных Gene Expression Omnibus, включая данные ChIP-seq для различных модификаций гистонов в NK-клетках периферической крови человека, а также данные ChIP-seq различных клеток (CD56 ⁺, CD4 ⁺, CD8 ⁺ и CD34 ⁺) для модификации h4K27me3. Мы наблюдали значительную модификацию h4K27me3 наряду с модификациями h4K4me1 и h4K4me3, что указывает на то, что PKD2 находится в «уравновешенном» состоянии в NK-клетках в состоянии покоя (рис. 8C). Кроме того, промоторная область PKD2 в CD34 ⁺ гемопоэтических стволовых клетках, CD4 ⁺ T-клетках и CD8 ⁺ T-клетках не была модифицирована h4K27me3, что позволяет предположить, что EZh3-регуляция PKD2 специфична для NK-клеток (рис. 8С). Этот результат объясняет отсутствие значительного изменения потока кальция в Т-клетках после лечения UNC19.99 в РВМС (данные не показаны). Наконец, мы разработали пять пар праймеров в промоторной области PKD2, а затем проанализировали статус модификации h4K27me3 в промоторной области PKD2 с помощью ChIP-qPCR. Было обнаружено, что вблизи двух пар праймеров c и d модификация h4K27me3 была значительно подавлена после обработки UNC1999. Это свидетельствует о том, что EZh3-регулируемая экспрессия PKD2 напрямую зависит от ферментативной активности EZh3 (Fig. 8D).
РИСУНОК 8.
Ингибирование активности EZh3 повышало экспрессию PKD2 кальциевого канала. ( A ) КолПЦР в реальном времени использовали для оценки уровней экспрессии PKD2 в клетках NK92MI после обработки ДМСО (контроль) или низкомолекулярным ингибитором UNC1999. В качестве внутреннего стандарта использовали GAPDH. Статистический анализ проводили с использованием двусторонних непарных тестов t . Столбики погрешностей представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для трех независимых экспериментов. *** р < 0,01. ( B ) Вестерн-блоттинг использовали для количественной оценки экспрессии PKD2 на уровне белка в клетках NK92MI после обработки ДМСО (контроль) или различных концентраций низкомолекулярного ингибитора UNC1999. В качестве внутреннего стандарта использовали β-актин. Статистический анализ проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа. Столбики погрешностей представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для трех независимых экспериментов. *** р < 0,01. ( C ) Модифицированные состояния h4K4me1, h4K4me3, h4K36me3, h4K27ac и h4K27me3 в промоторной области PKD2 CD56 ⁺ покоящиеся NK-клетки (в синей рамке). Модифицированные состояния h4K27me3 в промоторной области PKD2 CD56 ⁺ NK покоящихся клеток, CD34 ⁺ гемопоэтических стволовых клеток, CD4 ⁺ Т-клеток и CD8 ⁺ Т-клеток (в красной рамке). ( D ) ChIP-qPCR h4K27me3 через промотор PKD2 в клетках NK92MI, обработанных ДМСО или UNC1999 в течение 48 часов. GAPDH и 5 праймеров PKD2 обозначены в алфавитном порядке по оси ×. Результаты представлены в виде кратных изменений по сравнению с контролем с GAPDH в качестве отрицательного контроля. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение для n = 3. Статистический анализ проводили с использованием двусторонних непарных тестов t . * р < 0,05. Опыты повторяли дважды.
Обсуждение
В норме способность NK-клеток к дегрануляции положительно коррелирует с цитотоксичностью NK-клеток. Однако в наших результатах было замечено, что NK-клетки, обработанные низкомолекулярными ингибиторами UNC1999 или GSK343, имели значительно повышенную способность к дегрануляции, хотя и со сниженной летальностью. Томас и др. (18) сообщили, что i.v. Ig может вызывать утомление NK-клеток, что дополнительно вызывает дегрануляцию и экспрессию IFN-γ, но ингибирует их цитотоксическую активность, что позволяет предположить, что наши результаты могут быть связаны с утомлением NK-клеток. Однако в наших результатах мы не наблюдали ни изменений экспрессии IFN-γ, ни изменений генов, связанных с усталостью NK-клеток.
