Х-41 / П-270 «Москит» (3М-80; SSN-22 «Sunburn»)сверхзвуковая противокорабельная крылатая ракета

ПКР Москит

    Разработка противокорабельной ракеты «Москит» 3М-80 была начата в МКБ «Радуга» в 1973 году под руководством главного конструктора И.С.Селезнева.
    Это сверхзвуковая низковысотная самонаводящаяся крылатая ракета. Она относится к классу легких противокорабельных ракет и предназначалась для замены КР П-15. «Москит» — единственная в мире ракета, скорость полета которой на малых высотах превышает два маха. В работе над ракетой применено более тридцати изобретений и научных открытий. Например, в «Москитах» впервые прямоточный маршевый двигатель ракеты совмещен со стартовым наподобие матрешки.
    Система управления ракеты создана в ГосНПО «Альтаир» под руководством С.Климова. Для ее отработки использовалась летающая лаборатория на базе Бе-12.
    Первоначально ракета разрабатывалась в корабельном варианте для вооружения эсминцев, ракетных катеров и экранопланов. В 1984 г. корабельный вариант «Москита» 3М-80Е был принят па вооружение на эсминцах типа «Современный» (проект 956). На эсминце пр. 956 было установлено по две счетверённые пусковые установки КТ-190. Работы же над авиационным вариантом «Москита» затянулись, и он был принят на вооружение между 1992 и 1994 г.

    Крылатая ракета 3М-80 входит в состав ракетных комплексов, которые предназначены для поражения надводных кораблей и транспортов водоизмещением до 20000 тонн из состава корабельных ударных группировок, десантных соединений, конвоев и одиночных кораблей, как водоизмещенных, так и на подводных крыльях и воздушной подушке в условиях современных и перспективных средств огневого и радиоэлектронного противодействия противника. При этом ракета устойчива к разрушающему действию ядерного взрыва.

    Ракета 3М-80 построена по нормальной аэродинамической схеме с Х-образным размещением аэродинамических поверхностей. Двигательная установка комбинированная, состоит из маршевого прямоточного воздушно-реактивного твердотопливного двигателя и стартового порохового двигателя. Причем стартовик вставляется в сопло маршевого двигателя. Через 3-4 с после старта пороховой двигатель сгорает и выталкивается из сопла набегающим потоком воздуха. Прямоточный двигатель был разработан в ОКБ-670 главного конструктора М.М.Бондарюка, а затем дорабатывался в МКБ «Союз» в Тураево.
    Комбинированная система управления в составе инерциальной навигационной системы и активно-пассивной радиолокационной головки самонаведения обеспечивает высокую вероятность попадания в цель даже в условиях радиопротиводействия противника. Для целей типа группы катеров или корабельной ударной группы эта вероятность равна 0,99; для конвоев и десантных соединений — 0,94.

    После старта ракета делает «горку», а затем снижается до маршевой высоты полета около 20 м, при подходе к цели происходит снижение до 7 м (над гребнем волн). Ракета может совершать интенсивные противозенитные маневры с перегрузками, превышающими 10 g.
    От «Москита» невозможно уклониться. Противник заметит ракету всего за 3-4 секунды до встречи с бортом собственного корабля. За счет огромной кинетической энергии «Москит» пробивает корпус любого корабля и взрывается внутри. Такой удар способен потопить не только корабль среднего класса, но и крейсер. А 15-17 «Москитов» — целую корабельную группу. По оценкам ряда отечественных и зарубежных специалистов, «Москит» является лучшей противокорабельной ракетой в мире.
    Длина ракеты 9,385 м, размах сложенных крыльев 1,3 м, раскрытых — 2,1 м. Стартовый вес ракеты 3950 кг. Вес фугасной боевой части 300 кг, из них 150 кг мощного взрывчатого вещества. Дальность стрельбы от 10 до 120 км.
Маршевая скорость М=2,4.
      Кроме ЭМ пр. 956 и БПК пр. 11551 «Адмирал Чабаненко», ракеты «Москит» получили катера пр. 12411. На катера этого проекта установлено побортно в средней части катера по две спаренные ПУ типа КТ-152М. На опытном малом ракетном корабле пр. 1239 (на воздушной подушке скегового типа) установили две счетверённые неповоротные установки. Кроме того, «Москит» был установлен на экраноплане «Лунь», его можно применять в частях береговой обороны и в морской авиации.
    Модифицированная ракета с увеличенной дальностью полета имеет обозначение 3М-80Е. Их выпуск освоен на Арсеньевской авиационной компании «Прогресс» им. Н.И.Сазыкина.
    Комплекс неоднократно демонстрировался на авиасалонах в Чили, Абу-Даби (ОАЭ) и в подмосковном Жуковском (МАКС). В настоящее время он разрешён на экспорт и в Китай поставляются ЭМ, вооруженные этим комплексом.
    Рассматривался авиационный вариант 3М-80 — Х-41 в качестве ракеты «воздух-корабль», предназначеной для применения с палубного истребителя Су-33 (Су-27К) и, возможно, бомбардировщика Су-34.