NK-клетки и клетки-мишени образуют в месте контакта особую область, известную как ИС, через которую токсичные частицы доставляются в клетки-мишени. При распознавании клетки-мишени различные рецепторы и сигнальные молекулы на поверхности NK-клетки быстро агрегируют в центре IS, образуя надмолекулярный кластер активации (19, 20), который затем инициирует рекомбинацию актина. При трехмерной конфокальной микроскопии было замечено, что актин быстро образует кольцевую структуру высокой плотности в месте контакта для транспорта токсичных частиц (20, 21). На молекулярном уровне формирование ИС требует взаимодействия нескольких активирующих рецепторов, таких как интегрин и NKG2D. Его нисходящая молекула Cdc42 активируется, и сигналы передаются на WASp, который непосредственно отвечает за полимеризацию актина (22-24). Помимо реорганизации микротрубочек и актинового цитоскелета другим ключевым этапом является транспорт цитотоксических частиц. Цитотоксические частицы сначала полимеризуются вдоль микротрубочек к центру организации микротрубочек, а затем перемещаются в ИС с помощью молекулярного мотора динеина (25, 26). Наконец, немышечный моторный белок миозин IIA регулирует связь между F-актином и цитотоксическими частицами, позволяя цитотоксическим частицам проходить через сеть F-актина к клеточной мембране (27, 28). Эти сообщения предполагают, что аномалии дегрануляции и элиминации NK-клеток могут быть связаны с образованием ИС и поляризацией токсических частиц. Таким образом, с помощью конфокальной микроскопии мы наблюдали образование ИС NK-клеток и поляризацию токсических частиц NK-клеток, обработанных низкомолекулярными ингибиторами (UNC1999 или GSK343). Однако мы не наблюдали нарушений в формировании ИС и поляризации токсических частиц, что свидетельствует о том, что снижение цитотоксичности в NK-клетках не связано с вышеуказанными процессами.
Поляризация и дегрануляция в NK-клетках являются независимыми процессами, и взаимодействия активирующего рецептора LFA1 с его лигандом ICAM-1 достаточно, чтобы вызвать поляризацию цитотоксических частиц NK (29). Как только цитотоксические частицы завершили поляризацию и достигли клеточной мембраны, начинается стыковка и праймирование. ГТФаза Rab27a играет важную роль в стыковке токсичных частиц (30). Было показано, что дефицит Rab27a у мышей вызывает синдром Гришелли, иммунодефицитное заболевание, которое значительно снижает цитотоксичность ЦТЛ (31). После докинга цитотоксических частиц Munc13-4 регулирует примирование клеток CTL и NK-клеток. Дегрануляция представляет собой сложный и деликатный процесс (32), а функциональные исследования также показали, что мутации в синтаксинах 11 и Munc18-2, а также в везикулярно-ассоциированных белках SNARE, VAMP7, VAMP8 и VAMP4 могут вызывать дефекты дегрануляции (5). Это означает, что эти белки, ассоциированные с везикулами, играют важную роль в процессе дегрануляции. Однако наши результаты секвенирования транскриптома не выявили какой-либо аномальной экспрессии вышеуказанных генов, что указывает на то, что другие факторы могут быть ответственны за аномальное усиление дегрануляции.
Кроме того, приток Ca ²⁺ является необходимым фактором для обеспечения нормального течения дегрануляции. При активации NK-клеток нижестоящая сигнальная молекула PLC γ активируется и гидролизует PIP2 с образованием второго мессенджера IP3, который, в свою очередь, обеспечивает транспорт Ca ²⁺ из ER в цитоплазму. Тем временем датчик ионов кальция STIM обнаруживает нехватку ионов кальция и активирует канал ионов кальция ORAI1 на клеточной мембране, тем самым запуская депо-управляемый Ca 9.0265 2+ вход, вызывающий поступление ионов кальция из микроокружения в цитоплазму (2, 33). Сообщалось, что пациенты с мутациями STIM1 или ORAI1 проявляют тяжелый иммунодефицит (7, 34). Оба типа пациентов демонстрировали дефект дегрануляции, тогда как поляризация NK-клеток была нормальной. Эти результаты дополнительно иллюстрируют важность сигнала кальция в процессе дегрануляции. Шварц и др. (6) предположили, что повышенный приток ионов кальция в NK-клетки приводит к высвобождению аномальных токсичных гранул NK-клеток. Например, когда