Описание
Разработчик МКБ «Радуга»
Изготовитель ПО «Прогресс» (г.Арсеньев)
Обозначение «Москит» (3М-80)
Варианты П-270 «Москит» Х-41
Обозначение NATO SSN-22 «Sunburn»
Тип ГСН инерциальная + радиолокационная активно-пассивная
Геометрические и массовые характеристики
Длина, м 9,385
Размах крыла, м 2,1
Диаметр корпуса, м 0,76
Диаметр ракеты со сложенными крыльями, м 1,3
Срок хранения в боеготовом состоянии на носителе, лет 1,5
Стартовый вес, кг
3М-80		 3950
3М-80Е 4150-4500
Тип боеголовки проникающая
Масса БЧ, кг 300 (320)
Вес взрывчатого вещества, кг 150
Силовая установка
Разработчик МКБ «Союз» (г. Тураево)
Двигатель ПВРД 3Д83
Скорость запуска, М 1.8-2.5
Время запуска, с 0.5
Время работы, с
250
Летные данные
Скорость, км/ч (М=) крейсерская (2,35)
максимальная (2,8)
Дальность пуска, км 3М-80 10-90 250
3М-80Е 120  
Высота полёта, м 7-20
Скорость полета носителя, м/c   200-470
Высота пуска, км   до 12
Послестартовый разворот +/- 60 o
Температура применения, oC +/-60
Время пуска 4-х ракет в залпе, с		 15  
Темп стрельбы при залповом пуске, с 5  



Источники информации:

  1. «История авиационного вооружения» / А. Б. Широкорад, 1999 /
  2. «Отечественные авиационные тактические ракеты». А.В.Карпенко, С.М.Ганин, «Бастион» N1, 2000г.
  3. Противокорабельная ракета 3M80 (3М80Е) «Москит» / Ракетная техника /
  4. «Энциклопедия вооружений» / «Кирилл и Мефодий», 1998 — CD-ROM /
  5. «Солнечный ожог» российского ВПК / «ОГОНЕК», N 08, 24 февраля 1997 /
  6. Противокорабельная ракета 3М-80 «Москит» / Авиабаза =Kron= /
  7. Противокорабельная ракета 3M80 (3М80Е) «Москит» / АКК «Прогресс» /

Х-41 (ЗМ80) «Москит» — противокорабельная крылатая ракета

В 1975 г. в МКБ «Радуга» под руководством И.С. Селезнева началось проектирование ракетного комплекса П-100 (ЗК80) со сверхзвуковой ПКР ЗМ80 «Москит», предназначенного для оснащения эсминцев пр. 956, малых ракетных кораблей пр. 12421 и др. Ракета оснащалась комбинированной системой управления с активно-пассивной РГСН, включающейся на конечном этапе. Силовая установка состояла из работающего на керосине СПВРД ЗД80 со встроенным твердотопливным разгонным блоком. Она была разработана в ОКБ М. Бондарюка и прошла цикл доводки в ОКБ «Союз» в Тураево.

Ракета Х-41 (ЗМ80) «Москит» — видео

В конструкции УР ЗМ80 «Москит» применены традиционные для ракетостроения материалы — сталь ВКЛ-3, титановые сплавы ОТ4, ОТ4-1, ВТ-5, для радиопрозрачных частей использованы трехслойные панели из стеклоткани СКАН-Э на связующем К-9-70, а пластиковые детали корпуса изготавливаются из обычной ткани Т-10 на том же связующем.

Ракета ЗМ80 предназначена как для поражения крупных боевых кораблей и транспортов, так и для уничтожения малых скоростных и маневренных морских целей. Для уничтожения эсминца достаточно 1,2 попадания ракет этого типа, а транспорта водоизмещением до 20000 т — 1,5 попадания.

Полет УР ЗМ80 на крейсерском участке проходит на высоте 20 м со скоростью свыше 2000 км/ч, при этом ракета может выполнять противозенитный маневр с перегрузкой до 10 единиц, а на конечном участке ракета снижается до высоты 7 м по гребням волн. Система управления обеспечивает возможность выполнения маневров сразу после старта с углами поворота до 60 град. Помехозащищенная ГСН обеспечивает поражение выбранного корабля в группе с вероятностью 0,94.-0,99. При облучении РЛС противника она может выполнять противозенитный маневр «змейка». Дальность пуска составляет 10…120 км. Кроме того, был создан усовершенствованный вариант УР ЗМ90 (ЗМ82) с дальностью свыше 250 км.
Опытная партия ракет строилась на ДМЗ по кооперации с заводом «Прогресс» в г. Арсеньев, где в дальнейшем был развернут их серийный выпуск. В 1985 г. за создание УР ЗМ80 МКБ «Радуга» было отмечено Государственной премией.

В конце 80-х гг. на базе УР ЗМ80 была спроектирована ПКР воздушного базирования Х-41 «Москит». Она предназначалась для вооружения палубных самолетов Су-27К и модификации фронтового бомбардировщика Су-27ИБ, оснащенной ПрНК «Морской Змей». Как и для варианта морского старта, для Х-41 может осуществляться целеуказание и коррекция траектории через ретранслятор на борту ЛА, оснащенных МСРЦ «Успех», например ТУ-95РЦ или Ка-25Ц или ИСЗ системы «Легенда». Одна УР подвешивалась на спецдержатель в плоскости симметрии самолета. Ракета Х-41 прошла отработку на совместимость с РЭО и электросистемой Су-27К, однако, о пусках не сообщалось.
В 1992 г. она была предложена на экспорт под названием Х-41Э ASM-MSS для самолетов Су-33 и Су-32ФН (предполагаемые «коммерческие» модификации Су-27К и Су-27ИБ с ПрНК «Морской Змей»). Но для завершения работ требовались иностранные инвестиции. В настоящее время информации о закупках авиационной ПКР Х-41 нет. Морской вариант УР ЗМ80 закупила Индия и самостоятельно провела его модернизацию (проект «Коралл»), Не исключено, что командование ВС Индии заинтересуется и УР Х-41 для вооружения самолетов Су-ЗОМКИ. Кроме того, сообщалось, что небольшую партию ракет ЗМ80 приобрели США для испытаний.

Тактико-технические характеристики ракеты Х-41 (ЗМ80) «Москит»

Скорость максимальная / крейсерская 2,8М / 2,35M
Стартовая масса, кг 3950
Масса боевой части, кг 320
Диапазон высот применения, м 100-12000
Дальность пуска максимальная, км 120
Дальность пуска минимальная, км
10
Масса взрывчатого вещества
 150 кг
Длина 9,385 м (9,745)
Размах крыла 2,1 м
Диаметр ракеты со сложенным крылом 1,3 м

Ракета Р-17 (8К14) «Скад-В» ракетного комплекса 9К72 «Эльбрус»

Р-12 (8К63) — жидкостная баллистическая ракета

«Точка-У» (9K79-1) — ракетный комплекс

ПТРК «Конкурс-М» с ПТУР 9М113М

Р-36М (15А14) «Сатана» — межконтинентальная баллистическая ракета

ПТРК FGM-148 Джавелин — американский противотанковый ракетный комплекс

П-1000 «Вулкан» (3М70) — противокорабельный ракетный комплекс

«Протон-М» (УР-500) — ракета-носитель тяжелого класса

«Искандер» (9К720) — ракетный комплекс

УР-100Н, УР-100Н УТТХ — межконтинентальная баллистическая ракета

Р-16 (8К64) — межконтинентальная баллистическая ракета

РТ-2ПМ2 «Тополь-М» — российский ракетный комплекс

ПТРК «Корнет-Э» — противотанковый ракетный комплекс

П-700 «Гранит» (3М45) — противокорабельный ракетный комплекс

Р-7 (8К71) — межконтинентальная баллистическая ракета

УР-100 (8К84) — межконтинентальная баллистическая ракета шахтного базирования

П-800 «Оникс» и «Яхонт» — противокорабельные ракеты

Ракетный комплекс «Уран» с Х-35 противокорабельной крылатой ракетой

Самоходный ПТРК 9П149 «Штурм-С»