NK-клетка содержит шесть токсичных частиц, NK-клетка высвобождает первые две токсичные частицы в первую клетку-мишень, следующие две токсичные частицы во вторую клетку-мишень, а затем высвобождает последние две токсичные частицы в третью клетку-мишень. . Однако, когда приток кальция к NK-клеткам увеличивается, NK-клетки могут одновременно высвобождать все шесть токсичных частиц в первую клетку-мишень, что вызывает гибель первой клетки-мишени. На основании вышеизложенных предположений мы измерили концентрацию Ca ²⁺ поток в NK-клетках. Мы наблюдали, что независимо от присутствия или отсутствия Ca ²⁺ в микроокружении поток Ca ²⁺ в группе ингибиторов был значительно выше, чем в контрольной группе, что указывает на то, что индуцированный кальциевый сигнал в NK-клетках активирует Ca Хранение ²⁺ в ЭР NK-клеток. Следовательно, NK-клетки выделяют большое количество токсичных частиц в небольшое количество клеток-мишеней в течение короткого периода времени и в конечном итоге демонстрируют временное снижение способности к уничтожению.
Мы провели секвенирование транскриптома как NK-клеток в UNC1999, так и в контрольных группах. Была идентифицирована PKD2, которая кодирует белок мультитрансмембранного канала и обычно участвует в транспорте кальция и передаче сигнала кальция в почечных эпителиальных клетках. PKD2 обычно минимально экспрессируется в NK-клетках. Мы наблюдали значительную модификацию h4K27me3 наряду с модификациями h4K4me1 и h4K4me3 в области промотора PKD2, что указывает на то, что PKD2 существует в готовом состоянии в латентных NK-клетках. Этот результат предполагает, что регуляция экспрессии PKD2 с помощью EZh3 зависит от его метилазной активности. В отличие от NK-клеток, в CD34 ⁺ гемопоэтических стволовых клеток, CD4 ⁺ Т-клеток и CD8 ⁺ Т-клеток, промоторная область PKD2 не имеет специфической модификации h4K27me3, что позволяет предположить, что регуляция экспрессии PKD2 с помощью EZh3 является специфичной для NK-клеток. согласуется с нашим предыдущим исследованием (35–37)].
В этом исследовании мы случайно обнаружили, что индуцированный кальциевый сигнал приводит к несбалансированному высвобождению пузырьков, что в конечном итоге подавляет их цитотоксическую активность. Это указывает на то, что сбалансированный кальциевый сигнал играет важную роль в активности NK-клеток. Поскольку модификации гистонов характеризуются точностью, сложностью и обратимостью и служат потенциальными мишенями для лекарств, выяснение их роли в активности NK-клеток может дать новые идеи для ускользания от рака или некоторых гипериммунных заболеваний.
Сноски
Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая 81972652 (для X.W.), 81801638 (для Y.L.) и 31600705 (для J.Y.), проекта поддержки учителей высокого уровня в Пекинском муниципальном образовании. Университеты в период 13-й пятилетки (от IDHT201
до XW), грант Министерства науки и технологий Китайской Народной Республики 2014CB0 (до XW), грант фонда инкубации больницы общего профиля Тяньцзиньского медицинского университета ZYYFY2017006 (до YL) и естественные науки Фонд города Тяньцзинь (Тяньцзиньский фонд естественных наук) (Грант 17JCQNJC09000 (JY).
Электронная версия этой статьи содержит дополнительные материалы.
Сокращения, используемые в этой статье
ChIP-seq
chromatin immunoprecipitation-sequencing
DEG
differential expression gene
ER
endoplasmic reticulum
FDR
false discovery rate
GO
Gene Ontology
GSEA
Gene Set Enrichment Анализ
IS
immune synapse
KEGG
Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes
PMA/Iono
PMA/ionomycin
qPCR
quantitative PCR
RTCA
Real-Time Cellular Analyzer
Получено 8 октября 2020 г.
Принято 9 ноября 2021 г.
Ссылки
1. ↵
Мальмберг К. Дж.
М.Карлстен
А.Бьёрклунд
Э.Сольберг
Ю. Т. Брайсон
Х. Г. Люнггрен
. 2017. Иммунонадзор за раком человека, опосредованный естественными клетками-киллерами. Семин. Иммунол. 31: 20–29.
2.↵
Порес-Фернандо А. Т.
А. Цвайфах