Р-36М2 «Воевода» (15А18М) — межконтинентальная баллистическая ракета

АНГАРА — ракета-носитель

РСД-10 «Пионер» — ракетный комплекс

«Гарпун» — американская противокорабельная ракета

ПТРК BGM-71 ТOW-2 — американский противотанковый ракетный комплекс

П-500 «Базальт» (4К80) — противокорабельная ракета

ПТРК «Метис-М» — противотанковый ракетный комплекс

Р-14 (8К65) — одноступенчатая баллистическая ракета

Х-41 (ЗМ80) «Москит» — противокорабельная крылатая ракета

Рокот (14А05) — ракета-носитель легкого класса

П-120 «Малахит» (4К85) — противокорабельная ракета

РТ-2 (8К98), РТ-2П (8К98П) — межконтинентальная баллистическая ракета

Р-5М (8К51) — ракетный комплекс

РТ-23УТТХ «Молодец» (15Ж61) — железнодорожный ракетный комплекс

МР УР-100 (15А15), МР УР-100УТТХ (15А16) — межконтинентальная баллистическая ракета

П-5 — cтратегическая крылатая ракета

Х-55 — стратегическая авиационная крылатая ракета

«Космос-3М» (11К65М) — ракета-носитель среднего класса

Р-9А (8К75) — межконтинентальная баллистическая ракета

УРК-5 «Раструб-Б» — универсальный ракетный комплекс

3М-25 Метеорит (П-750) — стратегическая ракета

Ракетно-космический комплекс «Морской старт». Ракета «Зенит-3SL»

П-35 (П-6) — крылатая противокорабельная ракета

PJ-10 «БраМос» («BrahMos») — противокорабельная ракета

П-15(У) — крылатая ракета

Крылатые ракеты КСР-2 и КСР-11

«АЛЬФА» — противокорабельная ракета

Х-65С — противокорабельная ракета

П-70 «Аметист» (4К66) — противокорабельная ракета подводного старта

УПР-4 «Метель» — противолодочный ракетный комплекс

Добавить комментарий

Использование полимеразной цепной реакции для идентификации видов комаров комплекса Anopheles gambiae

. 1990 окт; 4 (4): 367-73.

doi: 10.1111/j.1365-2915.1990.tb00453.x.

С. М. Паскевитц 1 , Ф. Х. Коллинз

принадлежность

  • 1 Отдел паразитарных болезней, Центры по контролю за заболеваниями, Атланта, Джорджия 30333.
  • PMID: 2133004
  • DOI: 10.1111/j.1365-2915.1990.tb00453.x

С. М. Паскевитц и соавт. Мед Вет Энтомол. 1990 окт.

. 1990 окт; 4 (4): 367-73.

дои: 10.1111/j.1365-2915.1990.tb00453.х.

Авторы

С. М. Паскевитц 1 , Ф. Х. Коллинз

принадлежность

  • 1 Отдел паразитарных болезней, Центры по контролю за заболеваниями, Атланта, Джорджия 30333.
  • PMID: 2133004
  • DOI: 10.1111/j.1365-2915.1990.tb00453.x

Абстрактный

Разработан нерадиометрический метод различения родственных видов Anopheles gambiae Giles и An. arabiensis Patton, два важных афротропических переносчика малярии. Фрагменты ДНК видовой диагностической длины амплифицируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) из небольшого количества неизвестной ДНК и трех разных праймеров для ПЦР. Все три праймера для ПЦР основаны на последовательностях рибосомной ДНК (рДНК). Универсальный праймер плюс-цепи (А0) получают из консервативной области на 3′-конце кодирующей области 28S рДНК. Два видоспецифичных праймера с минус-цепью (Aa0.5 и Ag1.3) получены из последовательностей в межгенных спейсерах. Последовательность Ag1.3 находится примерно на 1,3 т.п.о. ниже по течению от A0; последовательность Aa0.5 находится примерно на 0,5 т.п.о. ниже по течению от A0. При амплификации ДНК комара в присутствии всех трех праймеров образуется фрагмент размером 1,3 т.п.н., если An. gambiae ДНК используют в качестве матрицы, и получают фрагмент размером 0,5 т.п.н., если An. используется ДНК arabiensis. Амплификация ДНК из An.gambiae/An. arabiensis hybrids продуцирует фрагменты размером 1,3 т.п.о. и 0,5 т.п.о. Ни один из диагностических фрагментов не образуется, когда ДНК других видов в An. gambiae комплекс используется в качестве матрицы.