. 2009. Приток кальция и передача сигналов при экзоцитозе литических гранул цитотоксических Т-лимфоцитов. Иммунол. 231: 160–173.
3.↵
Ли Ю.
Дж.Инь
Т. Ли
С.Хуанг
Х.Ян
Дж. Ливенворт
С. Ван
. 2015. Иммунотерапия рака на основе NK-клеток: от основ биологии до клинического применения. Науч. Китайская наука о жизни. 58: 1233–1245.
4.
Мартине Л.
М. Дж. Смит
. 2015. Балансировка активации естественных клеток-киллеров с помощью парных рецепторов. Нац. Преподобный Иммунол. 15: 243–254.
5.↵
Галандрини Р.
К.Капуано
А.Сантони
. 2013. Активация цитолитического аппарата лимфоцитов: где мы? Фронт. Иммунол. 4: 390.
6.↵
Шварц Э.К.
Б.Ку
М.Хот
. 2013. Кальций, рак и уничтожение: роль кальция в уничтожении раковых клеток цитотоксическими Т-лимфоцитами и естественными клетками-киллерами. Биохим. Биофиз. Акта 1833: 1603–1611.
7.↵
Мол-Павичич А.
С.Чианг
А. Ренсинг-Эль
Б. Йессен
К. Фориа
С. М. Вуд
С.Шёквист
М. Хуфнагель
И. Шульце
Т.Басс и др.
2011. Опосредованный ORAI1 приток кальция необходим для дегрануляции цитотоксических лимфоцитов человека и лизиса клеток-мишеней. Проц. Натл. акад. науч. США 108: 3324–3329.
8.↵
Швиндлинг К.
А.Кинтана
Э. Краузе
М.Хот
. 2010. Расположение митохондрий контролирует локальный приток кальция в Т-клетки. Дж. Иммунол. 184: 184–190.
9.↵
Куровска М.
Н.Гуден
Н. Т. Нехме
М. Корт
Ю.Гарин
А. Фишер
Г. де Сен-Базиль
Г. Менаше
. 2012. Терминальный транспорт литических гранул в иммунный синапс опосредуется комплексом kinesin-1/Slp3/Rab27a. Кровь 119: 3879–3889.
10.↵
Cahalan MD
2009. СТИМУЛИРОВАНИЕ входа Ca(2+) в магазине. Нац. Клеточная биол. 11: 669–677.
11.↵
Хоган П. Г.
Р. С. Льюис
А.Рао
. 2010. Молекулярная основа передачи сигналов кальция в лимфоцитах: STIM и ORAI. Год. Преподобный Иммунол. 28: 491–533.
12.↵
Ли З.
Л.Лю
Ю.Дэн
В.Джи
В.Ду
П. Сюй
Л. Чен
Т. Сюй
. 2011. Постепенная активация канала CRAC путем связывания разного количества субъединиц STIM1 с Orai1. Сотовый рез. 21: 305–315.
13.↵
Ли Ю.
Дж. Ван
Дж. Инь
С. Лю
М.Ю.
Т. Ли
Х.Ян
С. Ван
. 2017. Динамика состояния хроматина при активации NK-клеток. Онкотаргет 8: 41854–41865.
14.↵
Йи С.
Дж.Сан
Л. Цю
В.Фу
А. Ван
С. Лю
Ю. Ян
Кадин М.Э.
П.Ту
Ю. Ван
. 2018. Двойная роль EZh3 при кожной анапластической крупноклеточной лимфоме: содействие выживанию опухолевых клеток и регуляция микроокружения опухоли. Дж. Инвест. Дерматол. 138: 1126–1136.
15.↵
Субраманиан А.
П. Тамайо
В. К. Мута
С. Мукерджи
Б. Л. Эберт
М. А. Жиллетт
А.Паулович
С. Л. Померой
Т.Р.Голуб
Э. С. Ландер
Месиров Ж.П.
. 2005. Анализ обогащения набора генов: подход, основанный на знаниях, для интерпретации профилей экспрессии всего генома. Проц. Натл. акад. науч. США 102: 15545–15550.
16.↵
Альтер Г.
Дж. М. Маленфант
М.Альтфельд
. 2004. CD107a как функциональный маркер для идентификации активности естественных клеток-киллеров. Дж. Иммунол. Методы 294: 15–22.
17.↵
Криббс А.
Э. С. Хукуэй
Г. Уэллс
М. Линдоу
С.Обад
Х.Эрум
Р. К. Принджа
Н.Афанасу
А. Соуман
М. Филпотт и др.
2018. Ингибирование деметилазы гистона h4K27 избирательно модулирует воспалительные фенотипы естественных клеток-киллеров. Дж. Биол. хим. 293: 2422–2437.
18.↵
Якоби К.
М.Клаус
Б. Вильдеманн
С.Вингерт
М.Корпорал
Й. Рёмиш
С. Мейер
К.Ватцль
Т. Гизе
. 2009. Воздействие на NK-клетки внутривенного иммуноглобулина вызывает высвобождение IFN-γ и дегрануляцию, но ингибирует их цитотоксическую активность. клин. Иммунол. 133:393–401.
19.↵
Стинчкомб Дж. К.
Г. М. Гриффитс
. 2007. Секреторные механизмы клеточно-опосредованной цитотоксичности. Год. Преподобный Cell Dev. биол. 23: 495–517.
20.↵
Оранж Дж. С.
К. Э. Харрис
М. М. Андзельм
М. М. Вальтер
Р. С. Геха
Дж. Л. Стромингер
. 2003. Иммунологический синапс зрелой активирующей естественной клетки-киллера формируется в несколько стадий. Проц. Натл. акад. науч. США 100: 14151–14156.
21.↵
Стинчкомб Дж. К.
Г.Босси
С. Бут
Г. М. Гриффитс
. 2001. Иммунологический синапс ЦТЛ содержит секреторный домен и мембранные мостики. Иммунитет 15: 751–761.
22.↵
Калли Ф. Дж.
М. Джонсон
Дж. Х. Эванс
С. Кумар
Р. Крилли
Х. Касасбуэнас
Т. Шнайдер
М.Мехраби
М. П. Деонарайн
Ушаков Д.С. и др.
2009. Интеграция сигналов естественных клеток-киллеров уравновешивает симметрию и миграцию синапсов. PLoS Биол. 7: e1000159.
23.
Стабильный Х.
К.Карлино
К.Мацца
С.Джилиани
С. Морроне
Л. Д. Нотаранжело
Л. Д. Нотаранджело
А.Сантони
А. Жисмонди
. 2010. Нарушенная миграция NK-клеток у пациентов с WAS/XLT: роль пути Cdc42/WASp в контроле состояния высокого сродства бета2-интегрина, индуцированного хемокинами. Кровь 115: 2818–2826.
24.↵
Микуччи Ф.
К.Капуано
Э.Марчетти
М. Пикколи
Л.Фрати
А.Сантони
Р.Галандрини
. 2008. PI5KI-зависимые сигналы являются критическими регуляторами цитолитического секреторного пути. Кровь 111: 4165–4172.
25.↵
Даниэле Т.
Ю.Хакманн
А. Т. Риттер
М. Уэнам
С. Бут
Г. Босси
М. Шинтлер
М. Ауэр-Грумбах
Г. М. Гриффитс
. 2011. Роль Rab7 в движении секреторных гранул в цитотоксических Т-лимфоцитах. Traffic 12: 902–911.
26.↵
Ментлик А. Н.
К. Б. Санборн
Э. Л. Хольцбаур
Дж. С. Оранж
. 2010. Быстрая конвергенция литических гранул к MTOC в естественных клетках-киллерах зависит от динеина, но не от цитолитической фиксации. Мол. биол. Мобильный 21: 2241–2256.
27.↵
Андзельм М. М.
X. Чен
К. Кржевски
Дж. С. Оранж
Дж. Л. Стромингер
. 2007. Myosin IIA необходим для экзоцитоза цитолитических гранул в NK-клетках человека. Дж. Экспл. Мед. 204: 2285–2291.
28. ↵
Санборн К.Б.
Э. М. Мейс
Г.Д.Рак
А. Дифео
Дж. А. Мартинетти
А.Печчи
Дж. Б. Бассель
Р.Фавье
Дж. С. Оранж
. 2011. Фосфорилирование хвостовой части миозина IIA регулирует ассоциацию одиночной молекулы миозина IIA с литическими гранулами, способствуя цитотоксичности NK-клеток. Кровь 118: 5862–5871.
29.↵
Брайсон Ю. Т.
М.Э.Марч
Д. Ф. Барбер
Х. Г. Юнггрен
Э. О. Лонг
. 2005. Поляризация и дегрануляция цитолитических гранул, контролируемая различными рецепторами в покоящихся NK-клетках. Дж. Эксп. Мед. 202: 1001–1012.
30.↵
Стинчкомб Дж. К.
Д. К. Баррал
Э. Х. Мулес
С. Бут
А. Н. Хьюм
Л.М.Маческий
М. К. Сибра
Г. М. Гриффитс
. 2001. Rab27a необходим для регулируемой секреции цитотоксическими Т-лимфоцитами. J. Cell Biol. 152: 825–834.
31.↵
Менаше Г.
Э. Пастураль
Дж.Фельдманн
S. Определенно
Ф.Эрсой
С. Дюпюи
Н.Вульфраат
Д. Бьянки
А. Фишер
Ф.Ле Деист
Г. де Сен-Базиль
. 2000. Мутации в RAB27A вызывают синдром Гришелли, связанный с гемофагоцитарным синдромом. Нац. Жене. 25: 173–176.
32.↵
Фельдманн Дж.
И. Каллебаут
Г. Рапозо
S. Определенно
Д. Бак
К. Дюмон
Н. Ламберт
М. Уаше-Шарден
Г.Шедевиль
Х. Тамари и др.
2003. Munc13-4 необходим для слияния цитолитических гранул и мутирует в форме семейного гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (FHL3). Мобильный 115: 461–473.
33.↵
Клэпэм Д. Э.
1995. Передача сигналов кальция. Сотовый 80: 259–268.
34.↵
Ченг К. Т.
И. Алевизос
С. Лю
В. Д. Суайм
Х.Инь
С. Феске
М.Охора
И.С.Амбудкар
. 2012. Дефицит белков STIM1 и STIM2 в Т-лимфоцитах лежит в основе развития аутоиммунного заболевания экзокринных желез – синдрома Шегрена. [Опубликованная опечатка появится в 2021 г. Проц. Натл. акад. науч. США 109: 18625.] Proc. Натл. акад. науч. США 109: 14544–14549.
35. ↵
Инь Дж.
Дж. В. Ливенворт
Ю.Ли
К. Луо
Х. Се
С. Лю
С.Хуанг
Х.Ян
З.Фу
Л. Ю. Чжан и др.
. 2015. Ezh3 регулирует дифференцировку и функцию естественных клеток-киллеров посредством активности гистонметилтрансферазы. Проц. Натл. акад. науч. США 112: 15988–15993.
36.
Ю М.
З.Су
С.Хуан
Ю. Чжоу
С. Чжан
Б. Ван
З. Ван
Ю. Лю
Н.Син
М.Ся и др.
2021. Гистонметилтрансфераза Ezh3 негативно регулирует терминальное созревание и функцию NK-клеток. Дж. Лейкок. биол. DOI: 10.1002/JLB.1MA0321-155RR.
37.↵
Ю М.
З.Су
С.Хуан
С. Ван
. 2021. Секвенирование одиночных клеток раскрывает новую роль Ezh3 в созревании и функционировании NK-клеток. Фронт. Иммунол. 12: 724276.
ПредыдущийСледующий
Наверх
Полное производство российского бомбардировщика Ту-160 возобновлено через 30 лет
В отголоске холодной войны первый недавно произведенный в России сверхзвуковой ядерный тяжелый бомбардировщик Туполев Ту-160М (обозначение НАТО Blackjack) совершил свой первый полет 12 января, достигнув высоте 600 м (2000 футов) во время 30-минутного испытания.