Похожие статьи

  • Идентификация единичных экземпляров комплекса Anopheles gambiae методом полимеразной цепной реакции.

    Скотт Дж. А., Брогдон В. Г., Коллинз Ф. Х. Скотт Дж.А. и соавт. Am J Trop Med Hyg. 1993 г., октябрь; 49 (4): 520-9. doi: 10.4269/ajtmh.1993.49.520. Am J Trop Med Hyg. 1993. PMID: 8214283

  • Полимеразная цепная реакция видовой диагностический анализ для криптических видов Anopheles quadrimaculatus (Diptera: Culicidae) на основе последовательностей рибосомной ДНК ITS2.

    Корнел А.Дж., Портер К.Х., Коллинз Ф.Х. Корнел А.Дж. и др. J Med Entomol. 1996 янв; 33(1):109-16. doi: 10.1093/jmedent/33.1.109. J Med Entomol. 1996. PMID: 8906913

  • Дискриминация всех членов комплекса Anopheles punctulatus с помощью полимеразной цепной реакции — анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов.

    Биби СЗ, Сол А. Биби Н.В. и др. Am J Trop Med Hyg. 1995 ноября; 53 (5): 478-81. doi: 10.4269/ajtmh.1995.53.478. Am J Trop Med Hyg. 1995. PMID: 7485705

  • Мультиплексная ПЦР и филогенетический анализ последовательностей, полученных из домена D2 28S рДНК, позволили разделить представителей комплекса Anopheles culicifacies на две группы: A/D и B/C/E.

    Рагхавендра К., Корнел А.Дж., Редди Б.П., Коллинз Ф.Х., Нанда Н., Чандра Д., Верма В., Дэш А.П., Суббарао С.К. Рагхавендра К. и др. Заразить Генет Эвол. 2009 г.9 марта (2): 271-7. doi: 10.1016/j.meegid.2008.12.007. Epub 2008, 24 декабря. Заразить Генет Эвол. 2009. PMID: 19138765

  • Обзор использования рибосомной ДНК (рДНК) для дифференциации загадочных видов Anopheles.

    Коллинз Ф. Х., Паскевитц С.М. Коллинз Ф.Х. и соавт. Насекомое Мол Биол. 1996 г., февраль; 5 (1): 1–9. doi: 10.1111/j.1365-2583.1996.tb00034.x. Насекомое Мол Биол. 1996. PMID: 8630529Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

  • Статус устойчивости Anopheles arabiensis к инсектицидам на орошаемых и неорошаемых территориях в западной Кении.

    Орондо П.В., Ньянджом С.Г., Атиели Х., Гитуре Дж., Ондето Б.М., Очведо К.О., Омонди С.Дж., Казура Дж.В., Ли М.С., Чжоу Г., Чжун Д., Гитеко А.К., Ян Г. Орондо П.В. и др. Векторы паразитов. 2021 26 июня; 14 (1): 335. doi: 10.1186/s13071-021-04833-z. Векторы паразитов. 2021. PMID: 34174946 Бесплатная статья ЧВК.

  • Энтомологические и антропологические факторы, способствующие устойчивой передаче малярии в Кении, Эфиопии и Камеруне.

    Бамо Р., Роно М., Дегефа Т., Мидега Дж., Мбого С., Ингоси П., Камау А., Амбелу А., Бирхану З., Тушуне К., Копья Э., Авоно-Амбене П., Чуинкам Т., Нджиоку Ф., Юхалау Д., Антонио Нконджио С, Мванганги Дж. Баму Р. и соавт. J заразить дис. 27 апреля 2021 г .; 223 (12 Дополнение 2): S155-S170. дои: 10.1093/infdis/jiaa774. J заразить дис. 2021. PMID: 33906217 Бесплатная статья ЧВК.