Все еще ожидая окраски в светло-зеленой грунтовке, модернизированный Ту-160М поднялся в небо под командованием летчиков-испытателей Объединенной авиастроительной корпорации (ОАК) с аэродрома Казанского авиационного завода, где производилась сборка бомбардировщика. Короткий тест был предназначен для проверки устойчивости и управления самолетом, прежде чем переходить к более масштабным этапам испытаний.
Испытательный полет знаменует собой начало возобновления серийного производства Ту-160М после завершения испытаний совершенно нового прототипа бомбардировщика, первый полет которого состоялся 2 февраля 2020 года. контракт между Минпромторгом России и ПАО «Туполев», дочерним предприятием мажоритарной российской государственной ОАК, с запланированным полным тиражом в 50 единиц.
Ту-160М имеет улучшенные системы и большую дальность полета
ОАК
Возрождение производства Ту-160М знаменует собой существенное изменение военной политики России. В 2016 году сообщалось, что только 16 находились в эксплуатации. Теперь, после решения президента России Владимира Путина, самолет возвращается к полному производству совершенно новых самолетов впервые с тех пор, как линия была закрыта после распада Советского Союза. .
Это важно, потому что Ту-160 общеизвестно дорог в производстве, а несколько предыдущих попыток возродить производство не увенчались успехом, простите за каламбур, сдвинуться с мертвой точки и обычно заканчивались только работами по достройке или модернизации старых планеров из России или закуплены на Украине, которая унаследовала часть бомбардировщиков после падения коммунизма.
В итоге возрождение Ту-160 означает восстановление целых производственных линий и переобучение старым навыкам, таким как вакуумная сварка титана, а также внедрение цифровых технологий.
Ту-160М на взлете
ОАК
Ту-160М, также известный как «Белый лебедь», известен не только как реликт многолетнего конфликта Варшавского договора с НАТО и его союзными державами, он также занесен в книгу рекордов как самый большой и тяжелый сверхзвуковой боевой самолет, самый быстрый из когда-либо летавших бомбардировщиков, а также самый большой и самый мощный из когда-либо построенных сверхзвуковых самолетов с изменяемой геометрией крыла.
Впервые поднявшийся в воздух в 1982 году, Ту-160 изначально был разработан как ответ на сверхзвуковой бомбардировщик B-1 Lancer ВВС США, предназначенный для доставки ядерных бомб через советскую систему ПВО. Хотя американцы свернули производство B-1 и варианта B-1B, разработка и производство Ту-160 продолжались.
В результате получился самолет с экипажем из четырех человек, который был больше, чем B-1B, а также быстрее и с чуть большей дальностью боя. При длине 54 м (177 футов) и размахе крыла 55 м (183 фута) при полностью выпущенных стреловидных крыльях Ту-160 имеет максимальную взлетную массу 275 000 кг (606 271 фунт). Первоначально он был оснащен четырьмя ТРДД «Самара» НК-321 с форсажной камерой, развивающими 55 000 фунтов каждый и разгоняющими бомбардировщик до максимальной скорости 2,05 Маха и крейсерской скорости 0,9 Маха.на дальность 12 300 км (7600 миль), хотя эти двигатели теперь заменены новой серией двигателей НК-32, которые увеличивают дальность полета на 1000 км (620 миль).
Ту-160М на земле
ОАК
Несмотря на то, что Ту-160 способен нести 45 000 кг (99 208 фунтов) гравитационных ядерных бомб в своих двух внутренних отсеках, его более правильно рассматривать как ракетоносец, поскольку его стандартная нагрузка представляет собой револьверную пусковую установку для Радуга Х-55СМ / 101/102. /555 крылатых ракет или 12 ядерных ракет малой дальности AS-16 Kickback. Ту-160М также сможет нести гиперзвуковую ракету Х-47М2 «Кинжал».
Помимо новых бомбардировщиков Ту-160М, существующий парк Ту-160 модернизируется до стандартов Ту-160М, что включает в себя новые пилотажно-навигационные системы, системы связи и управления, а также новые радиолокационные и радиоэлектронные средства противодействия.