  • Инструменты наблюдения за переносчиками нового поколения: чувствительные, специфичные, экономичные и актуальные с эпидемиологической точки зрения.

    Фарлоу Р., Рассел Т.Л., Беркот Т.Р. Фарлоу Р. и соавт. Малар Дж. 25 ноября 2020 г.; 19 (1): 432. doi: 10.1186/s12936-020-03494-0. Малар Дж. 2020. PMID: 33239015 Бесплатная статья ЧВК.

  • Оценка воздействия ларвицида с помощью Bti, а также просвещения и мобилизации населения в качестве дополнительных комплексных мероприятий по борьбе с переносчиками для борьбы с малярией в Кении и Эфиопии.

    Мутеро К.М., Окойо К., Гирма М., Мванганги Дж., Кибе Л., Нганга П., Кусса Д., Дииро Г., Аффогнон Х., Мбого К.М. Мутеро С.М. и соавт. Малар Дж. 3 ноября 2020 г.; 19 (1): 390. doi: 10.1186/s12936-020-03464-6. Малар Дж. 2020. PMID: 33143707 Бесплатная статья ЧВК.

  • Метод автоэнкодера и искусственной нейронной сети для оценки статуса четности диких комаров по спектрам ближнего инфракрасного диапазона.

    Милали М.П., ​​Киваре С.С., Говелла Н.Дж., Окуму Ф., Бансал Н., Боздаг С., Чарлвуд Д.Д., Майя М.Ф., Огома С.Б., Доуэлл Ф.Е., Корлисс Г.Ф., Сикулу-Лорд М.Т., Повинелли Р.Дж. Милали М.П. и др. ПЛОС Один. 2020 18 июня; 15 (6): e0234557. doi: 10.1371/journal.pone.0234557. Электронная коллекция 2020. ПЛОС Один. 2020. PMID: 32555660 Бесплатная статья ЧВК.

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Приложение 1.

Тестирование на вирусы EEE для бассейнов с комарами (RT-PCR в реальном времени) | Комары

СТР. 12 из 12

‹ Просмотреть оглавление

Перед проведением любого тестирования на вирусы EEE обратите внимание:

Вирус EEE является агентом HHS Select Agent, и поэтому на его хранение и использование распространяются строгие правила. Те, кто намеревается провести тестирование на вирусы EEE, должны ознакомиться с полной информацией и конкретными рекомендациями, которые можно найти на веб-сайте Федеральной программы отбора агентов 9.0173 до проведение тестирования на вирусы EEE.

Вкратце, образцы, признанные положительными на вирус EEE, должны быть задокументированы и переданы в Федеральную программу выбора агентов через форму 4 (https://www.selectagents.gov/form4.html) в течение 7 календарных дней после идентификации, и, если они не диагностированы в зарегистрированном учреждении, они должны быть переданы в зарегистрированное учреждение Select Agent или уничтожены.

Алгоритм тестирования . Все образцы проверяются на наличие вируса с использованием одного или обоих наборов праймеров/зондов, перечисленных ниже. Положительный результат в любом из отрицательных контролей аннулирует весь цикл. Неспособность положительного контроля генерировать положительный результат также аннулирует весь цикл. Образец, положительный с одним набором праймеров и отрицательный со вторым набором, классифицируется как сомнительный.

Примечание. В CDC, Отдел трансмиссивных болезней, Отделение арбовирусных заболеваний, наборы и протоколы, используемые группой энтомологии и экологии, описаны ниже; однако на рынке есть несколько других вариантов выделения РНК и ОТ-ПЦР в реальном времени.

Интерпретация результатов

Мы используем следующий алгоритм для оценки результатов.

Положительный:                            Значение Ct ≤ 37

Отрицательный:                            Значение Ct > 37

НАБОР ПЦР-ПЛАНШЕТ:

  1. Подготовьте праймеры и зонды в соответствии со следующими концентрациями:
    • Праймеры: 100 мкМ в воде без нуклеаз
    • Зонды: 25 мкМ в буфере TE
  2. Мастер-микс для ОТ-ПЦР в реальном времени следует готовить в «чистой комнате», физически отделенной от всех других лабораторных работ, с использованием специальных реагентов и оборудования (например, пипеток). Смешайте реагенты, перечисленные ниже, в центрифужной пробирке без РНКазы на льду. Используя набор Qiagen Quantitect Probe RT-PCR (№ 204443), приготовьте мастер-микс следующим образом: На реакцию:
    • 0 мкл мастер-микс
    • 2 мкл воды* (без нуклеазы)
    • 5 мкл 100 мкМ прямого праймера
    • 5 мкл 100 мкМ обратного праймера
    • Зонд 3 мкл 25 мкМ
    • 5 мкл фермента RT
      Добавьте примерно 5–10 реакций к общему количеству образцов (и учтите «без контрольных матриц» (NTC), положительные контроли и отрицательные контроли экстракции) и умножьте число на указанные выше объемы. Пример: У вас есть 20 образцов (12 неизвестных образцов, 2 положительных контроля, 2 отрицательных контроля и 4 NTC). Сделайте мастер-микс для 25-30 семплов.
    • NTC = смесь ТОЛЬКО без образца, для тестирования компонентов смеси ( контроль ПЦР )
    • Отрицательный контроль = экстрагированная вода ( контроль экстракции )
  1. Пипетка 45 мкл мастер-микса* либо в 0,2 мл оптические (специально для анализов в реальном времени; эмиссионная флуоресценция считывается через крышку) ПЦР-пробирки, либо в 96-луночный оптический ПЦР-планшет . Используйте резервуар и многоканальную пипетку для множества лунок.
  2. Пипетка 5 мкл РНК* в каждую лунку. Обратитесь к шаблону, чтобы убедиться, что нужный образец добавлен в соответствующую лунку. Не добавляйте ничего к семплам NTC (только мастер-микс).
    • См. советы по извлечению РНК ниже.

*Объем РНК, добавляемый на одну реакцию, обычно составляет 5 мкл, но может быть увеличен (до 25 мкл) за счет соответствующей корректировки количества воды в мастер-миксе. Например, если вы хотите протестировать 10 мкл РНК, уменьшите количество воды на реакцию до 13,2 мкл и добавьте в каждую лунку 40 мкл мастер-микса и 10 мкл РНК.

Условия циклирования (условия QIAGEN для RT-PCR в реальном времени):

1 Цикл Каждый :

50 ° C для 30 мин

95 ° C для 15 мин

45-циклов:

95°C в течение 15 с

60°C в течение 1 мин (этап сбора данных)

 

Праймеры и зонды EEEV. Для обнаружения РНК EEEV доступен один опубликованный и один неопубликованный набор праймеров/зондов.

Опубликовано: Lambert et al. 2003.

EEEV 9391 F                        ACACCGCACCCTGATTTTACA

EEEV 9459 R                        CTTCCAAGTGACCTGGTCGTC

EEEV 9414-probe               TGCACCCGGACCATCCGACCT

 

(unpublished)

EEEV 1898 F                               ACCTTGCTGACGACCAGGTC

EEEV 1968 R                               GTTGTTGGTCGCTCAATCCA

EEEV 1919-зонд                   CTTGGAAGTGATGCAAATCCACTCGACA

Наконечники для извлечения РНК

ПРИМЕЧАНИЯ. Избегайте загрязнения при работе с РНК

  • 4 Обеспечьте физическое разделение рабочих зон; один предназначен для предварительной амплификации РНК, работа (извлечение РНК), а другой — для производства мастер-микса .
  • Использование специального/отдельного оборудования в зонах до и после усиления; особенно пипетки и центрифуги.
  • Всегда надевайте перчатки; даже при работе с закрытыми пробирками.
  • Быстро открывайте и закрывайте пробирки, не прикасаясь к внутренней части.
  • Используйте пластиковые одноразовые пробирки и наконечники для пипеток, не содержащие РНКазы.
  • Используйте наконечники пипеток с аэрозольными блоками.
  • Используйте воду, не содержащую РНКазы.
  • Приготовьте все реагенты на льду.
    1. Образцы твердой фазы (комаров или тканей) сначала гомогенизируют в изотоническом буфере для получения жидкого гомогената. Образцы комаров гомогенизируют с использованием метода измельчения плакированных медью стальных шариков (BB) с использованием вортексера или мешалки (например, Qiagen Tissuelyser). Гомогенаты осветляют центрифугированием в микроцентрифуге (т.е. Эппендорф) при максимальной скорости в течение 5 минут для осаждения любого материала в виде частиц.