Первый из новых Ту-160М планируется поставить в ВВС России в 2023 году.
«Мы восстановили полный цикл производства Ту-160, но уже в модификации М, с использованием модернизированных двигателей, модернизировали системы управления летательными аппаратами, навигационные системы и системы управления вооружением», — заявил министр промышленности и торговли Российской Федерации Денис Мантуров. «Важную роль в восстановлении производства уникальных самолетов сыграла модернизация Казанского авиационного завода: обновлено оборудование цехов, летно-испытательной базы, введена в эксплуатацию крупнейшая в мире установка для электронно-лучевой сварки и вакуумного отжига титана. «Сегодня мы видим значительные перспективы платформы Ту-160: дальнейшее развитие позволит использовать ее для новых видов вооружений, в том числе перспективных».
Источник: UAC
— drylin® NK-02-27 Низкопрофильная линейная направляющая
Дом
Drylin® НК-02-27
Номера деталей и данные о продукте:
9174 9174 9174 9174 с монтажными орехами
Плаву. 1734 290 г/м (0,2 фунта/фут)
Каретка NW-02-27
Рельс NS-01-27
Каретка с монтажными гайками
Плавающее подшипник в Y-направлении NW-02-27, Lly
с растущими гайками
Плавающие ношения в Z-направлении
Каретка с монтажными гайками
Плавающее подшипник в Y- и Z-направлении NW-02-27, LLYZ
с предварительной нагрузкой
Масса тележки 12,5 г (0,44 унции)
Макс. rail length 3,658 mm (12 ft)
Hole pattern Symmetrical (C5 = C6)
Preload force (if applicable) 1 N (0.22 lbf)
долларов США
Order нет. Вес рельса Макс. длины рельсов Цена/м
[г/м] [мм]
Срок поставки по запросу НС-01-27 290 3000 51,40 Добавить в корзину
Срок поставки по запросу НС-01-27С 290 3000 47,74 долл. США Добавить в корзину
готов к отправке через 24-48 часов НС-01-27-АР 290 3000 45,00 долларов США Добавить в корзину
Подробнее о выбранной детали:
3D-CAD
3D-CAD
Запрос образца
Запрос образца
PDF
PDF
Запрос коммерческого предложения
Запрос коммерческого предложения
myCatalog
myCatalog
3 1 18349 9 Номер заказа 7.6 18342 9
Обозначение Масса вагона [г] готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27 Вагон 12,5 6,85 долл. США Добавить в корзину Срок поставки по запросу СЗ-02-27-НТ Каретка клипсованная, температура до 130°C 12,5 24,59 долл. США Добавить в корзину готов к отправке через 24-48 часов СЗ-02-27-П Каретка с предварительным натягом 12,5 5,32 долларов США Добавить в корзину готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27-ЛЛИ Каретка с крепежными гайками с плавающим подшипником в направлении Y 12,5 6,85 долл. США Добавить в корзину готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27-ЛЛЗ Каретка с крепежными гайками с плавающим подшипником в направлении Z 12,5 6,85 долл. США Добавить в корзину готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27-ЛЛИЗ Каретка с крепежными гайками с плавающим подшипником в направлении Y и Z 12,5 6,85 долл. США Добавить в корзину
Подробнее о выбранной части:
3D-CAD
3D-CAD
Запрос выборки
Запрос выборки
PDF
PDF
Запрос цитаты
Запрос цитаты
Mycatalog
Mycatalog
919333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333н. Нет. г.
ч А С С1 С2 А2 ч3 К2 К3 К4 Спмин. DpØмин. Вес
±0,35 [g/m]
готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27 9,5 14 20 30 34 0 1.2 0 0 0 12,5
Срок поставки по запросу СЗ-02-27-НТ 9,5 14 20 30 40 0 0 6,5 12,5
готов к отправке через 24-48 часов СЗ-02-27-П 9,5 14 20 30 40 0 0 М4 5 6,5 12,5
готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27-ЛЛИ 9,5 14 20 30 40 0 0 М4 5 6,5 12,5
готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27-ЛЛЗ 9,5 14 20 30 40 0 0 М4 5 6,5 12,5
готов к отправке через 24 часа СЗ-02-27-ЛЛИЗ 9,5 14 20 30 40 0 0 М4 5 6,5 12,5
More about selected part:
3D-CAD
3D-CAD
Sample request
Sample request
PDF
PDF
Quote request
Quote request
myCatalog
myCatalog
Static load capacity and moments of inertia of an area
Заказ всей системы
Конфигурация всего за несколько шагов:
1.

Двигатели НК-32-02 и будущее дальней авиации

Новости года

Прошлое и настоящее

Технические особенности

Перспективы проекта

Без слабых мест

Двигатели НК-32-02 подняли в небо сверхзвуковой бомбардировщик Ту-160М

Последние новости

Погода в городе

Кузнецов НК-32 — frwiki.wiki

Резюме

НК-32

НК-32-02

Рекомендации

Внешние ссылки

Серийный двигатель НК-32-02 установлен на Ту-160М “Игорь Сикорский” для проведения испытаний

Возвращение «Белого лебедя»: новые «стратеги» на базе Ту-160

Экс-командующий Дальней авиацией оценил новые двигатели «Блэк Джека»

Что еще почитать

В регионах

Полиция задержала 50 девушек в красном на петрозаводской площади Кирова.

Самые вкусные оладьи из кабачков по-новому

Как получить звание ветерана труда

Жительницы Улан-Удэ становятся проститутками ради уплаты долгов и помощи близким

«Надо настраиваться»: стилист в Улан-Удэ предсказала возвращение моды нулевых годов

Костромские проблемы: в наших лесах исчезли грибы

Российский модернизированный бомбардировщик Ту-160М2 летает с новыми двигателями НК-32-02

Двигатели НК-32-02 и будущее дальней авиации

Новости года

Прошлое и настоящее

Технические характеристики

Перспективы проекта

Нет слабых мест

ТУ-160 принят на вооружение в 2021 году

Защита

Прямая трансляция

Опубликовано 27.02.2022

Опубликовано 24.

Опубликовано 24.02.2022

Опубликовано 24.02.2022

Опубликовано 24.02.2022

Опубликовано 24.

Опубликовано 22.02.2022

Усиленный сигнал кальция вызывает дегрануляцию NK-клеток, но подавляет их цитотоксическую активность

Key Points

Visual Abstract

Abstract

Введение

Материалы и методы

Клеточная культура

Анализ дегрануляции CD107a

Анализ цитотоксичности

Анализ цитотоксичности в реальном времени

Анализ конъюгата

Иммунофлуоресцентное окрашивание и конфокальная микроскопия

Внутриклеточные уровни перфорина и гранзима B

Анализ мобилизации кальция

Оценка доставки гранзима В

Конструирование короткой шпилечной РНК, генерация лентивируса и трансдукция NK-клеток

Вестерн-блоттинг

Выделение РНК и ПЦР в реальном времени

Анализ секвенирования РНК

Иммунопреципитация хроматина

Анализ секвенирования иммунопреципитации хроматина

Результаты

Ингибирование активности или экспрессии фермента EZh3 способствует дегрануляции NK-клеток

Ингибирование активности или экспрессии фермента EZh3 снижает цитотоксичность NK